Dieser Videoartikel beschreibt eine modifizierte in vitro Methode, um die Rolle von Hormonen, Zytokinen und/oder Wachstumsfaktoren bei der Invasion von Krebszellen zu untersuchen.
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Methodenartikel
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Dieser Videoartikel beschreibt eine modifizierte in vitro Methode, um die Rolle von Hormonen, Zytokinen und/oder Wachstumsfaktoren bei der Invasion von Krebszellen zu untersuchen.
Blutserum dient als chemoattraktive, auf das Krebszellen wandern und dringen, die Erleichterung ihrer Intravasation in Mikrogefäßen. Jedoch sind die tatsächlichen Moleküle zu dem die Zellen wandern bleiben ungeklärt. Diese modifizierte Invasion Assay wurde entwickelt, um Ziele, die Zellmigration und Invasion fahren zu identifizieren. Dieses Verfahren vergleicht die Invasion Index unter drei Bedingungen, um zu bestimmen, ob ein bestimmtes Hormon, Wachstumsfaktor oder Zytokin spielt eine Rolle bei der Vermittlung des invasiven Potentials einer Krebszelle. Zu diesen Bedingungen gehören i) normale fetale Rinderserum (FBS), ii) Holzkohle-beraubt FBS (CS-FBS), die Hormone, Wachstumsfaktoren und Zytokine und iii) CS-FBS + Molekül entfernt (bezeichnet "X"). Eine wesentliche Änderung der Zellinvasion mit CS-FBS im Vergleich zu FBS, zeigt die Beteiligung von Hormonen, Cytokinen oder Wachstumsfaktoren bei der Vermittlung der Veränderung. Einzelne Moleküle können dann zurück zu CS-FBS zugegeben, um ihre Fähigkeit zur Wieder AssayVers oder retten die Invasion Phänotyp. Ferner können zwei oder mehr Faktoren kombiniert werden, um die additive oder synergistische Effekte mehrerer Moleküle in Fahrt oder Hemmen Invasion bewerten. Insgesamt ermöglicht dieses Verfahren den Prüfer, um festzustellen, ob Hormone, Cytokine und / oder Wachstumsfaktoren spielen eine Rolle bei der Zellinvasion durch als Chemoattraktantien oder Inhibitoren Invasion für einen bestimmten Typ von Krebszelle oder einer bestimmten Mutante dient. Durch die Identifizierung von spezifischen Lockstoffe und Inhibitoren, kann dies geändert Invasionstest helfen, aufzuklären Signalwege, die Invasion von Krebszellen zu lenken.
Eine neuartige Invasionstest wurde mit dem Ziel der Identifizierung der Einbeziehung spezifischer Hormone, Cytokine und / oder Wachstumsfaktoren als Chemoattraktantien in Invasion von Krebszellen entwickelt. Die Fähigkeit der Tumorzellen durch die extrazelluläre Matrix (ECM) einzudringen ist ein Markenzeichen der metastatischen Phänotyp 1-3. Invasionskammern wurden intensiv als in vitro-Werkzeuge zur Invasion von Krebszellen und die Migration zu untersuchen und möglicherweise Kenntnis über die Mechanismen der in vivo Tumorinvasion und Metastasenbildung bereitzustellen. Die Kammern bestehen aus zylindrischen Zellkultureinsätze i....
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1. Bereiten Sie die verschiedenen Medien und Zusatzkomponenten
2. Bereiten Sie die Kollagenmatrix on Ice
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Die Invasion Index wird für jede Bedingung nach Normalisierung auf eine nicht-invasive Zelllinie berechnet. Für unsere Experimente verwenden wir den 1205Lu Melanomzelllinie und etablierte Variante stabile Zelllinien wie unsere invasive Leitungen sowie die Vorstufen noninvasive Variante WM793, aus dem die Zellen stammen 1205Lu 10, die als eine logische Steuerung dient. Wir verwenden auch Kollagen I nach der Invasion Matrix, denn das ist die primäre Komponente der Dermis. Dies ist in Übereinstimmung mit einer v.......
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Tumormetastasen ist ein mehrstufiger Prozess. Die Zellen müssen über die Basalmembran zu brechen, intravasate entweder in das Lymphsystem oder Blutmikrogefäße, in denen sie an entfernten Stellen transportiert werden. Die Tumorzellen dann extravasieren und zu kolonisieren in eine macrometastasis 12. Progression durch die Epithelzellen zu mesenchymale Transition (EMT), Tumorinvasion und Metastasierung wurde von Steroidhormonen 13,14 erweitert, Wachstumsfaktoren von 15 bis 18, 19 bis 21 und.......
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Die Autoren haben nichts offenzulegen.
Die Autoren geben an, dass sie von der D'Youville College School of Pharmacy, Buffalo, NY, finanziert werden.
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| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| BioCoat Control Inserts mit 8.0 & micro; m PET-Membran | Corning | 354578 | 12 in jeweils zwei 24-Well-Platten. PET = Polyethylenteraphthalat |
| Kollagen I, Rattenschwanz | Corning | 354236 | Quelle = Rattenschwanzsehne, Reinheit = 90% |
| Fixiermittel; Diff-Quick | Thermo Fisher Scientific | NC9844047 | Fixiermittel auf Methanolbasis, Hämatoxylin/Eosin |
| Fötales Rinderserum | Life Technologies | 16000 | Bezeichnung als FBS |
| Holzkohlegestreiftes fötales Rinderserum | Life Technologies | 12676 | Bezeichnung als CS-FBS |
| Fötales Kälberserum | Thermo Scientific Hyclone | SH30070 | bezeichnet als FBS |
| Aktivkohle gestreiftes fötales Rinderserum | Thermo Scientific Hyclone | SH30068 | bezeichnet als CS-FBS |
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