Verfahren zur Synthese von luftempfindlichen Titan-und Vanadiumantikrebsmitteln wird beschrieben, zusammen mit der Bewertung der zytotoxischen Aktivität gegenüber menschlichen Krebszelllinie mit dem MTT-Assay.
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Methodenartikel
Anti-Krebs-Metall-Komplexe: Synthese und Zytotoxizität Bewertung durch die MTT-Assay
* These authors contributed equally
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Titan (IV) und Vanadium (V)-Komplexe sind hochwirksamen Antikrebsmittel. Eine Herausforderung bei ihrer Synthese bezieht sich auf ihre hydrolytische Instabilität, deshalb sollte deren Herstellung unter einer inerten Atmosphäre durchgeführt werden. Bewertung der Antitumor-Aktivität dieser Komplexe können durch den MTT-Assay erzielt werden.
Der MTT-Test ist ein kolorimetrischer Assay, der auf Lebensfähigkeit enzymatischen Reduktion von MTT zu Formazan-Molekül, wenn es um lebensfähigen Zellen ausgesetzt ist. Das Ergebnis der Reduzierung ist ein Farbwechsel des MTT-Molekül. Absorptionsmessungen relativ zu einem Regler zum Einstellen des Prozentsatzes der verbleibenden lebensfähigen Krebszellen nach der Behandlung mit verschiedenen Konzentrationen einer Testverbindung, die Aktivität gegen Krebs der Verbindung und ihrer IC 50-Werte umgerechnet wird. Der MTT-Assay ist in Zytotoxizität Studien aufgrund ihrer Genauigkeit, Schnelligkeit und relative Einfachheit weit verbreitet.
Hier stellen wir vorschickte detailliertes Protokoll für die Synthese von luftempfindlichen Metall basierte Medikamente und die Lebensfähigkeit der Zellen-Messungen, einschließlich der Vorbereitung der Zellplatten, die Inkubation der Verbindungen mit den Zellen, die Lebensfähigkeit Messungen unter Verwendung des MTT-Tests, und die Bestimmung der IC 50-Werte.
Einleitung
Die Chemotherapie ist immer noch eines der Hauptgerichte von Behandlungen in der Klinik für verschiedene Krebserkrankungen eingesetzt und damit überwiegende Teil der Forschung wird weltweit mit dem Ziel, neue und verbesserte Krebsmedikamente entwickeln, durchgeführt. Solche Studien beginnen meist in der chemischen Ebene, mit der Gestaltung und Herstellung von Verbindungen, gefolgt von biologischen Auswertung der zytotoxischen Eigenschaften in vitro. Die Lebensfähigkeit der Zellen kann durch verschiedene Tests, die Informationen über die Zellaktivität bieten 1-2 bewertet werden.
Cisplatin ist ein Beispiel eines Platinko....
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Protokoll
- Vorbereitung des V (V)-Komplex (Abbildung 2); 18 Schritte 1.1-1.4 Verhalten in einem Handschuhkasten, wenn ein Handschuhfach nicht verfügbar ist, fahren Sie mit der alternativen Schritte 2 (2,1 bis 2,6).
- Man löst 0.42 mmol des Liganden L H 2 in trockenem THF und unter Rühren zu einer Lösung äquivalenter Mengen VO (O i Pr) 3 in THF hinzu.
- Das Reaktionsgemisch wird bei Raumtemperatur für 15 min und entfernt die flüchtigen Bestandteile im Vakuum.
- In kaltem Hexan und entfernen Sie es unter Vakuum. Ein dunkelviolett Pulver sollte in einer quantitativen Ausbeute erhalten werden.
- Wiegen 8 mg d....
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Ergebnisse
Die Komplexe wurden basierend auf den festgelegten Verfahren 18,28 und ihre Reinheit durch NMR und Elementaranalyse ausgewertet werden vorbereitet.
Die aus dem MTT-Test erhaltenen Daten analysiert, um die Zytotoxizität der Verbindung 18,21 auszuwerten. Zunächst Subtraktion des Blindkontrolle Absorptionswert von allen anderen Werten durchgeführt wird. Zweitens wird das Lösungsmittel THF Steuerwert auf 100% Rentabilität eingestellt, da keine wachstumshemmende Verbindung w.......
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Diskussion
Die in dieser Handschrift beschriebenen Methode kombiniert die chemische Synthese mit biologischen Zelllebensfähigkeitstest. Wie bei allen biologischen Methoden zur lebensfähigen Zellen, ist es wichtig, in einer laminaren Haube arbeiten und sterilen Bedingungen, einschließlich der Verwendung von sterilen organischen Lösungsmitteln zu halten. Auch sollte der Herstellung und Lagerung von hydrolytisch instabilen Metall basierte Medikamente unter inerten Bedingungen durchgeführt werden, für das Handschuhfach oder-Schlenk-Te.......
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Offenlegungen
Die Autoren erklären, sie haben keine finanziellen Interessen konkurrieren.
Danksagungen
Die Finanzierung wurde von der Europäischen Forschungsrates des Siebten Rahmenprogramms der Europäischen Gemeinschaft (FP7/2007-2013) empfangen / ERC-Finanzhilfevereinbarung Nr. [239603]
....Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Reagenz/Material | |||
| Fötales Rinderserum (FBS) | 04-007-1A | ||
| Hexan AR | Gadot | 830122313 | Getrocknet mit einem Lösungsmitteltrocknungssystem |
| HT-29 Zelllinie | ATCC | HTB-38 | |
| Isopropanol AR | Gadot | 830111370 | |
| L-Glutamin | Biological Industries | 03-020-1B | |
| MTT | Sigma-Aldrich | M5655-1G | |
| Penicillin/Streptomycin Antibiotika | Biological Industries | 03-031-1B | |
| RPMI-1640 mit Phenolrot mit L-Glutamin | Sigma-Aldrich | R8758 | |
| RPMI ohne Phenolrot | Biological Industries | 01-103-1A | |
| Tetrahydrofuran (THF) AR | Gadot | 830156391 | mit einem Lösungsmitteltrocknungssystem getrocknet |
| Ti(OiPr)4 | Sigma-Aldrich | 205273-500ML | feuchtigkeitsempfindliches |
| Trypsin/EDTA | Biological Industries | 03-052-1B | |
| VO(OiPr)3 | Sigma-Aldrich | 404926-10G | Feuchtigkeit sensitive |
| Ausrüstung | |||
| 12-Kanal-Pipette 30-300 μ l | Thermo Scientific | ||
| 12-Kanal-Pipette 5-50 μ l | Finnpipette | ||
| 75 cm2 Kolben | NUNC | 156472 | |
| 96-Well-Platte mit Deckel (flacher Boden) | NUNC | 167008 | |
| CO2 Inkubator | Binder | APT.line C150 | |
| Gegenkammer | Marienfeld-Superior | 650030 | |
| Eppendorf Fläschchen | KARTELL | ||
| Handschuhfach | M. Braun | ||
| Laminar Flow Hood | ADS LAMINAIRE | OPTIMALE 12 | |
| Mikroplatten-Reader Spektralphotometer | Bio-Tek | El-800 | |
| Mikroskop | Nikon | Eclipse TS100 | |
| Pipette 20-200 μ l | Finnpipette | ||
| Pipette 5-50 μ l | Finnpipette |
Referenzen
- Niles, A. L., Moravec, R. A., Riss, T. L. Update on in vitro cytotoxicity assays for drug development. Expert Opinion on Drug Discovery. 3, 655-669 (2008).
- Hatok, J., et al. In vitro assays for the evaluation of drug resistance in tumor ce....
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Nachdrucke und Genehmigungen
