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Methodenartikel

Einrichtung eines Menschen Multiple Myeloma Xenograftmodell im Huhn, das Tumorwachstum, Invasion und Angiogenese Studieren

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⸱

DOI:

10.3791/52665

⸱

1. Mai 2015

 ,  ,  , 
1Department of Internal Medicine V, Innsbruck Medical University, 2Oncotyrol GmbH, 3Tyrolean Cancer Research Institute, 4Division of Vascular Biology, Department of Medical Biochemistry and Biophysics, Karolinska Institute

* These authors contributed equally

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Humanen multiplen Myelom (MM) Zellen erfordern die Mikroumgebung, die von mesenchymalen Zellen und extrazellulären Matrixkomponenten für das Überleben und die Proliferation. Wir gründeten eine in vivo Hühnerembryo-Modell mit eingepflanzten menschlichen Myelom und mesenchymalen Zellen zu Wirkungen von Krebsmedikamenten auf das Tumorwachstum, Invasion und Angiogenese zu untersuchen.

Zusammenfassung

Das Multiple Myelom (MM), einem bösartigen Plasmazellerkrankung, nicht heilbar und neuartige Medikamente sind erforderlich, um die Prognose von Patienten zu verbessern. Durch das Fehlen der Knochenmikroumgebung und auto / parakrine Wachstumsfaktoren menschlichen MM-Zellen sind schwierig zu kultivieren. Es besteht daher ein dringender Bedarf in vitro und in vivo-Kultursystemen richtige, um festzustellen, um die Aktion neuartiger Therapeutika auf die menschliche MM-Zellen zu untersuchen. Hier präsentieren wir ein Modell für die menschliche multiple Myelomzellen in einem komplexen 3D-Umgebung in vitro und in vivo zu wachsen. MM-Zelllinien OPM-2 und RPMI-8226 transfiziert wurden, um die GFP-Transgen exprimieren und wurden in Gegenwart von humanen mesenchymalen Zellen und Kollagen kultivierten Typ-I-Matrix als dreidimensionale Sphäroide. Zusätzlich wurden Sphäroide auf der Chorioallantoismembran (CAM) des Hühnerembryos gepfropft und das Tumorwachstum wurde durch Stereofluoreszenzmikroskopie überwacht. Beide Modelle ermöglichen die Untersuchung von neuartigen therapeutischen drugs in einer komplexen 3D-Umgebung und die Quantifizierung der Tumorzellmasse nach der Homogenisierung der Transplantate in einer Transgen-spezifischen GFP-ELISA. Außerdem kann angiogene Reaktionen des Wirtes und Invasion von Tumorzellen in das darunterliegende Wirtsgewebe täglich durch ein Stereomikroskop beobachtet und durch immunhistochemische Färbung gegen menschliche Tumorzellen (Ki-67, CD138, Vimentin) oder Host mural Zellen abdeckt Blutgefße analysierende (Desmin / ASMA).

Abschließend kann der Onplantat System studieren MM Zellwachstum und die Angiogenese in einem komplexen 3D-Umgebung und ermöglicht Screening nach neuen therapeutischen Verbindungen Targeting Überleben und die Proliferation von MM-Zellen.

Einleitung

Das Multiple Myelom (MM) ist gekennzeichnet durch die Proliferation von bösartigen Plasmazellen im Knochenmark, Knochenläsionen und Immunschwäche 1. Obwohl neue Behandlungsoptionen wie Proteasomhemmer (Bortezomib) und immunmodulatorische Medikamente (Pomalidomid und Lenalidomid) zur Verfügung stehen, bleibt MM nach wie vor eine unheilbare bösartige Erkrankung mit einer düsteren Prognose 2. Die schlechte Prognose könnte durch die außergewöhnliche Heterogenität der MM-Zellklone erklärt werden, die zu einem variablen Ansprechen auf die Therapie beiträgt, insbesondere unter langfristiger Behandlung und Selektionsdruck von MM-Klonen 3.

Die präklinische Erprobung neuer Medikamente und ihrer Kombinationen in vitro und in vivo ist ein kritischer und zeitaufwändiger Schritt für die zukünftige Arzneimittelentwicklung. Daher sind brauchbare in-vivo-Modelle von MM erforderlich, um ein besseres Verständnis der Biologie der Krankheit zu erlangen und die Entdeckung neuer Medikamente zu ermöglichen. Tatsächlich sind die besten Xenotransplantationsmodelle für hämatologische Malignome und Therapeutika immundefiziente Mäuse, wie z. B. die schwer-kombinierten immundefizienten (SCID) Mäuse 4-7, die nicht-adipösen Diabetiker/SCID (NOD/SCID) Mäuse 8,9 oder die β-Mikroglobulin-Knockout-NOD/SCID-Mäuse 10,11.

Obwohl murine Modelle menschlicher MM in einigen Aspekten dem Phänotyp menschlicher Krankheit ähneln können, werden immundefiziente Mäuse inzüchtet, simulieren daher nur eine individuelle Reaktion auf ein Medikament und die Kosten sind sehr hoch. Aufgrund der Immunsuppression benötigen Tiere besondere Erhaltungsbedingungen, und die Transplantation von humanem MM in Mäuse dauert 6 Wochen bis 2 Monate 9,12, es sei denn, die Zellen werden unter Verwendung eines technisch anspruchsvollen Verfahrens mit niedrigeren Überlebensraten der Tiere direkt in das Knochenmark transplantiert 7,13. Daher wurden neue Methoden etabliert, die stammzellbasierte Organoidmodelle 14, Tissue Engineering 15 oder ausgefeilte 3D-Zellkulturmodelle 16 verwenden. Sie werden in naher Zukunft mit klassischen Tierversuchen für präklinische Wirkstofftests konkurrieren, können aber systemische Toxizitätstests an lebenden Organismen nicht ersetzen.

Der Hühnerembryo hat sich bereits als geeigneter Organismus für die Xenotransplantation von menschlichen Zellen und Geweben erwiesen, da es bis zum Schlüpfen 17-19 keine adaptive Immunantwort gibt. Darüber hinaus spiegelt jeder Hühnerembryo aufgrund der genetischen Vielfalt innerhalb der Hühnerpopulation eine individuelle Reaktion auf applizierte Medikamente oder Tumorzellen wider. Die chorioallantoische Membran (CAM) ist ein gut etabliertes System zur Untersuchung der tumorabhängigen Angiogenese 20-22. Wenn solide Tumoren in das CAM transplantiert werden, weisen sie in vivo viele Merkmale von Krebserkrankungen auf, darunter Proliferation, Invasion, Angiogenese und Metastasierung 23-27.

Basierend auf den bisherigen Erfahrungen unserer Gruppe mit CAM-Xenotransplantatmodellen20,26,27 wurde ein humanes MM-Modell etabliert, das die Vorteile eines humanen 3D-Kultursystems mit dem Modell von ex ovo entwickelnden Hühnerembryonen kombiniert. Dieses MM-Modellsystem ermöglicht die Echtzeitüberwachung des MM-Wachstumsfortschritts, die Quantifizierung der Zellmasse und präklinische Wirkstofftests.

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Protokoll

Gemäß dem österreichischen Recht, und das Amt des Laboratory Animal Welfare der US Public Health Service Vogelembryonen nicht als lebender Wirbeltiere betrachtet, bis hatching.The NIH Office of Laboratory Animal Welfare hat geschrieben Leitlinien in diesem Bereich (http vorgesehen: // www.grants.nih.gov/grants/olaw/references/ilar91.htm und NIH Publikation Nr .: 06-4515).

1. Zellkultur und Transfektion Lentivirale

  1. Kultur MM-Zelllinien OPM-2, RPMI-8226 und die menschliche mesenchymale Stammzellen aus dem Knochenmark in RPMI1640-Medium, das mit 10% fötalem Rinderkalbsserum und 100 IU / ml Penicillin, 100 ug / ml Streptomycin und 2 mM Glutamin in Gegenwart ergänzt von 5% CO 2 bei 37 ° C.
  2. Transfektion von 5 x 10 6 HEK 293FT Zellen mit viralen Verpackungsgemisch (9 ug) DNA und 3 ug pLenti6 / V5 dest eGFP-Vektor unter Verwendung von 30 ul liposomalen Transfektionsreagenz und Transfektionsmedium (10 ml). Entfernen Transfektionsmedium nach 12 h und10 ml DMEM-Medium mit 10% Kälberserum und 1% nicht-essentiellen Aminosäuren (NEAA).
  3. Nach 5 Tagen sammeln Ständen von HEK293FT Zellen nach Zentrifugation von Schwimmzellen (1000 · g, 5 min). Bestimmen Sie Virustiter durch Echtzeit-PCR, wie an anderer Stelle 28 beschrieben.
  4. Transfektion von 1 x 10 6 MM-Zellen mit eGFP Lentivirale Partikel (1 × 10 5 Teilchen) in einem 24-Well-Platte in komplettem Wachstumsmedium. Nach 3 Tagen beginnen Auswahlprozess durch Zugabe von 2 & mgr; g / ml zum Kulturmedium Blasticidin. Für die im Handel erhältlichen eGFP Lentivirus, verwenden 500 & mgr; g / ml Neomycin.
  5. Nach 2 Wochen der Auswahl werden Cluster von eGFP exprimierenden Zellen MM erscheinen; sammeln die Zellen durch Zentrifugation (1000 × g, 5 min) und erweitern sie als OPM-2 eGFP und RPMI-8226 eGFP Unterlinien für Experimente (Kapitel 2 und 3).

2. 3D-Multiple Myeloma Spheroid Modell

  1. Chill Kollagen Typ-I-Lösung und 10 x DMEM on Eis.
  2. Mix 1/10 Volumen 10 x DMEM-Medium in Kollagen-Matrix; hinzuzufügen NaOH (0,2 N) auf einen sauren Kollagenlösung mit einem pH-Wert von 7,4 zu neutralisieren; store Kollagen / Mittellösung auf Eis.
  3. Mischen Sie transgenen MM-Zelllinien (OPM-2 eGFP oder RPMI-8226 eGFP; 250.000 pro Sphäroid) mit humanen mesenchymalen Zellen (50.000 Zellen / Sphäroid, das heißt, 30 & mgr; drop).
  4. Centrifuge Zellgemisch in 15 ml-Röhrchen (1000 · g, 5 min), kaltes vorbereitet Kollagen-Gemisch (1 ml) zu dem Zellpellet und gut mischen (mit 1000 ul Spitze).
  5. Unmittelbar Je 30 ul der Kollagen / Zell-Mischung (100 ul Spitze) in einer 24 Well-Platte auf sterilem Paraffinfilm und lassen Zell / Kollagengemisch für 30 min bei 37 ° C (siehe 1A), zu polymerisieren.
  6. Overlay MM Sphäroide mit 1 ml Kulturmedium mit 1, 10 und 100 nM Bortezomib (siehe 1B).
  7. Nach 72 h Inkubation bei 37 ° C, Dokumenten SphäroidenFluoreszenz-Stereomikroskopie (siehe Abbildung 1C).
  8. Übertragen jedes Sphäroid durch die Verwendung von Zangen mit breiten flachen Backen in einem Reaktionsrohr zur Messung von GFP (siehe Figur 1D).

3. 3D-Myeloma-Xenograft-Modell in der CAM-

  1. Hühnereier Inkubieren in einem speziellen Inkubator für Vogeleiern bei 37 ° C und 70% Luftfeuchtigkeit für drei Tage.
  2. Danach offenen Eier und Transfer-Embryonen mit Ethanol, quadratisch, 10 cm mit einem Gewicht von Kunststoffbooten mit Zellkulturplatte Deckel sterilisiert und Inkubation "ab ovo" für weitere sechs Tage, so dass die CAM ist in der Lage zu entwickeln (siehe Abbildung 2A).
  3. Chill Kollagen Typ-I-Lösung und 10 x DMEM auf Eis, Mischungs 1/10 Volumen 10 x DMEM Medium in Kollagenmatrix, In NaOH (0,2 N) auf einen sauren Kollagenlösung mit einem pH-Wert von 7,4 zu neutralisieren; store Kollagen / Mittellösung auf Eis.
  4. Mischen Sie transgenen MM-Zelllinien (OPM-2 eGFP oderRPMI-8226 eGFP; 250.000 pro Sphäroid) mit humanen mesenchymalen Zellen (50.000 Zellen / Sphäroid).
  5. Centrifuge Zellen in 15-ml-Röhrchen (1.000 × g, 5 min; für jede Testverbindung 1 Fläschchen), fügen Sie 1 ml kaltem vorbereitete Kollagenmischung mit Drogen (at gewünschte Arbeitskonzentration) zu dem Zellpellet und gut mischen (mit 1000 ul Spitze).
  6. Platzieren Kollagen Tropfen (30 & mgr; l jeweils) auf Parafilm in einem 6 für 30 min gut Pastete, um die Polymerisation der extrazellulären Matrix bei 37 ° C zu ermöglichen.
  7. Transfer "onplants" aus Schritt 3.6 mit der Verwendung von Zangen, um die unbehandelte Oberfläche des Nockens (2 cm vom Embryo) von 9 Tage alten Hühnerembryonen (4 onplants je Hühnerembryo, siehe 2B)
  8. Nach 5 Tagen in vivo Wachstum in einem Eierbrutschrank bei 37 ° C und 70% Luftfeuchte, Dokumenten Xenotransplantate durch Fluoreszenz-Stereomikroskopie (siehe 2C). Euthanize Hühnerembryonen durch Unterkühlung bei 4 ° C im Kühlschrank 5h.
  9. Xenotransplantate mit darunter liegenden CAM Gewebe zu entfernen, indem eine ophthalmische Schere und Zange mit breiten, flachen Backen. Verwenden Sie sie für die Messung der GFP (Abschnitt 4, siehe Abbildung 2D) oder für immunhistochemische Analyse von Blutgefäßen und / oder Invasion von Tumorzellen (Abschnitt 5).

4. Quantifizierung der eGFP Protein durch ELISA

  1. Übertragen Sie jede MM Sphäroid oder ausgeschnitten Xenotransplantat in 0,5 ml RIPA-Puffer, enthaltend 200 ug / ml Protease-Inhibitoren.
  2. Homogenisieren Sphäroid / Xenotransplantats mit einem Gewebe-Homogenisator auf Eis.
  3. Führen Sie drei Gefrier / Tau-Zyklen in flüssigem Stickstoff und 37 ° C Wasserbad.
  4. Zentrifuge Homogenisat bei 4 ° C für 20 min (12.000 g) und Speicher-Überstände.
  5. Verdünnte Proben 1:20 mit Assay-Puffer (200 ul) des ELISA-Kits. Messen GFP-Niveaus durch einen kommerziellen ELISA-Kit GFP unter Verwendung von biotinyliertem anti-GFP-Antikörper, entsprechend dem Protokoll des Herstellers.

5. Immunohistochemical Analyse von Blutgefäßen und eindringenden Tumorzellen

  1. Fix herausgeschnitten Xenotransplantate mit CAM-Bereich in 4% Paraformaldehyd O / N bei 4 ° C.
  2. Fixiert Xenotransplantaten in Einbettkassetten und sie in einer Gewebeeinbettung Station mit einer zunehmenden abgestuften Alkoholreihe (50%, 70%, 80%, 95% Ethanol, Xylol und Paraffin; jeder Schritt 60 Minuten).
  3. Abschnitt Xenotransplantaten (5 um) unter Verwendung eines stationären Rotationsmikrotom. Bake Paraffinschnitten auf Objektträgern O / N bei 56 ° C.
  4. Entparaffinieren Abschnitte durch eine abnehmende abgestufte Alkoholreihe bis zweifach destilliertem Wasser (Xylol, 95%, 80%, 70%, 50% Ethanol, doppelt destilliertem Wasser; jeder Schritt 10 min).
  5. Antigen-Retrieval durchzuführen in einem Wasserbad (95 ° C, 20 min) mit einem Antigen-Retrieval-Lösung (Citrat-Puffer, pH 7,0; Volumen 100 ul).
  6. Block endogene Peroxidaseaktivität mit 100 ul 3% H 2 O 2 / Methanol 30 min.
  7. Blockabschnitte in PBS,10% fötalem Kälberserum für 45 min (Volumen 100 ul).
  8. Fleck 1 Stunde mit 100 ul des primären Antikörpers (1 ug / ml) in PBS, das 1% fötales Kälberserum bei RT verdünnt.
  9. Nach dem Waschen 3-mal in PBS, inkubiert für 1 h mit biotinylierten sekundären Antikörpers (0,1 ug / ml) in PBS, das 1% fötales Kälberserum bei RT.
  10. Nach dem Waschen 3-mal in PBS auszuführen Farbreaktion durch das Avidin / Biotin-Komplex (ABC) und Diaminobenzidin (DAB) Substratlösung nach den Anweisungen des Herstellers.
  11. 5.11. Stopp-Reaktion durch die Übertragung von Abschnitten zu doppelt destilliertem Wasser, Gegenfärbung mit Hämatoxylin und montieren Abschnitte mit einem Kunst Eindeckmedium.

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Ergebnisse

In-vitro-Analyse von Zielverbindungen in 3D multiplem Myelom Sphäroid Assays

Durch die Begrenzung des Kultivierens primären menschlichen Myelomzellen in vitro etablierten wir neue 3D in vitro Kulturmodelle für menschliche MM-Zelllinien unter Verwendung einer extrazellulären Matrix und das Wachstum unterstützenden primären humanen mesenchymalen Zellen aus Knochenmark (1A, B). EGFP transgenen MM Zelllinien ermöglichen die Visualisier...

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Diskussion

Die Entwicklung neuer therapeutischer Mittel zur feuerfesten MM erfordert weniger zeitaufwendig und teuer in-vivo-Systemen, um die Empfindlichkeit des menschlichen Myelomzellen, um Medikamente zu bewerten. Bisher sind nur wenige in-vivo-Systeme für die präklinische Evaluierung neuer anti-Myelom-Therapien zur Verfügung. Alle von ihnen haben ihre Grenzen für große Screening von Substanzbibliotheken 29.

Die derzeit besten Modelle für menschliche MM-Zellen sind sehr immun-defizienten Mäusen 7,13...

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Offenlegungen

Die Autoren haben keine konkurrierenden finanziellen Interessen

Danksagungen

Die Autoren danken Frau Cornelia Heis für ihre hervorragende technische Unterstützung in der Immunhistochemie und Präparation von Hühnerembryonen. Diese Arbeit wurde gefördert durch den österreichischen Wissenschaftsfonds (FWF Grant No. P19552) und die Europäische Union (EU FP7 Projekt Optatio No: 278570).

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
RPMI-8226 ZellenDSMZACC 9STR profilierte
OPM-2 ZellenDSMZACC 50STR profiliert
Humane mesenchymale StammzellenPromoCellPC-C-12974
HEK293FT Zellen InvitrogenR700-07
RPMI1640 MediumSigma AldrichR0883
Fötales Rinderserum  HyCloneThermoScientificSH30070.03
L-Glut- Pen- Streptokokken-LösungSigmaG6784
DMEM MediumGibco31966
NEAASigma Life SciencesM7145
Transfektionsmedium/Opti-MEM Gibco51985
eGFP lentivirale PartikelGeneCopoeiaLPP-EGFP-LV105Gebrauchsfertige Viruspartikel
pLenti6/V5Dest6 eGFP-VektorInvitrogenPN 35-1271von den Autoren
ViralpowerTM Verpackungsmix InvitrogenP/N 35-1275
Transfektionsreagenz / Lipofectamin 2000Invitrogen11668-027
BlasticidinInvitrogenR210-01
NeomycinBiochromA2912
Kollagen-Typ1  RattenschwanzBD Biosciences354236
DMEM PulverLife TechnologiesArt.Nr. 10338582
PlitidepsinPharmamar
BortezomibLKT Lab., Inc.B5871
SPF-weiße HühnereierCharles Riverbefruchtet  weiße Leghorn  Hühnereier
Kunststoff-WiegeschiffchenneoLabArt.Nr. 1-1125für Ex-Ovo-Kultur
Petridish Square (Deckel)SimportD210-16für Ex-Ovo-Kultur
RIPA Puffer (10x)Zellsignalisierung#9806
Protease Inhibitor TablettenRoche11 836 170 001
Komplettes Mini EDTA-freies
GFP ELISACell Biolabs, Inc.AKR-121
Histocette IISimportM493-6
PFA  37%Roth7398.1
DPBSLonzaBE17-512F
Ethanol absolutNormapur20,821,321
Roti-HistolRothArt.Nr.6640.4
ParaplastSigmaA6330
SuperFrost ObjektträgerR. langenbrinck Art.-Nr.
Labor- u. Medizintechnik03-0060
DakoCytomation Waschpuffer 10xDakoCytomationArt.-Nr.
S 3006
Target Retrieval Solution (10x)  pH 6,1DAKOCode-Nr.
S 1699
H2O2Merck
m-a-hu ASMA-Klon 1A4DAKOM0851
m-a-hu CD138 Klon MI15DAKOM7228
m-a-hu Vimentin Klon V9DAKOM0725
m-a-hu Desmin Klon D33DAKO  M0760
m-a-hu Ki67  MIB-1  klonen  DAKO  M7240
biotinyliertes Ziegen-Anti-Maus-IgG VectorLaboratories Inc.BA-9200
Vectastain Elite ABC KitVector Laboratories Inc.# PK-6100
FAST DAB Tablet-Set.Sigma Biochemikalien# D4293
Mayer' s Hämalaun LösungMerck1,092,490,500
Roti HistokittRothArt.Nr.6638.2
Tisch-RotationsmikrotomThermo Electron, Shandon Finesse ME+
GewebeeinbettstationLeica, TP1020
Ei-InkubatorGrumbach BSS160
Stereo-Fluoreszenzmikroskop, ausgestattet mit einer Digitalkamera (Olympus E410) und flexiblem Kaltlicht Olympus, SZX10
Ultra Turrax IKA T10Homogenisator

Referenzen

  1. Kuehl, W. M., Bergsagel, P. L. Multiple myeloma: evolving genetic events and host interactions. Nat.Rev.Cancer. 2 (3), 175-187 (2002).
  2. Kumar, S. K., Gertz, M. A. Risk adapted therapy for multiple myeloma: back to basics. Leuk.Lymphoma. , (2014).
  3. Prideaux, S. M., Conway, O. E., Chevassut, T. J. The genetic architecture of multiple myeloma. Adv.Hematol. 2014, 864058(2014).
  4. Chauhan, D., et al. A novel orally active proteasome inhibitor ONX 0912 triggers in vitro and in vivo cytotoxicity in multiple myeloma. Blood. 116 (23), 4906-4915 (2010).
  5. Kuehl, W. M. Mouse models can predict cancer therapy. Blood. 120 (2), 238-240 (2012).
  6. Nefedova, Y., Gabrilovich, D. Mechanisms and clinical prospects of Notch inhibitors in the therapy of hematological malignancies. Drug Resist.Updat. 11 (6), 210-218 (2008).
  7. Yaccoby, S., Barlogie, B., Epstein, J. Primary myeloma cells growing in SCID-hu mice: a model for studying the biology and treatment of myeloma and its manifestations. Blood. 92 (8), 2908-2913 (1998).
  8. Dazzi, F., et al. Normal and chronic phase CML hematopoietic cells repopulate NOD/SCID bone marrow with different kinetics and cell lineage representation. Hematol.J. 1 (5), 307-315 (2000).
  9. Lock, R. B., et al. The nonobese diabetic/severe combined immunodeficient (NOD/SCID) mouse model of childhood acute lymphoblastic leukemia reveals intrinsic differences in biologic characteristics at diagnosis and relapse. Blood. 99 (11), 4100-4108 (2002).
  10. Feuring-Buske, M., et al. Improved engraftment of human acute myeloid leukemia progenitor cells in beta 2-microglobulin-deficient NOD/SCID mice and in NOD/SCID mice transgenic for human growth factors. Leukemia. 17 (4), 760-763 (2003).
  11. Pearce, D. J., et al. AML engraftment in the NOD/SCID assay reflects the outcome of AML: implications for our understanding of the heterogeneity of AML. Blood. 107 (3), 1166-1173 (2006).
  12. Li, M., et al. Combined inhibition of Notch signaling and Bcl-2/Bcl-xL results in synergistic antimyeloma effect. Mol.Cancer Ther. 9 (12), 3200-3209 (2010).
  13. Tassone, P., et al. A clinically relevant SCID-hu in vivo model of human multiple myeloma. Blood. 106 (2), 713-716 (2005).
  14. Ranga, A., Gjorevski, N., Lutolf, M. P. Drug discovery through stem cell-based organoid models. Adv.Drug Deliv.Rev. 69-70, 19-28 (2014).
  15. Pereira, R. F., Barrias, C. C., Granja, P. L., Bartolo, P. J. Advanced biofabrication strategies for skin regeneration and repair. Nanomedicine.(Lond). 8 (4), 603-621 (2013).
  16. Fischbach, C., et al. Engineering tumors with 3D scaffolds). Nat.Methods. 4 (10), 855-860 (2007).
  17. Boulland, J. L., Halasi, G., Kasumacic, N., Glover, J. C. Xenotransplantation of human stem cells into the chicken embryo. J.Vis.Exp. (41), (2010).
  18. Deryugina, E. I., Quigley, J. P. Chapter 2. Chick embryo chorioallantoic membrane models to quantify angiogenesis induced by inflammatory and tumor cells or purified effector molecules. Methods Enzymol. 444, 21-41 (2008).
  19. Deryugina, E. I., Quigley, J. P. Chick embryo chorioallantoic membrane model systems to study and visualize human tumor cell metastasis. Histochem.Cell Biol. 130 (6), 1119-1130 (2008).
  20. Kern, J., et al. GRP-78 secreted by tumor cells blocks the antiangiogenic activity of bortezomib. Blood. 114 (18), 3960-3967 (2009).
  21. Ribatti, D., Nico, B., Vacca, A., Presta, M. The gelatin sponge-chorioallantoic membrane assay. Nat.Protoc. 1 (1), 85-91 (2006).
  22. Ribatti, D. The chick embryo chorioallantoic membrane as a model for tumor biology. Exp.Cell Res. , (2014).
  23. Dohle, D. S., et al. Chick ex ovo culture and ex ovo CAM assay: how it really works. J.Vis.Exp. (33), (2009).
  24. Kobayashi, T., et al. A chick embryo model for metastatic human prostate cancer. Eur.Urol. 34 (2), 154-160 (1998).
  25. Koop, S., et al. Fate of melanoma cells entering the microcirculation: over 80% survive and extravasate. Cancer Res. 55 (12), 2520-2523 (1995).
  26. Martowicz, A., Spizzo, G., Gastl, G., Untergasser, G. Phenotype-dependent effects of EpCAM expression on growth and invasion of human breast cancer cell lines. BMC.Cancer. 12, 501(2012).
  27. Martowicz, A., et al. EpCAM overexpression prolongs proliferative capacity of primary human breast epithelial cells and supports hyperplastic growth. Mol.Cancer. 12, 56(2013).
  28. Geraerts, M., Willems, S., Baekelandt, V., Debyser, Z., Gijsbers, R. Comparison of lentiviral vector titration methods. 6, 34(2006).
  29. Farnoushi, Y., et al. Rapid in vivo testing of drug response in multiple myeloma made possible by xenograft to turkey embryos. Br.J.Cancer. 105 (11), 1708-1718 (2011).
  30. Wunderlich, M., Krejci, O., Wei, J., Mulloy, J. C. Human CD34+ cells expressing the inv(16) fusion protein exhibit a myelomonocytic phenotype with greatly enhanced proliferative ability. Blood. 108 (5), 1690-1697 (2006).
  31. Hideshima, T., Mitsiades, C., Tonon, G., Richardson, P. G., Anderson, K. C. Understanding multiple myeloma pathogenesis in the bone marrow to identify new therapeutic targets. Nat.Rev.Cancer. 7 (8), 585-598 (2007).
  32. Parikh, M. R., Belch, A. R., Pilarski, L. M., Kirshner, J. A three-dimensional tissue culture model to study primary human bone marrow and its malignancies. J.Vis.Exp. (85), (2014).
  33. Schuler, J., Ewerth, D., Waldschmidt, J., Wasch, R., Engelhardt, M. Preclinical models of multiple myeloma: a critical appraisal. Expert.Opin.Biol.Ther. 13, Suppl 1. S111-S123 (2013).
  34. Kirshner, J., et al. A unique three-dimensional model for evaluating the impact of therapy on multiple myeloma. Blood. 112 (7), 2935-2945 (2008).
  35. Jilani, S. M., et al. Selective binding of lectins to embryonic chicken vasculature. J.Histochem.Cytochem. 51 (5), 597-604 (2003).

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H hnerembryo ModellTumorwachstumsanalyseGFP ExpressionsmessungTransplantat der Chorioallantois MembranStereofluoreszenzmikroskopieimmunhistochemische F rbungGFP ELISA Quantifizierunghumane mesenchymale ZellenKollagen Typ I Matrix
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