Methodenartikel
Dieses Protokoll beschreibt die wiederholte hypoxische Präkonditionierung oder kurze Exposition gegenüber systemischer Hypoxie, die das Infarktvolumen und die Störung der Blut-Hirn-Schranke nach einem vorübergehenden Verschluss der mittleren Hirnarterie bei Mäusen reduziert. Es wird auch die duale Quantifizierung des Infarktvolumens und der Störung der Blut-Hirn-Schranke nach einem Schlaganfall beschrieben, um die Wirksamkeit des neurovaskulären Schutzes zu bewerten.
Experimentellen Tiermodellen von Schlaganfall sind wertvolle Werkzeuge für das Verständnis Schlaganfall Pathologie und Entwicklung wirksamerer Behandlungsstrategien. A 2 Wochen Protokoll für sich wiederholende hypoxischen Präkonditionierung (RHP) induziert langfristigen Schutz gegen das zentrale Nervensystem (ZNS) verletzt in einem Mausmodell der fokalen ischämischen Schlaganfall. RHP besteht aus 9 stochastischen Belichtungen auf Hypoxie, die sowohl in der Zeitdauer (2 bzw. 4 h) und die Intensität (8% und 11% O 2) zu variieren. RHP reduziert Infarktvolumen, Blut-Hirn-Schranke (BHS) Störung, und die nach einem Schlaganfall entzündliche Reaktion für Wochen nach dem letzten Auftreten von Hypoxie, was auf eine langfristige Induktion einer endogenen ZNS-Schutz Phänotyp. Die Methodik für die Dual-Quantifizierung der Infarktvolumen und BBB Störung wirksam ist bei der Beurteilung der neurovaskulären Schutz bei Mäusen mit RHP oder andere vermeintliche Neuroprotektoren. Erwachsene männliche Swiss Webster-Mäuse wurden durch RHP oder Dauer-äquivalenten Belichtungen auf 21% O vorkonditioniert (dh Raumluft). A 60 min transiente mittleren Hirnarterie (tMCAo) wurde 2 Wochen nach der letzten induzierten hypoxischen Exposition. Sowohl der Okklusion und Reperfusion wurden durch transkranielle Laser-Doppler-Flussmessung bestätigt. Zweiundzwanzig Stunden nach der Reperfusion, Evans Blue (EB) wurde intravenös durch eine Injektion in die Schwanzvene verabreicht. 2 Stunden später wurden die Tiere mit Isofluran Dosierung und Gehirnschnitte geopfert wurden mit 2,3,5-Triphenyltetrazoliumchlorid (TTC) angefärbt. Infarkte Volumina wurden dann quantifiziert. Als nächstes wurde EB aus dem Gewebe über 48 Stunden extrahiert, um BBB-Störung nach tMCAo bestimmen. Zusammenfassend ist RHP ein einfaches Protokoll, repliziert werden kann, mit minimalen Kosten, um langfristige endogenen neurovaskulären Schutz vor Schlaganfall Verletzungen bei Mäusen zu induzieren, mit der Translationspotential anderen ZNS-basierte und systemische proinflammatorische Krankheitszuständen.
Als die führende Ursache für Invalidität bei Erwachsenen und die vierte führende Ursache des Todes ist der Schlaganfall eine der am stärksten beeinträchtigenden Krankheitszuständen vor der erwachsenen Bevölkerung der Vereinigten Staaten. 1 Tiermodellen von Schlaganfall ermöglichen experimentelle Erforschung neuer Methoden zur Reduzierung ischämischer Verletzung und Verbesserung der post-Wiederherstellung nach Schlaganfall. Ein neuartiger Weg für solche translationale Forschung ist Präkonditionierung. Vorkonditionierung ist die vorsätzliche Verwendung eines nicht-schädigenden Stimulus, um Schäden durch eine nachfolgende, und schwerer, Verletzungen zu vermei....
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Hinweis: Dieses Protokoll wurde von der Institutional Animal Care und Verwenden Committee (IACUC) am UT Southwestern Medical Center, die von den National Institutes for Health (NIH) Politik für Versuchstiernutzung bleibt genehmigt.
1. Repetitive hypoxische Präkonditionierung
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
An dieser Studie nahmen 25 männliche Swiss Webster-Mäuse, die 10 Wochen alt waren zu Beginn der Randomisierung in RHP (n = 10) oder 21% O 2 (n = 15) Gruppen. Zwei Wochen nach der letzten RHP Belichtung wurden chirurgische Verfahren durchgeführt, wobei Gruppen verblindet und zwischen den Tagen ausgeglichen. Nach tMCAo starb 1 Maus während der postoperativen Erholung und 1 Maus wurde von der Studie ausgeschlossen, weil sie nicht die Reperfusion CBF Kriterium erfüllen. Beide Mäuse waren ausgeschlossen von der 21.......
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Eine einmalige Exposition, um systemische Hypoxie (dh 2 Stunden von 11% O 2) bei Mäusen "transient" schützt das Gehirn vor tMCAo, 29 bedeutet, die epigenetische Antwort auf die hypoxische Präkonditionierung Herausforderung ist von kurzer Dauer, und die Grundlinie Phänotyp innerhalb restauriert Tagen. Repetitive Präsentationen des hypoxischen Präkonditionierung Reiz dramatisch verlängern die Dauer der neuroprotektiven Phänotyp. 6 Viele Studien haben gezeigt, dass die Hä.......
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Die Autoren haben nichts offenzulegen.
Besonderer Dank geht an das Gidday-Labor für ihre Arbeit bei der Entwicklung des RHP-Protokolls, sowie an die Neuro-Models Facility (UTSW) für ihre Unterstützung bei den tMCAo-Operationen. Diese Arbeit wurde durch Zuschüsse der American Heart Association (AMS), des Haggerty Center for Brain Injury and Repair (UTSW; AMS) und der Spastischen Paralyse Research Foundation des Distrikts Illinois-Eastern Iowa von Kiwanis International (JMG).
....Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Durchflussmesser, Regler | VetEquip, Inc | Sonderauftrag | Vier Durchflussmesser sind an einem 6,0 mm flexiblen PVC-Schlauch befestigt, der mit einer Kunststoffbuchse mit dem Einlassanschluss jeder Induktionskammer verbunden ist. Diese Durchflussmesser sind mit einer Metallstange von 6,5" x 1" x 1" verschraubt. Dieser Metallstab ist mit einem MI-246-P-Manometer mit DISS-Ausgang verschraubt. Dieses Manometer und Durchflussmessgerät kann mit einem Schraubenschlüssel an jede neue Gasflasche angebaut werden. |
| 21% O2Tank | AirGas | OX USP200 | |
| 11% O2 Tank | AirGas | Spezialauftrag | |
| 8% O2 Tank | AirGas | Sonderbestellung | |
| 15 L Induktionskammern | VetEquip | 941454 | |
| Moor Laber Dopper Flow | Moor Instruments | für moorVMS-LDF1-HP | mit 0,8 mm Durchmesser |
| Hochintensive Beleuchtung | Nikon | NI-150 | |
| Zoom Stereomikroskop | NIkon | SMZ800 | Andere Operationsmikroskope können verwendet werden. |
| Kent Scientific Right Temperature CODA | Kent Scientific Corporation | Nicht mehr hergestellt | Empfohlener Ersatz ist PhysioSuite mit RightTemp Temperaturüberwachung und homöothermer Steuerung (Kent Scientific, #PS-RT). |
| Hovabator Brutkasten | Stromberg's 2362-E | Unser Modell ist der 2362N. 2362E ist ein neueres Modell und verfügt über ein elektronisches Thermostat. | |
| V010 Anästhesiesystem | VetEquip | 901807 | beinhaltet: einen zehn Fuß langen Hochdruck-Sauerstoffschlauch, einen Rahmen, einen Durchflussmesser, eine Sauerstoffspülung, einen Verdampfer, einen Beatmungskreislauf, eine Kammer, Nasenkonusen, Abgasevakuierungsschläuche und zwei VapoGuard-Filter |
| mit 250 ml Isofluran; | Butler Schein | NDC-11695 | |
| D-6 Vet Trim Animal Akku-Trimmer | Andis | #23905 | Ersatzklingen sind bei Andis erhältlich (#23995) |
| Betadine | Fisher Scientific | 19-898-867 | |
| Q-tips | Mehrere Verkäufer | Katalognummer nicht verfügbar | |
| Mullbinden | Fisher Scientific | 67622 | |
| OP-Abdecktuch | Fisher Scientific | GM300 | |
| Seiden-Nähte | Look/Div Surgical Specialties | SP115 | |
| Nylon Nähte | Look/Div Surgical Specialties | SP185 | |
| Durmont #5 Pinzette (2) | Feine wissenschaftliche Werkzeuge | 11251-35 | Abgewinkelt 45°; |
| Chirurgische Schere | Feine Wissenschaft Werkzeuge | 14028-10 | |
| 3 mm Vannas | Kent Scientific Corporation | INS600177 | gerader Klinge |
| Fine Scientific Tools | 13002-10 | ||
| Okkludierende Filamente | Washington University | Spezialauftrag | Filamente werden an der Washington University silikonbeschichtet und den UTSW-Einrichtungen gegen Gebühr zur Verfügung gestellt. |
| Evans | Blue Sigma Aldritch | E2129-10G | |
| Filterpapier | Sigma Aldritch | WHA1001150 | 150 mm, Kreise, Güteklasse 1 |
| Wiegen Boote | Fisher Scientific | 02-202-101 | 2,5" Durchmesser |
| 0,9% Natriumchlorid-Injektion USP | Baxter Pharmaceutics | 2B1321 | |
| 0,3 cc Insulinspritze mit 29-Gauge-Nadel | Becton Dickinson Labware | 309301 | |
| Rückhaltesystem mit flachem Boden | Braintree Wissenschaftlich | FB M | 2,0" Durchmesser |
| TTC | Sigma | T8877 | |
| 10x PBS, pH 7,4 | Fisher Scientific | BP399-20 | |
| Wasserbad | Mehrere Verkäufer | Katalognummer nicht verfügbar | Szintillationsröhrchen mit TTC können alternativ zum Wasserbad manuell unter fließendes warmes Wasser gehalten werden. |
| Styroporplatte | Mehrere Verkäufer | Katalognummer nicht verfügbar | |
| Großes Spritzenset | PumpSystems Inc | P-SYRKIT-LG | |
| Perfusionspumpe | PumpSystems Inc | NE-300 | |
| 60 cc Spritze | Fisher Scientific | NC9203256 | |
| 27 Gauge geflügeltes Infusionsset | Kawasumi Laboratories, Inc | D3K1-25G 1 | |
| 20 ml Szintillationsfläschchen | Fisher Scientific | 50-367-126 | |
| Spatel aus Edelstahl | Fisher Scientific | 14-373-25A | |
| Alto Acryl 1,0 mm Mausgehirn, koronal | CellPoint Wissenschaftlich | Katalognummer nicht verfügbar | |
| 0,21 mm Klingen aus rostfreiem Stahl, 25 Stück | CellPoint Scientific | Katalognummer nicht verfügbar | Wiederverwendbare Kryostat-Schaufeln sind eine kostengünstige Alternative. |
| 4% Paraformaldehyd | Santa Cruz Biotechnologie | SC-281692 | |
| Superfrost Objektträger | Fisher Scientific | 12-550-15 | |
| HP Scanjet G4050 | Mehrere Verkäufer | Katalognummer nicht verfügbar | Andere kommerzielle Scanner eignen sich für diesen Schritt im Protokoll. |
| BildJ | Katalognummer des National Institute | of Health nicht verfügbar | |
| Analysenwaage | Mettler Toledo | XSE 205U | |
| Präzisions-Kompaktofen | Thermo Scientific | ||
| 1,7 ml Mikrozentrifugenröhrchen (Eppendorfs) | Denville Scientific | C2170 | |
| Formamid | Fisher Scientific | BP228-100 | |
| 96-Well-Platten | Fisher Scientific | 07-200-9 | |
| Epoch Mikroplatten-Spektralphotometer | BioTek | Katalognummer nicht verfügbar |
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Genehmigung beantragen, um den Text oder die Abbildungen dieses JoVE-Artikels zu verwenden
Genehmigung beantragen