Utero-Tubenembryotransfer und Vasektomie im Maus-Modell

Zusammenfassung

Utero-Eileiter-Embryo-Transfer verwendet die utero-Eileiter-Kreuzung als Barriere, um den Embryo Abfluss, die bei der Durchführung von Uterus Übertragung auftreten können, zu verhindern. Vasektomierten Männchen sind erforderlich, um pseudo-Empfänger für Embryotransfer erhalten. Beide Techniken werden diskutiert.

Zusammenfassung

Die Übertragung der Präimplantationsembryonen zu einem Surrogat Frau ist ein erforderlicher Schritt für die Herstellung von genetisch veränderten Mäusen, um zu studieren oder die Auswirkungen von epigenetischen Veränderungen während Präimplantations Entwicklung bei zukünftigen Entwicklung des Fötus und Erwachsene Gesundheit entstanden ist. Die Verwendung einer wirksamen und kohärenten Embryo-Transfer-Technik ist entscheidend, um die Erzeugung von gentechnisch veränderten Tieren zu verbessern und die Wirkung der verschiedenen Behandlungen auf Implantationsraten und Überlebenszeit zu bestimmen. Embryos im Blastozysten-Stadium in der Regel durch Uterus Übertragung übertragen, Ausführen einer Punktion in der Uteruswand, die Embryomanipulation Pipette einzuführen. Die in der Gebärmutter durchgeführt Öffnung nicht schließen, nachdem die Pipette wurde zurückgezogen, und die Embryonen können Abfluss in die Bauchhöhle durch den Überdruck der Gebärmutter. Die Punktion kann auch produzieren eine Blutung, die Implantation beeinträchtigt, blockiert die Transferpipette und können Embryo d beeinflussenntwicklung, vor allem, wenn Embryonen ohne zona übertragen werden. Folglich ist diese Technik oft zu sehr variabel und insgesamt niedrigen Embryo-Überlebensraten. Die Vermeidung dieser negativen Auswirkungen, Eileiter-utero-Embryo-Transfer nutzen die utero-Eileiter-Kreuzung als eine natürliche Barriere, die Embryo Abfluss behindert und vermeiden Sie die Punktion der Gebärmutterwand. Vasektomierten Männer werden für den Erhalt schein Empfänger erforderlich. Eine Technik zur Vasektomie durchführen wird als Ergänzung zu den utero-Eileiter-Embryo-Transfer beschrieben.

Einleitung

Embryotransfer ist wahrscheinlich der häufigste chirurgische Eingriff im Mausmodell durchgeführt. Diese Technik ist wesentlich, Nachkommen von Embryonen in vitro Manipulation Techniken unterworfen wurde, und daher stellt ein notwendiger Schritt für die Entwicklung von genetisch modifizierten Modelle von Vorkern-Injektion lentiviralen Transduktion oder Chimärenbildung. Außerdem ermöglicht die Technik die Untersuchung der Auswirkungen auf die Entwicklung von diversen Beleidigungen während der Präimplantations-Entwicklung auftreten. Die Verwendung von künstlichen Reproduktionstechniken ¹ oder der Einwirkung von abnormalen Konzentrationen verschiedene....

Protokoll

Alle Tierversuche wurden von der Beltsville Bereich Animal Care und Verwenden Gremien (BAACUC 11-015) in Übereinstimmung mit USDA Animal Care und Verwenden Richtlinien genehmigt.

1. Anästhesie und Analgesie (gemeinsam für beide Chirurgische Verfahren)

1. Wiegen Sie die Maus, und laden Sie die folgenden Anästhetika und analgetische in zwei 1 ml Spritzen mit 27 G Nadeln:
   1. Ketamin (0,1 mg / g: 0,01 ml / g einer 10 mg / ml) und Xylazin (0,01 mg / g: 0,005 ml / g eines 2 mg / ml Lösung).
   2. Buprenorphin (0,1 ug / g: 0,01 ml einer 0,01 mg / ml Lösung).
2. Immobilisieren, ....

Ergebnisse

Utero-Eileiter-Embryo-Transfer bietet eine mittlere Embryonen in die Gebärmutter vermeiden einige der Komplikationen an der Gebärmutterembryotransfer ^2,9,10 verbunden zu übertragen. In Tabelle 1 zeigen wir einige repräsentative Ergebnis, das wir erhalten haben, die Übertragung CD1 Blastozysten, verschiedene Arten von Manipulationen CD1 Empfänger unterzogen nach dem beschriebenen Protokoll. Das Überleben zu Begriff (% der Embryonen, was zu einer Welpe) oder das Überleben bis E15 (im Fall von L.......

Diskussion

Die Vasektomie ist eine relativ einfach Operationstechnik, die keine großen Schwierigkeiten verbunden ist. Wenn Desinfektion mit Povidon-Jod und Ethanol stellen Sie sicher, dass der letzte Waschanlage (mit Ethanol) entfernt Povidoniod, da es das Bauchfell reizen. Der Zugang zu Samenleiter kann auch durch den Hodensack oder Durchführen einer transversalen Schnitt in den Bauch ⁸ erreicht werden. Scrotal Einschnitt wurde empfohlen, Bauchschnitt durch den vergleichsweise kleineren Schnitt benötigt und et.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Ketamin	VEDCO	Ketaved ANADA 200-257	Von einem zugelassenen Tierarzt zu bestellen.
Xylazine	Lloyd Laboratories	Anased NADA #139-236	Von einem zugelassenen Tierarzt zu bestellen.
Buprenorphin	Generikum	NDC 400-42-010-01	Von einem zugelassenen Tierarzt zu bestellen.
Augensalbe	Novartis	Genteal
Antibiotikum	Pfizer	Clavamox NADA #55-101.	Dem Trinkwasser zugesetzt (0,3 mg/ml Amoxicillin-Trihydrat und 0,075 mg/ml Clavulanat-Kalium). 1,5 ml der rekonstituierten 15-ml-Flasche in 250 ml Wasser geben.
Zange mit Wellenschliff	ROBOZ	RS-8120	Jede mittelgroße gerade Pinzette aus chirurgischem Stahl funktioniert.
Mikrodisparierzange	ROBOZ	RS-5137	Diese sind in einem Winkel von 90° gekrümmt. Auf Wunsch kann eine gerade Pinzette verwendet werden.
Leicht gebogene Mikrodissektionszange	ROBOZ	RS-5136	Dieses Modell ist besonders nützlich, um den Eileiter zu halten.
Schere	ROBOZ	RS-5880	Jede handelsübliche kleine gerade Schere aus chirurgischem Stahl funktioniert.
27 G Nadeln	Beckton-Dickinson	305136	Es können auch kleinere Nadeln (30 G) verwendet werden, 25 G können etwas zu groß sein.
Clip-Applikator	MiKRon	42763
9 mm Clips	MiKRon	427631
Clip-Entferner	MiKRon	7637	können zwei Paar Zahnzangen (ROBOZ RS-8160) verwendet werden.
Nahtnadelhalter	ROBOZ	RS-7820
Nahtmaterial	Dowist Gell	5-0 Dexon S 7204-21	Kann jedes resorbierbare Nahtmaterial 4-0 bis 6-0 mit einer schmalen gebogenen Nadel ersetzen.
Glaskapillaren	VWR	100 ul kalibrierte Pipetten 53432-921	Es enthält ein Mundsaugersystem, das nur einen 0,22 µ anbringen muss; m Filter in den Schlauch, um sofort einsatzbereit zu sein. Weitere Informationen finden Sie unter Nagy et al.8
Brenner	KISAG AG	2002	Gasbrenner, kann mit Kigas (CH-4512, vom gleichen Hersteller) beschickt werden. Es können auch Alkoholbrenner verwendet werden, aber Gas sorgt für eine höhere Temperatur und dieser Brenner sorgt für eine kleine und präzise Flamme.
Stereomikroskop	Leica	MZFLIII	Hierbei handelt es sich um ein teures Estereomikroskop mit Fluoreszenz, das auch für andere Zwecke verwendet werden kann. Es gibt günstigere Optionen wie Leica MZ8 oder Nikon SMZ-10 oder SMZ-2B, um nur einige zu nennen. Es ist besser, zwei Stereomikroskope zu verwenden, eines für die Handhabung der Embryonen (das nicht sehr schön sein muss) und eines für die Empfängerin. Die für den Empfänger verwendete Platte sollte einen großen Abstand von der Tischplatte zur Objektivlinse aufweisen, um 3-4 cm über der Tischplatte (wo der Eileiter platziert wird) fokussieren zu können und dem Chirurgen noch etwas Platz zu lassen; Die meisten Stereomikroskope können das, einige aber auch nicht.
Faseroptische Beleuchtung	Dolan Jenner	Fiber lite	Zur Beleuchtung des Operationsbereichs. Es stehen verschiedene Systeme zur Verfügung.
Warme Stadien	Amerikanischer Geltungsbereich	http://store.amscope.com/tcs-100.html	Diese können über die Tischplatte des Stereomikroskops gelegt werden. Einige Modifikationen (Einsetzen eines Stäbchens zum Nivellieren des Tisches) können erforderlich sein, wenn es für das Stereomikroskop zu kurz ist. Eine große Warmbühne kann zum Erwärmen des Käfigs verwendet werden, wenn sie verfügbar ist. Wenn nicht, kann ein normales Heizkissen verwendet werden, aber die Temperatur muss überprüft werden.
Kulturschalen für die Manipulation	von Embryonen verwendet werden Falcon	353001	351008, die schmalere Tropfen bilden.

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