Ex vivo Zubereitungen der Intact Vomeronasalorgan und akzessorischen olfaktorischen Bulbus

Zusammenfassung

Die Maus akzessorischen olfaktorischen Bulbus (AOB) ist schwierig gewesen, im Rahmen der sensorischen Kodierung zu studieren. Hier zeigen wir eine Dissektion, die eine Ex-vivo-Vorbereitung, in der AOB Neuronen funktionell bleiben, um ihre angeschlossenen Peripherieeingänge, die Erleichterung der Forschung in der Informationsverarbeitung von Maus Pheromone und Kairomonen produziert.

Zusammenfassung

Die Maus akzessorischen olfaktorischen System (AOS) ist eine spezialisierte Sinnespfad zur Erfassung nichtflüchtigen sozialen Gerüche, Pheromone und Kairomonen. Die erste neuronalen Schaltkreis in der AOS-Weg, die so genannte akzessorischen olfaktorischen Bulbus (AOB), spielt eine wichtige Rolle bei der Gründung Sex-typische Verhaltensweisen wie Aggression und territorialen Paarung. Diese kleine (<1 mm ^3)-Schaltung besitzt die Fähigkeit, einzigartige Verhaltenszustände, wie z. B. Geschlecht, Belastung, Stress und von chemosensorischen Signale in den Sekreten und Ausscheidungen von Artgenossen zu unterscheiden. Während die kompakte Organisation dieses Systems präsentiert einzigartige Möglichkeiten für die Aufnahme von großen Teilen der Schaltung gleichzeitig bleibt Untersuchung der sensorischen Verarbeitung in der AOB eine Herausforderung, vor allem wegen seiner nachteiligen Lage experimentell im Gehirn. Hier zeigen wir einen mehrstufigen Präparation, die die intakte AOB in einem einzigen Halbkugel der vorderen Schädel Maus entfernt, so dass eine VerbindungIonen sowohl der peripheren sensorischen Neuronen vomeronasal (VSN) und der lokalen neuronalen intakt. Das Verfahren macht die AOB Oberfläche einer Sichtprüfung zu leiten, erleichtert elektrophysiologischen und optischen Aufnahmen von AOB Schaltungselemente in Abwesenheit von Anästhetika. Nach dem Einlegen einer dünnen Kanüle in das Vomeronasalorgan (VNO), die die VSNs beherbergt, kann man direkt aussetzen, die den Umfang der sozialen Gerüchen und Pheromonen bei der Aufnahme Downstream-Aktivität in der AOB. Dieses Verfahren ermöglicht kontrollierte Untersuchungen über AOS Informationsverarbeitung, die Licht auf die Mechanismen Verknüpfung Pheromon Exposition zu Veränderungen im Verhalten zu vergießen kann.

Einleitung

Sinnesverarbeitung im Gehirn von Säugetieren umfasst in der Regel mehrere wechselseitig verbundenen neuronalen Schaltkreisen, die jeweils bestimmte Merkmale extrahiert aus sensorischen Input. In sensorischen Bahnen, ist eine frühzeitige Informationsverarbeitung entscheidend für normale Wahrnehmung und Verhalten. In der akzessorischen olfaktorischen System (AOS) ist der akzessorischen olfaktorischen Bulbus (AOB) die Haupt neuronalen Schaltkreis die Verknüpfung der sensorischen Peripherie zum nachgeschalteten Strukturen, die Hormonhaushalt ^1,2, Aggression ^{3, 4} und Erregung zu diktieren. Als solches wird die Informationsverarbeitung innerhalb diese....

Protokoll

Alle Experimente wurden in Übereinstimmung mit den Protokollen von der UT Southwestern Institutional Animal Care und Verwenden Ausschuss genehmigt wurde, und wurden so gewählt, dass Stress, Beschwerden und Schmerzen, die durch den Versuchstieren erlebt zu minimieren.

1. Dissection Kammer

Eine benutzerdefinierte Dissektion Kammer und kleinen, dünnen Plastikplanke für die besten Ergebnisse (Abbildung 1) erforderlich. Bauen oder zu erhalten, wie eine Kammer im Vorfeld versucht, dieses Protokoll.

2. Dissection Lösungen

1. Herstellung von 1 l Standard künstlichen ....

Ergebnisse

Der Weg zum Erfolg mit diesem Präparat nimmt umfangreiche Praxis, und hat mehrere Schritte bei der es nicht kann. Man sollte erwarten, dass viele Versuche, vor den Erfolg benötigen. Der Brauch Dissektion Kammer ist für den erfolgreichen Abschluss dieses Protokolls erforderlich und sollte vor Beginn der späteren Stadien der Präparation erhalten werden. Die Kammerkonstruktion in Fig. 1 dargestellt ist, für diesen Zweck ausreichend, und kann relativ kostengünstig Kunststoff mit minimaler Bearbeitungs Anfor.......

Diskussion

Die in diesem Protokoll beschrieben VNO-AOB ex vivo-Herstellung ist eine nützliche Alternative zu den in vivo ^5-7 und akute Live Scheibe ¹⁷ Experimente AOB Funktion anästhesiert. Im Gegensatz zu akuten AOB Scheibe Experimente, die auch Schaltungselemente für elektrophysiologische und optische Aufnahmen belichten, behält diese Vorbereitung alle sensorischen Afferenzen und intra-AOB-Verbindungen. Sie können aber auch von betäubten gesagt werden, in-vivo-Ansätzen, die Anwese.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Gerade Schere	Fine Science Tools	14002-14
Feine Schere-Gerade	Fine Science Tools	14060-10
Feine Schere-Gebogene	Fine Science Tools	14061-10
Adson Pinzette	Fine Science Tools	11006-12
#3 Skalpellgriff	Fine Science Tools	10003-12
#11 Skalpellklingen	Fisher Scientific	3120030
gerade Rasierklingen aus Kohlenstoffstahl	Fisher Scientific	12-640
35 mm Petrischale	Fisher Scientific	08-772-21
Sezierkammer	nach Kundenwunsch	N/A	Siehe Abbildung 1
Delrin Kunststoffdiele 0,6 cm x 1,5 cm x 0,1 cm	Sonderanfertigung	N/A
Dow Corning Silizium Vakuumfett	Fisher Scientific	146355D
#5 Pinzette, Student	Fine Science Tools	91150-20
#5 Pinzette, Biologie Tip	Fine Science Tools	11295-10
#5 Pinzette, Student	Fine Science Tools	91150-20
Vannas Federschere	Fine Science Tools	15000-08
1/16" männlicher Luer	Cole-Parmer	EW-45505-00
1/16" Schlauch	Fisher Scientific	14-171-129
Zwei Tonnen Epoxidharz	Grainger	5E157
ValveBank Druckvolles Perfusionskit	AutoMate Scientific	09-16
ValveLink digitale/manuelle Steuerung	AutoMate Scientific	01-18
NaCl	Sigma-Aldrich	diverse
KCl	Sigma-Aldrich	diverse
CaCl2 Dihydrat	Sigma-Aldrich	diverse
MgCl2 Hexahydrat	Sigma-Aldrich	diverse
NaHCO3	Sigma-Aldrich	diverse
NaH2PO4	Sigma-Aldrich	verschiedene
myo-Inositol	Sigma-Aldrich	diverse
Na-Pyruvat	Sigma-Aldrich	diverse
Na-Ascorbat	Sigma-Aldrich	diverse
HEPES-Puffer	Sigma-Aldrich	diverse
Glukose	Sigma-Aldrich	verschiedenes