Bewertung der Zebrafisch Nierenfunktion unter Verwendung einer fluoreszierenden Räumungs Assay

Summary

Der Zebrafisch ist ein beliebtes Tool zur chronischen Nierenerkrankung (CKD) zu modellieren. Allerdings macht ihre geringe Größe es unmöglich, die Nierenfunktion zu bewerten mit traditionellen Methoden. Wir beschreiben einen Fluoreszenzfarbstoff Nieren-Clearance-Test ^1, die quantitative Analyse von Zebrafisch Nierenfunktion bei CKD ermöglicht.

Abstract

Die Zebrafischembryo bietet eine praktische Zwecke geeigneten Modells zur Organogenese studieren und modellieren menschliche genetische Erkrankung. Trotz ihrer relativen Einfachheit der Zebrafisch Niere entwickelt und Funktionen in fast der gleichen Weise wie Menschen. Ein Hauptunterschied in der Konstruktion der menschlichen Niere ist die Anwesenheit von Millionen von Nephronen gegenüber dem Zebrafisch, der nur zwei hat. Jedoch vereinfacht eine solche komplexe System in die Grundfunktionseinheiten ist unser Verständnis, wie die Niere entwickelt und betreibt unterstützt. Im Zebrafisch ist der Mittellinie befindet Glomerulus für die erste Blutfiltration in zwei pronephric Tubuli, die beidseitig entlang der embryonalen Achse laufen vor dem Verschmelzen miteinander an der Kloake abweichen verantwortlich. Die pronephric Tubuli sind stark von bewegliche Zilien, die die Bewegung Filtrat entlang der segmentierten Röhrchen zu erleichtern bevölkert, die den Austausch von verschiedenen gelösten Stoffe, bevor sie schließlich Verlassen durch die Kloake ^2-4. Viele Gene, die für CKD, inc verantwortlichLuding diejenigen zu ciliogenesis Zusammenhang wurden im Zebrafisch ⁵ untersucht. Allerdings ist eine große Nachteil ist die Schwierigkeit bei der Beurteilung Zebrabärbling Nierenfunktion nach der Genmanipulation. Traditionelle Assays zu Funktionsstörungen der Nieren messen beim Menschen nicht translationale zu Zebrafisch erwiesen, vor allem wegen ihrer aquatischen Umwelt und der geringen Größe. Beispielsweise ist es physikalisch nicht möglich ist, Blut zu extrahieren aus embryonalen statt Fische zur Analyse von Harnstoff und Kreatinin-Gehalt, da sie zu klein sind. Hinzu kommt, dass Zebrafisch nicht genug Urin produzieren, für die Prüfung auf einem einfachen Proteinurie "Messstab", die oft bei der ersten Untersuchung von Patienten durchgeführt wird. Wir beschreiben einen Assay, der die fluoreszierende optische Transparenz der Zebrafisch verwendet, um den Abstand von einem fluoreszierenden Farbstoff quantitativ zu überwachen, mit der Zeit aus dem Gefäßsystem und durch die Niere, um eine Ausgabe der Nierenfunktion ^1,6-9 ergeben.

Introduction

Die menschliche Niere spielt eine entscheidende Rolle bei der Filterung von metabolischen Abfällen aus dem Blut und Gewinnung erforderlich Solute zellulären Homöostase aufrechtzuerhalten. Es gibt eine Reihe von menschlichen genetischen Krankheiten, Funktionsstörungen der Nieren verursachen. Die häufigste vererbte Nierenerkrankung wird autosomal dominante polyzystische Nierenerkrankung (ADPKD), gekennzeichnet durch die Entwicklung von mit Flüssigkeit gefüllten Säckchen im Nieren Tubuli; der Schaden, den cystogenesis verursacht beeinträchtigt die Nierenfunktion ^10. ADPKD hat ein Auftreten von 1: 800 bis 1: 1000 und ist für 8 - 10% der Patienten im Endstadium....

Protocol

Ethikerklärung: Tier Wartung, Tierhaltung, sowie Prozesse definiert und durch die Tiere (Scientific Procedures) Act 1986 Alle Tierversuche wurden unter der Innenminister (PIL Nr 70/7892) in Übereinstimmung mit den biologischen erteilten Lizenzen durchgeführt gesteuert Services Management Group und die Biologische Dienstleistungen Ethikkommission, SGUL, London, UK. Alle Anstrengungen wurden unternommen, um die Zahl der Versuchstiere zu reduzieren und beide Verfahren und Haltung, um das Leiden zu minimieren und zur Verbesserung der Wohlfahrt zu verfeinern.

1. Herstellung des Instruments, Narkosemittel, und Fluoreszenzfarbstoff

1. Mi....

Results

Bardet-Biedl-Syndrom (BBS) ist eine seltene, heterogene Ziliopathie, die ca. 1 betrifft: 160.000 Menschen weltweit ^16. Patienten mit einer Reihe von damit verbundenen Problemen wie polyzystischen Nieren vorhanden, anschließend Patienten benötigen häufig Dialyse oder Transplantation ^24. ESRF ist die häufigste Todesursache in den BBS, mit rund 30% der Patienten entwickeln CKD ^16. Derzeit haben 20 nicht verwandten Genen in BBS ohne veröffentlicht Genotyp-Phänotyp-Verein in Verbindung gebrac.......

Discussion

Zebrafische bieten ein wertvolles Werkzeug für die menschliche genetische Krankheitsmodell, ihre Verwendung als ein wissenschaftliches Instrument zur in vivo Erforschung detaillierte Studien der genetischen Abbau von vielen biologischen Systemen, einschließlich der Niere aktiviert. Viel ist nun, wie die Zebrafisch-Niere entwickelt und Funktionen zu verstehen. Die auffallende Parallelen zum menschlichen Nephrogenese und Homologie mit krankheitsverursachenden Gene ²¹ hat sich das Verständnis veranschau.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
P-97 SUTTER Flammender/Brauner Mikropipettenabzieher	Intracel	P-97
Borosilikat-Standard-Wandkapillaren	Harvard Apparatus	30-0017
Glasmikroskop-Objektträger	VWR International	631-0109
Epoxidharzkleber	Evo-Stik
Rhodamin B 10.000 MW markiert Dextran	Life Technologien	D-1824
N-Phenylthioharnstoff	Sigma-Aldrich	P7629
Methylenblau	Sigma-Aldrich	M9140
Ethyl-3-aminobenzoat-Methansulfonat-Salz	Sigma-Aldrich	A5040
	Methylcellulose Sigma-Aldrich	M0512
Luftkompressor	Jun-Air	OF302-15
Picospritzer III	Parker Instrumente	051-0500-900
Kompakter Mikromanipulator mit 3-Achsen-Steuerung	Marzhauser	MM33
Präparier-Stereomikroskop	Nikon	SMZ1000
Microloader-Spitzen	Eppendorf	5242956003
Dumont #5 Pinzette	Sigma-Aldrich	F6521
Tisch-Mikrometer	Pyser- SGI	02A00404