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Facial Nerve Axotomie bei Mäusen: Ein Modell zur Motoneuron Reaktion auf eine Verletzung Studieren

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DOI:

10.3791/52382

23. Februar 2015

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Wir präsentieren ein chirurgisches Protokoll, das detailliert beschreibt, wie eine Schnitt- oder Quetschaxotomie am Gesichtsnerv in der Maus durchgeführt wird. Die Axotomie des Gesichtsnervs kann eingesetzt werden, um die physiologische Reaktion auf Nervenverletzungen zu untersuchen und therapeutische Techniken zu testen.

Zusammenfassung

Ziel des chirurgischen Protokolls ist es, die Gesichtsnerven, die die Gesichtsmuskulatur innerviert, bei seinem Austritt aus der Foramen stylomastoideum aussetzen und geschnitten bzw. zermahlen, um periphere Nervenverletzung zu induzieren. Vorteile dieser Operation sind seine Einfachheit, hohe Reproduzierbarkeit und der fehlenden Wirkung auf die Lebensfunktionen oder Mobilität aus den nachfolgenden Gesichtslähmung, was zu einem relativ milden Operationsergebnis im Vergleich zu anderen Nervenverletzung Modellen. Ein wesentlicher Vorteil der Verwendung eines Hirnnervenverletzung Modells ist, dass die Motoneuronen befinden sich in einem relativ homogenen Population im Gesichts motorischen Kern in der Brücke, die Vereinfachung der Untersuchung der Motoneuronenzellkörpern. Aufgrund der symmetrischen Art der Gesichtsnerv innerviert und das Fehlen von Übersprechen zwischen den Gesichts motorischen Kernen kann der Betrieb einseitig mit der unaxotomized Seite als gekoppeltes interne Kontrolle dient geführt werden. Eine Vielzahl von Analysen können postoperativ zu beurteilen, durchgeführt werdens die physiologische Reaktion, deren Einzelheiten über den Rahmen dieses Artikels. Zum Beispiel kann die Wiederherstellung der Muskelfunktion als Verhaltens Marker für reinnervation dienen oder die Motoneurone quantifiziert, um das Überleben der Zellen gemessen werden. Zusätzlich können die Motoneuronen genau mittels Laser Mikrodissektion für die molekulare Analyse eingefangen werden. Da der Gesichtsnerven Axotomie ist minimal-invasiv und gut verträglich, kann es zu einer Vielzahl von gentechnisch veränderten Mäusen verwendet werden. Auch kann diese Operation Modell verwendet, um die Wirksamkeit des peripheren Nervenverletzung Behandlungen zu analysieren. Gesichtsnervenverletzung liefert ein Mittel für die Untersuchung nicht nur Motoneuronen, sondern auch die Reaktionen des zentralen und peripheren glial Mikroumgebung, das Immunsystem, und Ziel Muskulatur. Der Gesichtsnervenverletzung Modell ist ein weithin akzeptiertes periphere Nervenverletzung Modell, das als ein leistungsfähiges Werkzeug für die Untersuchung Nervenverletzung und Regeneration dient.

Einleitung

Viele periphere Nervenverletzung Modelle existieren, aber eine, die sich für das Studium der Motoneuronen steht, ist der Gesichtsnerv Axotomie Modell. Der Gesichtsnerv, der auch als Hirnnerven VII bekannt, ihren Ursprung in der Pons und innerviert die mimische Muskulatur 1,2. In diesem chirurgischen Protokoll wird die Gesichtsnerven bei seinem Austritt aus der Foramen stylomastoideum ausgesetzt und geschnitten bzw. zerkleinert. Der Schweregrad der Nervenverletzung kann im Anschluss an die Sunderland 3 Klassifikationen, die die Verletzungen auf der Grundlage der Unversehrtheit der Axone, Endoneurium, Perineurium und Epineurium unterscheidet, das ....

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Protokoll

Alle Geschäfte durchgeführt werden von der Indiana University School of Medicine Institutional Animal Care und Verwenden Committee genehmigt und befolgt, National Institute of Health Richtlinien.

1. Operationstechnik

  1. Pflegen aseptische Technik bei diesem Verfahren, indem sie sterile Handschuhe, Instrumente, und ein steriles Operationsfeld nach NIH-Richtlinien 25. Sterilisieren Instrumente vor Beginn der Operation durch Autoklavieren ihnen (siehe Tabelle der spezifischen Reagenzien / Ausrüstung für die komplette Liste). Verwenden Sie eine Glasperlen Sterilisator Werkzeuge während der Operation zu ster....

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Ergebnisse

Nach der Gesichtsnerv Axotomie durchgeführt wird, tritt Motoneuronenverlust als Folge der Verletzung. Motoneuronenüberleben nach der Verletzung hängt von vielen Faktoren, wie Geschlecht, Alter der Tiere zum Zeitpunkt der Operation und den Zeitpunkt, zu dem die Motoneuron zählt fertig sind, und der Moran und Graeber Überprüfung 24 und Jinno und Yamada Rezension 22 beide zusammenzufassen Motoneuron Überlebensdaten. Typischerweise werden etwa 86% der Motoneuronen überleben 28 Tage nach der Axotomie

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Diskussion

Der entscheidende Schritt für dieses Protokoll ist die richtige Positionierung der Maus, bevor mit der Operation begonnen wird. Wenn die Maus nicht flach auf der Seite liegt, das Ohr nicht im richtigen Winkel abgeklebt wird oder der Schnitt an einer falschen Stelle gemacht wird, wird es viel schwieriger, den Gesichtsnerv zu finden. Wenn diese Technik gemeistert wird, dauern Operationen nur wenige Minuten pro Maus.

Zum Verschließen der Wunde können entweder Nähte, Kleber oder Wundklammern verw.......

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Offenlegungen

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Danksagungen

Diese Arbeit wird von NIH RO1 NS 40433 (K.J.J.) finanziert.

....

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
StereomikroskopLeicaM60
BeschriftungsbandFisher Scientific15-952
Vannas-Tü Bingen Federschere - gerade/scharf/8,5 cm/5 mm SchneideFine Science Tools15003-08Vor Gebrauch sterilisieren
Dumont #5/45 Pinzette - Standardspitzen/abgewinkelt 45°/Dumoxel/11 cmFine Science Tools11251-35Vor Gebrauch sterilisieren
Michel-Nahtklammern - 7,5 mm x 1,75 mmFine Science Tools12040-01Im Protokoll als "Wundclip" bezeichnet, vor Gebrauch sterilisieren
Hagenbarth Cross Action Wund-Clip-Applikator 5"George Tiemann & Co160-910Wird verwendet, um einen Wundclip anzubringen, vor Gebrauch zu sterilisieren
Michel-Nahtclip-Applikator und -Entferner - Für 7,5-mm-ClipsFine Science Tools12029-12Wird verwendet, um einen Wundclip zu entfernen
0,9% Natriumchlorid-Injektion, USPHospira0409-4888-10
Betadine, 16 oz, mit SpenderFisher Scientific19-027132
70% Ethanol
Glasperlen-Sterilisator

Referenzen

  1. Kaufman, M., Bard, J. The Anatomical Basis of Mouse Development. , Elsevier. New York, NY. (1999).
  2. Ashwell, K. The adult mouse facial nerve nucleus: morphology and musculotopic organization. Journal of Anatomy. 135, 531-538 (1982).
  3. Sunderland, S.

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Schlagwörter

Periphere Nervenverletzungfazialer MotorkernLasermikrodissektionquantitative PCRGenexpressionsanalysechirurgisches ProtokollMausmodellNervenregeneration

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