Wir demonstrieren einen einfachen Multiplex-PCR-Assay für das schnelle Screening und die Typisierung von Staphylococcal Cassette Chromosome mec (SCCmec) Typ I-V auf Methicillin-resistenten Staphylococcus aureus und stellen einige der wichtigen Schritte und Verfahrensnuancen bereit, die ihn für die Anpassung dieses Assays an einzelne Labore erfolgreich machen.
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In diesem Artikel
Erratum-Hinweis
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Zusammenfassung
Zusammenfassung
Staphylokokken Cassette Chromosome mec (SCC mec) Typisierung ist eine sehr wichtige molekulare Werkzeug f
Einleitung
Methicillin-resistente Staphylococcus aureus (MRSA) erworben hat und in ihr Genom ein 21-67-kb mobilen genetischen Elements integriert, bezeichnet die Staphylokokken-Kassette Chromosom mec (SCC mec), die Methicillin-Resistenz (mecA-Gen) und anderen Antibiotika-Resistenz-Determinanten 1 birgt . SCC mec wird durch die Gegenwart von endst....
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Protokoll
Diese Verfahren sollten in einem zertifizierten Labor Sicherheitsstufe 2 durchgef....
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Ergebnisse
Dieses aktualisierte M-PCR kann SCCmec-Typen I–V sowie die wichtigsten Untergruppen von SCCmec IV bestimmen (einteilen). Der Test zielt auf eindeutige und spezifische Loci von SCCmec I, II, III, IVa, IVb, IVc, IVd, IVE und V ab und detektiert gleichzeitig das mecA-Gen. Eine vorläufige Identifizierung von SCCmec VI und VIII ist ebenfalls möglich, erfordert jedoch weitere Tests zur Bestätigung. Abbildung 3 veranschaulicht repräsentative SCCmec-I–VI- und.......
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Diskussion
Der hier beschriebene Multiplex-PCR-Assay bietet eine einfache, zuverlässige Methode zur Klassifizierung von Typen und Hauptsubtypen von SCCmec I-V in Staphylokokken bei gleichzeitiger Unterscheidung von MRSA und MSSA. Der Assay ist robust, lässt sich bequem in einer einzigen PCR-Reaktion durchführen und die Ergebnisse sind leicht zu interpretieren. Der Assay weist insofern Einschränkungen auf, als er auf einzelne Loci innerhalb jedes SCC-Mec-Typs abzielt, bietet jedoch keine umfassende ccr- und mec.......
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Offenlegungen
Es wurden keine Interessenkonflikte angegeben.
Danksagungen
Wir danken T. Ito, K. Hiramatsu, R. Daum, H. de Lencastre und D. Coleman für das freundliche Geschenk einiger Referenzstämme, die in dieser Studie verwendet wurden. Diese Arbeit wurde zum Teil finanziell unterstützt vom Centre for Antimicrobial Resistance (CAR), Alberta Health Services-Calgary/Calgary Laboratory Services/University of Calgary.
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Tryptic Soja | Agar Fisher (BD) | CA90002-700 (236920) | |
| Steriles destilliertes Wasser | Life Technologies | 10977-015 | |
| Platinum Taq: inkl. 10x PCR Puffer und 50 mM MgCl2 | Life Technologies | 10966-034 | |
| 100 mM dNTP | Life Technologies | 10297-018 | |
| Tris Base | Sigma-Aldrich | T6066 | |
| Borsäure | Sigma-Aldrich | B7901 | |
| EDTA | Life Technologies | 15576-028 | |
| Agarose | Life Technologies | 16500-500 | |
| Glycerol | Life Technologies | 15514-011 | |
| Bromphenolblau | Sigma-Aldrich | B8026 | |
| 1Kb+ DNA-Leiter | Leben Technologies | 10787-026 | |
| Ethidiumbromid | Sigma-Aldrich | E7637 | |
| 1,5 ml Mikrozentrifugenröhrchen | VWR (Axygen Scientific) | 10011-700 | |
| Kulturstäbchen | VWR | CA10805-018 | |
| PCR-Röhrchen | Diamed | AD0210-FCN (neu #: DIATEC420-1250) | |
| Zentrifuge | Eppendorf | 5417c | |
| Wärmeblock | VWR | 13259-030 / 13259-286 | |
| Thermalcycler | Applied Biosystems (2720) | 4359659 | |
| Horizontale, tauchfähige Gelelektrophoresekammer mit Gelform | BioRad | 170-4469 | |
| Stromversorgung | BioRad | 164-5050 | |
| Wippschüttler | VWR | 40000-300 | |
| Molekular Imager Gel Doc System | BioRad | 1708170 |
Referenzen
- IWG-SCC. Classification of staphylococcal cassette chromosome mec (SCCmec): guidelines for reporting novel SCCmec elements. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 53 (12), 4961-4967 (2009).
- Ito, T., Hiramatsu, K., Tomasz, A., de Lencastre, H., Perreten, V., Holden, M., et al.
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Nachdrucke und Genehmigungen
Erratum
Formal Correction: Erratum: Multiplex PCR Assay for Typing of Staphylococcal Cassette Chromosome Mec Types I to V in Methicillin-resistant Staphylococcus aureus
Posted by JoVE Editors on 3/19/2019. Citeable Link.
An erratum was issued for: Multiplex PCR Assay for Typing of Staphylococcal Cassette Chromosome Mec Types I to V in Methicillin-resistant Staphylococcus aureus. There was a typo in Table 1.
In Table 1, the Oligonucleotide sequence for Type III-F5 was updated from:
TTCTCATTGATGCTGAAGCC
To:
GAAACTAGTTATTTCCAACGG
