Baumwollratten sind extrem erregbar und haben eine starke Flucht-oder-Kampf-Reaktion. Es wird eine zur Stressreduktion der Tiere optimierte Handhabungsmethode beschrieben, die Baumwollratten als präklinisches Modell leichter zugänglich machen wird.
Ein Abonnement von JoVE ist erforderlich, um diesen Inhalt anzuzeigen. Melden Sie sich an oder beginnen Sie noch heute mit einer kostenlosen Testphase.
Methodenartikel
Die Handhabung der Baumwolle Ratte in Studien für die präklinische Bewertung onkolytischer Viren
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Onkolytische Viren sind eine neuartige Krebstherapie mit der Fähigkeit, Tumorzellen anzugreifen, während gesunde Zellen intakt bleiben. Jüngste Studien haben gezeigt, dass die Beteiligung des Immunsystems des Wirts für den Erfolg dieser Strategie unerlässlich ist. Daher sollte die onkolytische Virotherapie im Rahmen eines immunkompetenten Modells evaluiert werden. Darüber hinaus kann die Untersuchung von Antitumortherapien in verträglichen Tiermodellen die Ergebnisse klinischer Studien besser rekapitulieren. Baumwollratten, die häufig zur Untersuchung von Atemwegsviren verwendet werden, sind ein attraktives Modell für die Untersuchung der onkolytischen Virotherapie, da syngene Modelle des Mammakarzinoms und des Osteosarkoms gut etabliert sind. Es fehlen jedoch veröffentlichte Informationen über den richtigen Umgang mit diesen hocherregbaren Nagetieren. Der skizzierte Handhabungs- und Fangansatz minimiert den Stress der Tiere, um Experimente zu erleichtern. Diese Technik hängt von der Fähigkeit des Forschers ab, während der Handhabung Ruhe zu bewahren und Eingriffe rechtzeitig durchzuführen. Schließlich beschreiben wir, wie man Brusttumorzellen von Baumwollratten für eine konsistente subkutane Tumorbildung vorbereitet und wie intratumorale und intraperitoneale Injektionen durchgeführt werden. Diese Methoden können auf eine Vielzahl von Studien angewendet werden, die die Entwicklung der Baumwollratte als relevantes präklinisches Modell zur Untersuchung der Antitumortherapie fördern.
Einleitung
Onkolytischer Viren (OV) selektiv in Tumorzellen zu replizieren, indem biochemische Unterschiede zwischen normalen und Tumorzellen 1,2. Es gibt zwei Arten von OVs: solche, die keine Mutation an selektiven Onkolyse zu erreichen, die als natürlich vorkommende Wildtyp-Viren und solche, die dazu entworfen sind, um eine selektive Onkolyse erzielen. Die Sammlung von Mutationen in einem bestimmten Tumortyp bestimmt die Art der selektiven Wachstumsvorteil gegenüber normalen Zellen für eine OV 2. Die Sicherheit und der Vorteil der Verwendung OVs wurde in klinischen Studien 3-7 gezeigt. Trotz Fortschritten auf dem Gebiet der onkolytischen Virot....
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Protokoll
HINWEIS: Die verwendeten Protokolle sind von unseren institutionellen Tierforschung Ethikrat an der McMaster University nach Canadian Council on Animal Care-Richtlinien zugelassen. Die Experimente wurden an der McMaster Universität Zentrale Tierlabor durchgeführt.
1. Die Kultivierung LCRT Cells
- Kultur LCRT Zellen in Dulbeccos modifiziertem Eagle-Medium (DMEM) mit 10% fötalem Rinderserum (FBS), 2 mM L-Glutamin, 100 U / ml Penicillin und 100 ug / ml Streptomycin ergänzt. Pflegen Zellen in T-150 Gewebekulturkolben bei 37 ° C und 5% CO 2. Passage-Zellen, wenn sie sich bilden, eine 90% konfluente Monoschicht (alle ....
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Ergebnisse
Durch die extrem erregbarer Natur der Baumwollratten, da kennen und Verwendung von Verfahren optimiert, um die Belastung der Tiere zu reduzieren wird bei der Nutzung als präklinischen Tiermodell zu erleichtern. Verwendung der richtigen Handhabungstechniken minimiert auch die Gefahr für die Forscher.
Bei der Verwendung von Baumwollratten ist es unerlässlich, ruhig zu bleiben. Die Ratten wurden leicht erregbar und versucht, ihren Käfig entkommen. Verwendung eines Anreicherungsrohr und nestlets.......
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Diskussion
Baumwollratten sind sehr erregbar und haben eine starke Fluchtreaktion. Daher sollte besonders darauf geachtet werden, dass unnötiger Stress für das Tier minimiert wird. Die beschriebene Käfigeinrichtung ermöglicht ein sicheres und einfaches Einfangen der Tiere, wobei die Platzierung des Anreicherungsrohrs von größter Bedeutung ist. Achten Sie beim Aufstellen von Käfigen darauf, dass die Anreicherungsrohre den Anforderungen an Größe und Form entsprechen und in der richtigen Ausrichtung im Käfig platziert werden. Es ist a.......
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Offenlegungen
Die Autoren räumen ein, dass es keine finanziellen Interessenkonflikte im Zusammenhang mit dieser Forschung gibt.
Danksagungen
Breanne Cuddington hat ein Stipendium der Canadian Breast Cancer Foundation. Diese Arbeit wurde durch Betriebszuschüsse der Cancer Research Society und des Canadian Cancer Society Research Institute (ehemals Canadian Breast Cancer Research Alliance) finanziert. Wir danken Ann Tollefson (Saint Louis University School of Medicine) für LCRT-Zellen und Dr. Kathleen Delaney und Marion Corrick für die technische Unterstützung bei der Unterbringung von Baumwollratten und der Sedierung.
....Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Dulbecco' s modifizierter Eagle" s Medium | Gibco | 11965-092 | Kann jede Marke verwenden |
| 1X Phosphat gepufferte Kochsalzlösung | Kann im Labor zubereitet werden, Filter zur Sterilisation von | ||
| 200 mM L-Glutamin | Gibco | 25030164 | Kann |
| jede Marke 100x Antibiotikum-Antimykotikum verwenden | Gibco | 15240-062 | Kann jede Marke verwenden |
| Fötales Rinderserum | Quality Biological Inc. | 110-001-101HI | Kann jede Marke |
| verwenden T-150cm2 Gewebekulturflasche | Fisher Scientific | 14-826-80 | Kann jede Marke verwenden |
| 1X TypLE Express | Life Technologies | 12604-013 | |
| 12-Well-Zellkulturplatte, flacher Boden | Fisher Scientific | 08-772-29 | Kann jede Marke verwenden, muss mit Gewebekulturen behandelt werden |
| alamarBlue | Life Technologien | DAL1025 | Kann ein alternatives Reagenz zur Bestimmung der Zellviabilität verwenden |
| 8640 Teklad 22/5 Nagetierfutter | Harlan | 8640 | |
| 1/8" Maiskolben Nagetiereinstreu | Harlan | 7092 | |
| Nestlets | Ancare - | Hergestellt aus verkleinerter Frischbaumwollfaser, staubfrei und autoklavierbar | |
| 50 mL Konische Röhrchen | Fisher Scientific | 14-432-22 | Kann jede Marke verwenden, muss steril sein |
| Isofluran USP, 99,9 %, Inhalationsanästhetikum | Pharmaceutical Partners of Canada Inc. | M60302 | |
| 70 % Ethanol | Kann im Labor hergestellt | ||
| werden 10 % neutrales gepuffertes Formalin | Sigma-Aldrich | HT501128 | Kann jede Marke verwenden |
| NAPCO NapFlow 1200 Klasse II A/B3 Biosicherheit Mikrobiologische Sicherheitswerkbank (Zellkulturhaube) | NAPCO | Modell verwendet derzeit nicht verfügbar | Kann jede Marke |
| verwenden Thermo Fisher Scientific Präzisions-beheiztes Wasserbad | Fisher Wissenschaftliches | Modell verwendet, derzeit nicht verfügbar | Kann jede Marke verwenden |
| [header] | |||
| Reichert Bright-line Hämazytometer | Sigma-Aldrich | Z359629 | Kann jede Marke |
| Typhoon Trio BioAnalyzer verwenden | Das | verwendete Life-Sciences-Modell von GE Healthcare ist derzeit nicht verfügbar. | Kann mit jedem Fluoreszenzplatten-Reader verwendet |
| Tecan Safire2 Multi-Detection Microplate Reader | Tecan | Modell verwendet derzeit nicht verfügbar | Kann mit jedem Fluoreszenzplatten-Reader verwendet |
| Allegra 6R Tischzentrifuge | Beckman Coulter | 366816 | Kann jede Marke verwenden |
| Tisch-Anästhesiegerät | VetEquip | Modell gebraucht derzeit nicht verfügbar | Kann jede Marke verwenden, muss tragbar sein |
| Wahl Peanut Mini Clippers | Wahl | Kann jede Marke von kleinen Clippern verwenden | |
| Insulinspritzen 29 G x 1/2', 0,3 mL | BD | 329464 | Kann jede Marke verwenden. Insulinspritzen werden empfohlen, da sie die Injektion durch die Ratte erleichtern." s harte Haut. |
| Wattestäbchen | MedPro | 018-425 | Kann jede Marke verwenden |
| Präparierschere | Fisher Scientific | 8940 | Kann jede Marke verwenden |
| Präparierzange | Fisher Scientific | 13-812-41 | Kann jede Marke verwenden |
Referenzen
- Cervantes-Garcia, D., Ortiz-Lopez, R., Mayek-Perez, N., Rojas-Martinez, A. Oncolytic virotherapy. Ann Hepatol. 7 (1), 34-45 (2008).
- Vaha-Koskela, M. J., Heikkila, J. E., Hinkkanen, A. E. Oncolytic viruses in cancer therapy. Cancer Lett. 254 (2), 178-216 (2007).
- Abril, C., et al.
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Nachdrucke und Genehmigungen
