In-vivo-und In-vitro-Aufzucht von Nematoden (Steinernematidae und Heterorhabditidae)

Zusammenfassung

Das Ziel dieser Präsentation ist es, in vivo und in-vitro-Techniken für die Aufzucht von insektenpathogenen Nematoden zu demonstrieren. In-vivo-Verfahren betrachten die Aufzucht dieser Nematoden mit einer Insektenwirts, während die in-vitro-Methoden zu nutzen reichen Agar-Medien.

Zusammenfassung

Nematoden (EPN) (Steinernematidae und Heterorhabditidae) haben eine Partnerschaft mit mutualistic Gram-negative Gamma-Proteobakterien in der Familie der Enterobacteriaceae. Xenorhabdus Bakterien mit steinernematids Nematoden assoziiert, während Photorhabdus sind Symbionten heterorhabditids. Zusammen Nematoden und Bakterien bilden eine hohe insektizide Komplex, der eine breite Palette von Insektenarten in einer intimen und besonderen Partnerschaft tötet. Hier zeigen wir, in vivo und in vitro Techniken, die üblicherweise bei der Aufzucht dieser Nematoden unter Laborbedingungen eingesetzt. Darüber hinaus sind diese Techniken stellen wichtige Schritte für die erfolgreiche Etablierung von EPN Kulturen und bilden auch die Grundlage für andere Studien, die sich diese Organismen für die Forschung zu nutzen. Die Produktion von aposymbiotic (Symbiont-frei) Nematoden ist oft entscheidend für eine gründliche und vielseitige Herangehensweise an das Studium der Symbiose. DiesProtokoll erfordert nicht die Zugabe von Antibiotika und können in kürzester Zeit mit Standard-Laborausrüstung durchgeführt werden. Nematoden, die in dieser Weise hergestellt werden, sind relativ stabil, obwohl ihr Überleben in Speicher kann je nach den verwendeten Arten variieren. Die in dieser Präsentation detailliert Techniken entsprechen denen von verschiedenen Autoren beschrieben und P. Auf der Laboratory, University of Arizona (Tucson, AZ, USA) verfeinert. Diese Verfahren unterscheiden sich von dem Körper der Techniken, die in der Massenproduktion dieser Organismen für Schädlingsbekämpfungszwecke verwendet werden.

Einleitung

Nematoden (EPN) Steinernema und Heterorhabditis spp. (Steinernematidae, Heterorhabditidae) und ihre bakteriellen Symbionten, Xenorhabdus und Photorhabdus spp (Enterobacteriaceae) gelten als eine emergente Modell von Landtier-Mikroben symbiotischen Beziehungen ^2-4,6,10,19. Xenorhabdus und Photorhabdus spp. sind als Symbionten im Darm des einzigen frei lebenden Bühne der Nematoden, die auch als infektiöse juvenile (IJ) oder ^3. Stufe infektiös Jugend ^8,10,13 bekannt hegte. Das Bakterium-Nematoden Paar pathogen ist für eine breite Palette von Insekten und erfolgreich in der biologische....

Protokoll

1. In vivo Tierhaltung von Nematoden mit ihren Symboitic Bakterien

1. Invertieren 100 x 15 mm Kunststoff-Petrischale und legen zwei Scheiben aus Filterpapier (90 mm) in den Deckel der Schale.
2. Gleichmäßig zu verteilen 1 ml der IJ (infektiöser Jugend) Wasser-Suspension (bei einer Konzentration von 1.000-2.000 IJ / ml) auf dem Filterpapier.
   HINWEIS: IJ müssen nicht oberflächensterilisiert werden.
3. Fügen Sie 10 letzten Larvenstadium der größeren waxmoth Galleria mellon in die Schale. Das Ziel ist, etwa 100-200 IJs / Larve ist.
4. Decken Sie den Deckel mit dem Boden der Petrischale (Bild 1) und be....

Ergebnisse

Die In-vivo-Methode verwendet Aufzucht lebenden Insekten als Wirte für die Nematoden-Wachstum und Fortpflanzung. Infektionskammern sind ein effizientes Verfahren zum Aussetzen von Insekten IJs. Dies ist die einzige Phase im Lebenszyklus des Nematoden, die die bakteriellen Symbionten von einem Host zu einem anderen Insektenvektoren. Abbildung 1 zeigt für eine Infektion Kammer sowie der benötigt wird, um diese Kammer bauen die Materialien eingerichtet. In-vitro-Methoden ermöglichen die A.......

Diskussion

Mit einem geeigneten Wirt ist ein Schlüsselfaktor für die erfolgreiche Aufzucht von in vivo EPN. In der Regel können beide steinernematids und heterorhabditids vervielfältigen und zu ihren Lebenszyklus in Larven der Großen Wachsmotte, Galleria mellon (Lepidoptera: Pyralidae) erfolgreich abgeschlossen. Jedoch können auch andere Insektenarten aus verschiedenen Familien und / oder Bestellungen berücksichtigt werden. Einige der derzeit beschriebenen Nematodenarten sind bekannt, um die Spezifität für ein be.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Für In vivo Infektionen
100 x 15 Petrischalen	VWR	25384-088
Filterpapier, 9 cm Cellulose Güteklasse 1	Whatman/VWR	28450-081	Filterpapier Güteklasse 1 empfohlen
Insektenwirte	Timberline	http://www.timberlinefisheries.com/ProductDetails.asp?ProductCode=WAXLG	Galleria mellonella sind recommended
Für Leber-Nieren-Agar (für 500 ml)
60 x 15 mm Petrischalen	VWR	25384-092
Rinderleber, 50 g	der Region; Metzger oder Supermarkt		Reste können gefroren gelagert und für die zukünftige Verwendung aufgetaut werden
Rinderniere, 50 g	Aus der Region; Metzger oder Supermarkt		Reste können gefroren gelagert und für die zukünftige Verwendung
aufgetaut werdenNatriumchlorid 2,5 g (0,5 % Endkonzentration)	Acros/VWR	200002-434	NaCl in Forschungsqualität kann verwendet werden
Agar, 7,5 g (1,5 % Agar, Endkonzentration)	HiMedia/VWR	95026-642	jedes Medium Agar kann verwendet werden
500 ml destilliertes H2O
Für Lipid-Agar (für 1 L)
100 x 15 Petrischalen	VWR	25384-088
Nährbrühe, 8 g	BD/VWR	90002-660
Hefeextrakt, 5 g	EMD/VWR	EM1.03753.0500
Magnesiumchlorid-Hexahydrat 10 ml (0,2 g/ml)	EMD/VWR	EM-MX0045-1
Maisöl, 4 ml	Jede Marke	Lokale Quelle; Supermarkt	Maisöl jeder Marke kann verwendet werden
Maissirup, 96 ml 7 ml Maissirup in 89 ml erhitztem H2O mischen und für Homogenität schwenken	Karo	Lokal bezogen; Supermarkt-Agar
, 15 g	HiMedia/VWR	95026-642	Medium Agar kann verwendet
werden Destilliertes H2O, 890 ml

Aus jedes jedes