Summary
Разгадать ранних молекулярных механизмов, лежащих в основе рака простаты посвящения, новые и инновационные модели человеческих систем и подходов крайне необходимы. Потенциал предварительного простаты мезенхимы урогенитального синуса (UGSM), чтобы побудить население плюрипотентных стволовых клеток для формирования человеческого эпителия простаты является мощным инструментом в экспериментальном исследовании простаты.
Abstract
Прогресс в исследовании рака простаты строго ограничена наличием человеческого происхождения и гормонов наивные модели систем, которые ограничивают нашу способность понимать генетических и молекулярных событий, лежащих в основе заболевания простаты посвящения. К разработке более эффективных систем моделью для изучения человеческих простаты канцерогенеза, мы и другие воспользовались уникальной Pro-индуктивные простаты потенциал эмбриональных грызунов стромы простаты, называемая мезенхимы урогенитального синуса (UGSM). При рекомбинации с определенными плюрипотентных клеточных популяций, таких как эмбриональные стволовые клетки, UGSM индуцирует образование нормальной человеческой предстательной железы эпителия в тестостерон-зависимым образом. Такая система человека модель может быть использован для исследования и экспериментально проверить способность кандидата гены рака простаты восприимчивость ускоренными темпами по сравнению с типичными исследования трансгенных грызуна. Поскольку человеческие эмбриональные стволовые клетки (ЭСК) могут быть генетически модифицированные культуры в Усинг индуцируемой экспрессии гена или миРНК нокдауна векторов до ткани рекомбинации, такая модель облегчает тестирование функциональных последствий генов или их комбинации генов, которые, как полагают, способствуют или предотвращения канцерогенеза.
Методика выделения чистых популяций UGSM клетки, однако, является сложной задачей и зачастую требует обучения кто-то с предыдущим опытом, чтобы лично учить. Кроме того, прививка клеточных смесей под почечную капсулу с ослабленным иммунитетом хозяина может быть технически сложным. Здесь мы опишем и проиллюстрируем соответствующего уровня изоляции UGSM из эмбрионов грызунов и почечной капсулы имплантации тканей смесями, чтобы сформировать человека эпителия простаты. Такой подход, на современном этапе, в естественных условиях требуется ксенотрансплантации эмбриональных стволовых клеток; будущих приложений потенциально может включать в пробирке образование железы или использование индуцированных плюрипотентных стволовых клеток населения (ИПСК).
Introduction
Существует огромная потребность в более человеческих систем модели рака простаты. В частности, соответствующие системы человека модели нормальным, доброкачественных простаты тканей, которые могут быть генетически манипулировать, чтобы непосредственно различить роль специфических генов в инициации рака предстательной железы, было бы невероятно информативным. Появление геномной эры выявила многочисленные гены, которые могут играть определенную роль в формировании рака. Отсутствие экспериментальных систем организма человека модели, однако, значительно ограничивает наши возможности функционального тестирования и характеризуют кандидата простаты генов предрасположенности к раку. Идеальная модель системы будет способствовать быстрому и более быстрому функциональный анализ генов предрасположенности к раку в сочетании с соответствующими трансгенной системы модели грызунов. Кроме того, такие системы человека модель позволит молекулярной характеристики сигнальных механизмов простаты канцерогенеза в направлении открытия и проверки новых методов лечения, чтобыпредотвратить рак простаты формирования.
Эмбриональные стволовые клетки человека (ЭСК) способны образовывать ткани предстательной железы человека в качестве ксенотрансплантатов. В 2006 Taylor и соавт. Сообщили, что ЭСК могут быть вызваны, чтобы сформировать предстательной железы эпителия в естественных условиях при повторном сочетании с грызунами урогенитального синуса мезенхимы (UGSM) в течение периода времени 8-12 недель. 1 Эти исследования были основаны на предыдущей работе Кунья лаборатории показали, что грызуны эмбриональных UGSM предстательной железы может способствовать дифференциации стволовых клеток и эмбриональных эпителиальных клеточных популяций в естественных условиях. 2,3 простаты развивается из эмбриональных зачатков называется урогенитального синуса (ПХГ), а до 17-й день эмбрионального (мышь E17 ; E18 день у крыс) ПХГ могут быть удалены и физически разделены на эпителий (UGSE) и мезенхимы (UGSM) 4 Этот подход ткани рекомбинации значительно расширил наше понимание развития простаты и канцерогенеза, частности.LY фактора роста и гормональных сигнальных путей и молекулярные связи между простаты стромы и эпителия. 5-8 Этот метод предполагает экс сочетание естественных условиях из стволовых UGSM или эпителиальные клетки из того же или различных видов и этих сотовых / рекомбинантами ткань имплантируют и выращивали и ксенотрансплантата мыши в хосте. 4,9 После периода в естественных условиях роста, имплантат содержит простаты эпителиальных железистых структур встроенных в стромальной ткани. Далее окрашивание может быть проведена для определения того, такие структуры, которые действительно предстательной железы и человеческого происхождения. 10,11
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Это исследование было проведено в строгом соответствии с рекомендациями, содержащимися в руководстве по уходу и использованию лабораторных животных Национального института здоровья. Протокол был одобрен Чикагского университета Институциональные уходу и использованию животных комитета (IACUC, номера протоколов 72066 и 72231). Все операции проводили под наркозом, и все усилия были предприняты для уменьшения страданий. Эмбриональных стволовых клеток человека линии WA01 (H1; NIH-регистрации # 0043) был приобретен у WiCell (Мэдисон, Висконсин) и культивируют с использованием фидер-независимое протокола с использованием средств массовой информации mTeSR1 (Stem Cell Технологии; Ванкувере, Британская Колумбия). ЭС клетки были использованы в течение десяти проходов оттаивания.
1. Выделение урогенитального синуса от мыши или крысы Эмбрионы
- Усыпить временном беременных мышей (17,5 дня) или крысы (день 18,5) в виде ингаляций СО 2 в течение 5 мин. Смерть подтверждено прекращение жизненно важных функций у крыс. Затем разбейте его шею гуманно. Rв эвтаназии в этой точке. Спрей 70% этанола для стерилизации кожи живота и бока. Разрежьте кожу живота и мышечные слои, а затем вырезать матку, отделить эмбрионов крыс от амниотической и перерезал пуповину. Перенесите эмбрионы в 50 мл Сокол трубки, содержащей сбалансированный солевой раствор ледяной Хэнка (HBSS) и держать на льду. Плоды подвергаются эвтаназии путем обезглавливания с хирургическими ножницами.
- Наведите эмбриона в 100 мм чашки Петри. Пополам эмбриона с ножницами на уровне пупка (рис. 1А). Удалить желудка и тонкой кишки. Выявить яичников у женщин и яички эмбриона в мужской эмбрион (рис. 1В и 1С). (Яичники расположены в хвостовой полюсами почек. Яички находятся примерно на уровне мочевого пузыря). На данном этапе развития, UGSM изолированы от мужских и женских эмбрионов способны индуцировать предстательной железы эпителиальные линии в присутствии хозяинатестостерон. 4 После этой точки развития время, однако, предстательной железы начинают формироваться бутоны в UGSM и выделения чистых UGSM является весьма сложной задачей. 4
- Под микроскопом рассечение, разрезать брюшную стенку в средней линии с ножницами Vannas подвергать мочевого пузыря и задней стенки брюшной полости. Бесплатный верхних половых путей от привязанностей (в мужских эмбрионов, вырезать мочеточника, вольфова проток и проток Мюллеровых, в женских эмбрионов, вырезать и мочеточника Мюллеровых канал). Освободите мочевой пузырь из пуповины. Вырезать лобковой костью и прямо отдельно от передней стенки урогенитального синуса щипцами Дюмон тонкий кончик. И, наконец, отделить заднюю стенку урогенитального синуса из прямой кишки. Cut урогенитального синуса с мочевым пузырем на нижнем конце (из мочеиспускательного канала) и хранить урогенитального синуса целиком (с мочевым пузырем) в охлажденном льдом HBSS.
2. Разделение урогенитального синуса Мезенхима
- Передача урогенитального синуса, чтобы трубки сокола, содержащий 1% трипсина в Кальций (Са 2 +) и магния (Mg 2 +) бесплатно HBSS. Поместите пробирку в холодильнике при температуре 4 ° С в течение 75 мин.
- Удалить трипсина и нейтрализовать трипсином с 10% фетальной сыворотки Bovin (FBS) в среде DMEM/F12.
- Тщательно дразнить липкий мезенхимальных рукав из эпителиальных трубки с иглой или Dumont тонкий кончик пинцетом (поддержании эпителиальных трубки нетронутыми уменьшает вероятность загрязнения эпителиальные клетки мезенхимы, что может привести к грызун желез формирования вместе с стволовых клеток, полученных человека железистого эпителия) (рис. 1D). 12
- Передача UGSM в новую пробирку Фалькон содержащей среде DMEM/F12 + 10% FBS и 1% пенициллина / стрептомицина (пенициллина / стрептомицина, 0,5 мг / мл) + 1% заменимых аминокислот (NEAA) плюс 1 нМ R1881. PlAce трубки в инкубаторе при температуре 37 ° C с 5% CO 2 в течение ночи.
- Центрифуга ткани при 200g и отбросить супернатант. Промыть фосфатом солевой буфер (PBS) (не беспокоить ткани гранул).
- Добавить 0,2% коллагеназы (в DMEM/F12), чтобы повторно приостанавливать ткани. Выдержите в 37 ° C с нежным качалки в течение 1 часа.
- Энергично вихревой переваривание тканей три раза, пока она не станет однородной одноклеточные смеси и добавить среде DMEM/F12 + 10% FBS и 1% P / S + 1% NEAA + 1 нМ R1881 для нейтрализации коллагеназы.
- Центрифуга при 200 мкг, а затем вымыть путем повторного приостановления UGSM клеток в HBSS, и повторить три раза, чтобы полностью промыть UGSM. Наконец приостановить мезенхимальных клеток в DMEM/F12 и подсчета клеток с использованием гемоцитометра или устройства подсчета клеток.
- Диссоциируют ЭСК клетки, культивируемые использование без фидерного слоя протокол с mTeSR1 СМИ (клеточных технологий; Ванкувере, Британская Колумбия), используя Accutase пищеварения (Millipore, Billerica, MA). Вымойте ЭСК клеткиво время логарифмической фазы их роста в теплой DMEM/F12 среды, затем добавляют теплый раствор 1x Accutase, и инкубируют при 37 ° С в течение 15-20 мин, пока отдельные клетки не будут равномерно отделены от колоний. Добавить равное количество 1x определены ингибитор трипсина (Invitrogen; Grand Island, NY), чтобы нейтрализовать Accutase и осторожно пипетку вверх и вниз, чтобы смешивать и разбить скопления клеток. Пипетка клеток в центрифужную пробирку и центрифугируют в течение 3 минут при 200g и повторно приостанавливать осадок клеток в DMEM/F12 информации. Центрифуга трубки в течение 3 мин при 200g снова и удаления супернатанта, а затем повторно суспендировать в холодной HBSS или DMEM/F12 на желаемом объеме.
- Добавить ЭС клеток с соотношением 1:2,5 ВВ / мезенхимальных клеток. 3 Это будет клеточного состава 1E 5 UGSM клеток с 4E 4 ЭСК на 10 мл инъекций (одна крыса UGS обычно дает около 2E 6 мезенхимальных клеток). Центрифугируют при 200 х г в течение 5 мин и затем отбросить супернатант. Повторное приостановить с 75% Матригель (BD Biosciences,Сан - Хосе, Калифорния, смешивают с 25%-ным холодным HBSS простота обращения) и поместите трубку на льду к югу от почечной капсулы инъекции.
3. Трансплантация тканей рекомбинантной Под капсулу почки
- Подготовить стерильный хирургический участок.
- Обезболить мужчины бестимусной голых мышей с кетамином / ксилазина IP, использование свежей смесью содержащей 1:01:08 соотношение кетамина: ксилазина: физиологический раствор. Дозирование будет 100 мг / кг кетамина и 2,5 мг / кг Ксилазин. Животные реагируют на ноги щепотку должны быть полностью под в течение 20-30 мин.
- Хирургической подготовки мыши после бритья место операции (если не использованием голых мышей), очищающие с тремя переменного салфетки 70% спирта с последующим бетадин раствора и применение хирургической простыни.
- Положить глаз влагу мазью (Altalube глазная мазь) в глаза мыши, чтобы предотвратить высыхание во время анестезии.
- Во время операции частоты дыхания и температуры тела у мышей контролируется. Интенсивность дыхания шоULD быть устойчивой и поддерживается в пределах 40-90 вдохов / мин. Температура тела контролируется с соблюдением цвет слизистых оболочек и розовый ступнях.
- Сделайте 1,0 см длиной продольный разрез кожи на спине. Продолжают сокращать брюшную стенку в 0,5 см продольный разрез.
- Осторожно сожмите почки из брюшной полости и держать влажную поверхность с помощью почек капель стерильного физиологического раствора.
- Аккуратно проколите капсулу почки, используя пустой 27 размера иглы шприца. Очень мелкий прокол достаточно. Это будет то, где вы вставляете вашу тупую иглу для введения сотовой смеси.
- Заполнить 28 калибра тупой иглой шприца с 10 мкл вашего мобильного смеси. Аккуратно вставьте месте прокола и проникают паренхимы почки, чтобы достичь области под капсулу почки. Введите 10 мкл клеточной смеси с образованием болюса на почки под почечную капсулу. Снятие иглы.
- Вернуться почки к Абдоминала полости. Закрепите мышечного слоя брюшины с 4-0 швами нейлоном.
- Закройте кожи либо шва или скобы.
- Очистка крови из кожи с использованием стерильного физиологического раствора.
4. Послеоперационный обезболивания и мониторинга
- Введите животных с бупренорфин (0,1 мг / кг каждые 12 ч) или кетопрофен (3-5 мг / кг в физиологическом растворе каждые 12 ч), чтобы управлять послеоперационной боли, и 1 мл 37 ° С в солевом ф держать животное теплой и предотвратить обезвоживание.
- Поместите животное в чистую клетку и поместить его на мягкий грелку.
- Отправить обратно в животных вивария, как только они в сознание и движутся в пределах клетки.
- Соблюдайте животных ежедневно в течение неожиданных признаков болезни и инфекции для следующих трех дней. Мышей контролируется с наблюдении за деятельностью в клетках включая доступ к пище и воде 1 день после операции. Если мыши обладают меньшим деятельности, кетопрофен внутрибрюшинно объявлениеслужил снова раз в день.
- Снимите кожу скобы или швы через 2 недели после операции.
- Ксенотрансплантата ткани могут быть собраны в начале 8 недель после операции. Ксенотрансплантаты могут быть отображены в естественных условиях использования малых животных ультразвука (рис. 2А), и фиксированные ткани могут быть срезы и окрашивали для различных белков с использованием иммуногистохимии (рис. 3).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Основываясь на отчете захватывающих Тейлор и др.., Наша лаборатория разработала прививку протокол, используя широко используется H1 (NIH назначенных WA01, генетически мужчины) человека линию эмбриональных стволовых клеток. 1 по этой статье были тщательно протестированы для контроля качества и является нормальной кариотипически 13 При культивировании надлежащим образом, ЭСК клетки могут быть сохранены, расширены и замораживали в недифференцированных плюрипотентных состоянии и использовании без фидерного слоя методом культуры (без фидерного слоя систем с помощью коммерчески доступных клеточных технологий; Ванкувера до н.э.).. 14 Наша Протокол использует одноклеточных суспензий ЭСК в сочетании с одним из клеточных суспензий E18 крысы UGSM и вводят под капсулу почки взрослого самца мышей с ослабленным иммунитетом. Как важно, контроль, имплантированный USGM сама по себе не дает никакого заметного роста, в то время как ЭСК имплантированы без UGSM форме большого тератомы (рис. 2В). 15 По нашему опыту, имплантатAtion из UGSM не загрязняя эпителиальных клеток крысы никогда не приводит к росту тканей, в то время рекомбинации UGSM плюс ЭСК приводит к устойчивому росту более 80% времени (после 8 недель размеры варьируются от 1 мм до 5 мм, с более чем 80% от ткани содержащих железистый эпителий). В рекомбинантами содержащих как и ЭСК UGSM, раннее формирование железистых наблюдается через 4 недели, а после 8 недель полностью сформированные, простатического специфического антигена (ПСА)-положительных человеческих эпителия простаты образуется (рис. 3). Эти железы содержат андрогенных рецепторов (АР)-положительных просвета-секреторных клеток, которых нет одной недели после кастрации хозяина. Важно отметить, что эти железы положительным для человека конкретного и простата-специфический белок ПСА. Далее документы окрашивание, что такие железах человека кажутся доброкачественных, так как они не экспрессируют альфа-methylacyl-КоА рацемаза (AMACR), которая является рак простаты-специфического маркера 16.
ether.within-страница = "всегда"> 
Рисунок 1. Выделение урогенитального синуса от E18.5 эмбрионов крыс. A. E18.5 эмбрионов крыс. Белая сплошная линия показывает положение, чтобы делить пополам эмбриона. B. E18.5 мужчин эмбриона крысы. Черные пунктирные линии указывают на мочевой пузырь, урогенитального синуса, прямой кишки и развивающихся яичках. C. E18.5 эмбриона женского пола, крысы. Черные пунктирные линии указывают на мочевой пузырь, урогенитального синуса и матки. D. мочевом пузыре и мочеполовой синус удалены из E18.5 эмбрионов крыс. В то время как сплошная линия показывает положение для удаления мочевого пузыря. Черный пунктирной линии и белой стрелки указывают на эпителиальные трубки. Белая голова стрелка указывает на мочеполовую мезенхимы пазухи.
7/50327fig2.jpg "Alt =" Рисунок 2 "FO: Content-ширина =" 4 дюйма "FO: SRC =" / files/ftp_upload/50327/50327fig2highres.jpg "/>
Рисунок 2. Ультразвуковое исследование и валовой морфологии в естественных условиях ксенотрансплантаты ткани, полученные из ЭСК и UGSM. А. Ультразвуковое исследование растущих ксенотрансплантатов позволяют живого животного анализов в ходе эксперимента. Снимок был сделан 8 недель после операции с применением Vevo 2100 небольших животных ультразвуковое (Visualsonics; Toronto, ON). . Обведенная область представляет растущая ткань ксенотрансплантатом на почки поверхности В. В экспериментальных конечной точки, ЭСК клетки в сочетании с крысой UGSM (rUGSM) образуют видимой массы ткани на поверхности почки (левая панель); ЭСК клетки имплантированы только образуют большие тератомы как Ожидается (средняя панель) и UGSM имплантированы только не реализуется какой-либо видимой структурой (правая панель).
. JPG "Alt =" Рисунок 3 "FO: Content-ширина =" 6 дюймов "FO: SRC =" / files/ftp_upload/50327/50327fig3highres.jpg "/>
Рисунок 3. Формирование человеческого эпителия простаты из эмбриональных стволовых клеток человека линии WA01 (H1). ЭС клетки объединяют с грызунами UGSM и имплантируется под капсулу почки интактных самцов голых мышей. После периода роста в течение 8 недель, простаты человека железистого эпителия формируется как документировано AR, Р63, и человеческие ограниченные PSA окрашивания. Через неделю после кастрации хозяина, AR-положительными, PSA-положительных просвета слой отсутствует, документирование характеристика андроген-зависимость. Простата тканях доброкачественных о чем свидетельствует отсутствие окрашивания AMACR. Кроме того, chrĂ-позитивные нейроэндокринные клетки были обнаружены. Номера злокачественной ткани простаты человека был использован в качестве контроля для AR, PSA, и p63; опухоли простаты использовался в качестве положительного контроля для онкоспецифической AMACR.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Ткань рекомбинации с использованием UGSM является чрезвычайно полезным методом исследовать развитие предстательной железы и молекулярных событий, ведущих к инициированию рака предстательной железы. Индуктивный потенциал UGSM была использована для многочисленных приложений в простате исследований, к ним относятся повышение опухоли предстательной железы принимают клеточных линиях и опухолях, изучая эпителиальные-стромальных взаимодействий и формирования межвидовых рекомбинантами простаты 7,17-20 надлежащей подготовки UGSM. Однако важно, чтобы экспериментальный успех, как загрязняющие грызунов эпителия приведет к формированию железистой и может смешали результаты. Таким образом, разделение UGSM от UGSE (шаг 2.4) на сегодняшний день является наиболее важным и наиболее сложным шагом в протоколе. Для контроля такого загрязнения, использование методов различать виды настоятельно рекомендуется, а также дополнительные экспериментальные подставку, используя UGSM сама по себе не в документ № образование из железистой CELLULAR загрязнений. +12
Недавнее развитие без фидерного слоя ЭСК культивирования реагенты и методы позволяют чистые популяции ЭСК клетки быть культурным, и расширенных и криоконсервированных. 14 Кроме того, расширение использования лентивирусный доставки генов позволяет стабильное включение геномных и экспрессию генов, представляющих интерес. 21,22 В совокупности эти достижения позволяют для генетической манипуляции чистых культур ЭС и, в сочетании с индуктивными потенциал предстательной железы эмбриональных UGSM, позволит в естественных условиях генерации человеческой предстательной железы железы выражающий определенный интерес генов. Кроме того, эта техника будет поддается индуцированных плюрипотентных стволовых клеток линий (ИПСК), полученных из взрослых хозяев и из генетически модифицированных клеток. 23,24 Использование определены белки, мы показываем, что такая чЭСК человеческого эпителия простаты появляются очень похожи на взрослых эпителия предстательной железы человека, но на глобальном уровне молекулярных обязательно будетнекоторые различия в экспрессии генов, которые должны быть приняты во внимание. Для учета этого, следователи должны использовать расширенную размера выборки и рассмотреть лазерного захвата микродиссекции (LCM) подхода и сравнительного анализа экспрессии генов платформ для проверки молекулярных профилей их тканей по сравнению с взрослым тканей человека. Тем не менее, формирование человеческого железистого эпителия простаты использованием серийно-культурной и без фидерного слоя линии стволовых клеток имеет потенциал для облегчения многочисленных молекулярных исследований, относящихся к функции простаты и рак посвящения.
Наша методика использует одноклеточных суспензий как UGSM и ЭСК, которая позволяет использовать лентивирусные инфекции и поток сортировка подходов, а также более точный контроль клеточного количествах. Это, однако, может уменьшаться индуктивного потенциала UGSM. Альтернативный подход заключается в использовании недиссоциированных UGSM (после шага 2.5), перед коллагеназой)и либо прямой инкубации с ЭС клетки или клетки вложение в раствор коллагена. 4 имплантировать эти ткани под почечную капсулу, альтернативный метод было бы сделать разрез в почечную капсулу, создания небольшой карман под почечную капсулу сверху почек и физически размещать клеточную массу в пределах этого кармана. 4,20
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Авторы не имеют никакого конфликта интересов с предоставленную работу.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Hank’s Balanced Salt Solution (HBSS) | GIBCO | 14170 | |
| DMEM/F12 | GIBCO | 11330 | |
| R1881 | Sigma | 965-93-5 | Mix to 1 ug/ml in Ethanol (1,000x stock) |
| NEAA | GIBCO | 11140 | |
| Pen-Strep Solution | GIBCO | 15070 | 100x stock |
| Matrigel | BD Biosciences | 354230 | |
| KETASET (ketamine hydrochloride) | Fort Dodge Animal Health | NDC 0856-2013-01 | 100 mg/ml; dilute 1:10 in sterile saline |
| AnaSed (xylazine) | VET-A-MIX, Inc. | NADA 139-236 | 20 mg/ml; dilute 1:10 in sterile saline |
| Trypsin | BD Biosciences | 215240 | |
| Collagenase | Sigma | C2014 | |
| Ketoprofen | Fort Dodge | NDC 0856-4396-01 | 100 mg/ml; dilute 1:1,000 in sterile saline |
| Altalube eye ointment | Altaire Pharmaceuticals, Inc. | NLC 56641-19850 | |
| Leica MZ16 F Stereomicroscope | Leica | Any good dissecting scope can be used. | |
| Vannas spring scissors | Fine Science Tools | 15001-08 | |
| Syringe | Hamilton | 84855 | |
| Hamilton Needle, Small RN, 28 gauge, 0.5inches, Point Style #3 (Blunt) | Hamilton | 7803-02 | Custom Needle |
| Ethanol Prep Pads | Fisher Scientific | 06-669-62 | |
| Sterile Gauze Pads | Fisher Scientific | 22-415-469 | |
| Ethicon Vicryl Suture (4-0 FS-2) | MedVet International | J392H | Needle-in, dissolvable suture |
| Autoclip 9 mm Wound Clips | Becton Dickenson | 427631 | |
| PVP Iodine Prep Pads | Fisher Scientific | 06-669-98 | |
| Dissector scissor with blunt end | Fine Science Tools | 14072-10 | |
| Dumont fine tip forceps | Fine Science Tools | 11252-50 | |
| Needle holder with Scissor | Fine Science Tools | 12002-14 |
References
- Taylor, R. A., et al. Formation of human prostate tissue from embryonic stem cells. Nat. Methods. 3, 179-181 (2006).
- Cunha, G. R., Chung, L. W. Stromal-epithelial interactions--I. Induction of prostatic phenotype in urothelium of testicular feminized (Tfm/y) mice. J. Steroid Biochem. 14, 1317-1324 (1981).
- Cunha, G. R., Chung, L. W., Shannon, J. M., Taguchi, O., Fujii, H. Hormone-induced morphogenesis and growth: role of mesenchymal-epithelial interactions. Recent Prog. Horm. Res. 39, 559-598 (1983).
- Staack, A., Donjacour, A. A., Brody, J., Cunha, G. R., Carroll, P. Mouse urogenital development: a practical approach. Differentiation. 71, 402-413 (2003).
- Cunha, G. R., et al. Normal and abnormal development of the male urogenital tract. Role of androgens, mesenchymal-epithelial interactions, and growth factors. J. Androl. 13, 465-475 (1992).
- Cunha, G. R., et al. Growth factors as mediators of androgen action during the development of the male urogenital tract. World J. Urol. 13, 264-276 (1995).
- Aboseif, S., El-Sakka, A., Young, P., Cunha, G. Mesenchymal reprogramming of adult human epithelial differentiation. Differentiation. 65, 113-118 (1999).
- Marker, P. C., Donjacour, A. A., Dahiya, R., Cunha, G. R. Hormonal, cellular, and molecular control of prostatic development. Dev. Biol. 253, 165-174 (2003).
- Cunha, G. R., Sekkingstad, M., Meloy, B. A. Heterospecific induction of prostatic development in tissue recombinants prepared with mouse, rat, rabbit and human tissues. Differentiation. 24, 174-180 (1983).
- Van der Griend, D. J., et al. The Role of CD133 in Normal Human Prostate Stem Cells and Malignant Cancer Initiating Cells. Cancer Res. 68, 9703-9711 (2008).
- Van der Griend, D. J., Konishi, Y., De Marzo, A. M., Isaacs, J. T., Meeker, A. K. Dual-label centromere and telomere FISH identifies human, rat, and mouse cell contribution to Multispecies recombinant urogenital sinus xenografts. Prostate. , (2009).
- Vander Griend, D. J., Konishi, Y., De Marzo, A. M., Isaacs, J. T., Meeker, A. K. Dual-label centromere and telomere FISH identifies human, rat, and mouse cell contribution to Multispecies recombinant urogenital sinus xenografts. Prostate. 69, 1557-1564 (2009).
- Thomson, J. A., et al. Embryonic stem cell lines derived from human blastocysts. Science. 282, 1145-1147 (1998).
- Ludwig, T. E., et al. Feeder-independent culture of human embryonic stem cells. Nat. Methods. 3, 637-646 (2006).
- Prokhorova, T. A., et al. Teratoma formation by human embryonic stem cells is site dependent and enhanced by the presence of Matrigel. Stem Cells Dev. 18, 47-54 (2009).
- Hameed, O., Sublett, J., Humphrey, P. A. Immunohistochemical stains for p63 and alpha-methylacyl-CoA racemase, versus a cocktail comprising both, in the diagnosis of prostatic carcinoma: a comparison of the immunohistochemical staining of 430 foci in radical prostatectomy and needle biopsy tissues. Am. J. Surg. Pathol. 29, 579-587 (2005).
- Wang, Y. A human prostatic epithelial model of hormonal carcinogenesis. Cancer Res. 61, 6064-6072 (2001).
- Yao, V., Parwani, A., Maier, C., Heston, W. D., Bacich, D. J. Moderate expression of prostate-specific membrane antigen, a tissue differentiation antigen and folate hydrolase, facilitates prostate carcinogenesis. Cancer Res. 68, 9070-9077 (2008).
- Cunha, G. R., Cooke, P. S., Kurita, T. Role of stromal-epithelial interactions in hormonal responses. Arch. Histol. Cytol. 67, 417-434 (2004).
- Xin, L., Ide, H., Kim, Y., Dubey, P., Witte, O. N. In vivo regeneration of murine prostate from dissociated cell populations of postnatal epithelia and urogenital sinus mesenchyme. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100, Suppl 1. 11896-11903 (2003).
- Yu, X. Lentiviral vectors with two independent internal promoters transfer high-level expression of multiple transgenes to human hematopoietic stem-progenitor cells. Mol. Ther. 7, 827-838 (2003).
- Anderson, J. S., Bandi, S., Kaufman, D. S., Akkina, R. Derivation of normal macrophages from human embryonic stem (hES) cells for applications in HIV gene therapy. Retrovirology. 3, 24 (2006).
- Takahashi, K., Yamanaka, S. Induction of pluripotent stem cells from mouse embryonic and adult fibroblast cultures by defined factors. Cell. 126, 663-676 (2006).
- Maherali, N., et al. A high-efficiency system for the generation and study of human induced pluripotent stem cells. Cell Stem Cell. 3, 340-345 (2008).
