Beurteilung der Magenentleerung in Non-adipösen diabetischen Mäusen mit a [<sup&gt; 13</sup&gt; C]-Octansäure Atemtest

Zusammenfassung

Bestimmung der Magenentleerung mit einem nicht-invasiven [ ¹³ C]-Octansäure Atemtest zur Verfolgung Gastroparese bei weiblichen NOD LTJ Mäusen.

Zusammenfassung

Magenentleerung Studien an Mäusen haben durch die Unfähigkeit, Magenentleerung Veränderungen im gleichen Tier, da die am häufigsten verwendeten Techniken erfordern das Töten der Tiere und postmortale Erholung der Mahlzeit ^1,2 folgen beschränkt. Dieser Ansatz verhindert Längsschnittstudien Änderungen in Magenentleerung mit dem Alter und das Fortschreiten der Erkrankung zu bestimmen. Die allgemein verwendete ^[13 C]-octansäure Atemtest für Mensch ³ wurde für die Verwendung bei Mäusen und Ratten ^{4-6 7} modifiziert und wir zuvor gezeigt, dass dieser Test zuverlässig und den Veränderungen der Magenentleerung ist als Reaktion auf Arzneimittel und während diabetischer Krankheitsprogression ^8. In diesem Video-Präsentation das Prinzip und die praktische Umsetzung dieser modifizierten Test erläutert. Wie in der vorherigen Studie werden NOD LTJ Mäuse verwendet, ein Modell des Typ 1 Diabetes ^9. Ein Teil dieser Mäuse entwickeln die Symptome der Gastroparese, eine Komplikation der diabetes durch eine verzögerte Magenentleerung ohne mechanische Obstruktion des ^Magen-10 gekennzeichnet.

Dieses Papier zeigt, wie die Mäuse zum Testen zu trainieren, wie man den Test Mahlzeit zuzubereiten und erhalten 4 hr Magenentleerung Daten und wie die gewonnenen Daten zu analysieren. Der Kohlenstoff Isotopenanalysator in der vorliegenden Studie verwendet ist geeignet für die automatische Abtastung der Luftproben aus bis zu 12 Mäuse gleichzeitig. Diese Technik ermöglicht die Längs-Follow-up der Magenentleerung von größeren Gruppen von Mäusen mit Diabetes oder anderen langjährigen Krankheiten.

Einleitung

Dieses Manuskript beschreibt die technischen und methodischen Überlegungen in nicht-invasive Messung der Magenentleerung bei Mäusen beteiligt. Indem Sie das Protokoll hier beschrieben, Ermittler können zuverlässig und reproduzierbar zu folgen Veränderungen in Magenentleerung aufgrund der Entwicklung der Krankheit, untersuchen den Einfluss von pharmakologischen Wirkstoffen auf die Magenentleerung und folgen Sie die Reaktion der Magenentleerung auf die Behandlung der zugrunde liegenden Krankheiten oder Mängel ^{6,8, 11,12.} In früheren Veröffentlichungen, die Anwendung von ¹³ C Octansäure Atemtest wurde gezeigt, dass eine sinnvolle Methode zur Messun....

Protokoll

Ein. Schulung und Gewöhnung der Mäuse

1. Vor der Analyse, legte alle Mäuse in den Testkammern für 2-4 h mit konstanten Luftstrom, um sie auf die Prüfbedingungen zu gewöhnen. Dies reduziert deutlich Stress, die andernfalls möglicherweise abweichende Erfassung verzögerte Magenentleerung. Behandeln Sie die Maus auf die gleiche Weise, als ob die Magenentleerung Experiment ausgeführt wurde. Bereiten Eigelb (siehe weiter unten) ohne Zugabe von Octansäure und füttern 0,2 g jeder Maus.
2. Wiederholen Sie diesen Vorgang, bis die Mäuse ausreichend geschult sind (in der Regel 2-3 Mal). Die Mäuse sind typischerweise leicht so lange Gewöhnung als die Umgebungsbedin....

Ergebnisse

Eine repräsentative Daten aus drei verschiedenen Mäusen zu setzen ist in Abbildung 2 dargestellt. Der Graph stellt die schwarze Datenpunkte von einer Maus mit normaler Magenentleerung. Es zeigt die Fraktion von ¹³ C, die in der ausgeatmeten Luft als Prozentsatz der verabreichten Dosis pro Stunde als Funktion der Zeit, ausgedrückt zurückgewonnen wird. Die blaue Kurve ist von einer Maus mit einer beschleunigten Magenentleerung mit einem T Halbwert von 40 min und der rote Kurve ist von einer Mau.......

Diskussion

Die hierin beschriebene Technik ermöglicht wiederholten und nicht-invasiven in-vivo-Messung von festen Magenentleerung bei Mäusen. Dieses System hat den Vorteil, dass die Tiere nicht in der Messkammer zurückgehalten, so dass sie sich zu bewegen und sich frei drehen können. Da dies eine ungewohnte Umgebung, die Mäuse müssen noch geschult werden und gewöhnt den Testkammern zu Auswirkungen von Stress auf die Magenentleerung zu verhindern. Im Allgemeinen nehmen wir die Magenentleerung Daten zuverlässig sind, wenn d.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
NAMEN	UNTERNEHMEN	CAT NUMBER	KOMMENTARE
Eine Quelle ständiger Luftzufuhr, Durchfluss sowie Komposition	zentrale Luftversorgung in der Forschungsanlage
130 ml Probenahmekammer, der Lufteinlass und Luftauslass und Nahrungsmittel Verabreichung Öffnung Kunststoffrohre für Zuluft	In-Haus gebaut
Octansäure	Cambridge Isotope Laboratories (Andover, MA)	CLM-293-1
Um das Ei Mahlzeit zubereiten: kleines Becherglas 50 ml Plastikröhrchen Bunsenbrenner Ei Spachtel	Jeder Lieferant		Versuchen Sie,konsistent mit dem Ei Lieferanten da der Nährstoffgehalt und Schmackhaftigkeit der Eier und die Magenentleerung Einnahme der Mahlzeit beeinflussen können
Kohlendioxid Isotopenanalysator	Los Gatos Research Inc. (Mountain View, CA)