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Methodenartikel

Ein Test zur Messung der Wirkung von Ethanol auf die Fortbewegungsgeschwindigkeit der

8.5K Ansichten

⸱

DOI:

10.3791/52681

⸱

9. April 2015

 ,  ,  , 
1Department of Pharmacology and Toxicology, Virginia Commonwealth University, 2VCU Alcohol Research Center, Virginia Commonwealth University

In diesem Artikel

Zusammenfassung

C. elegans ist ein nützliches Modell zur Untersuchung der Auswirkungen von Ethanol auf das Verhalten. Wir stellen einen Verhaltenstest vor, der die Auswirkungen von Ethanol auf die Fortbewegungsgeschwindigkeit von krabbelnden Würmern quantifiziert; sowohl die anfängliche Empfindlichkeit als auch die Entwicklung einer akuten funktionellen Toleranz gegenüber Ethanol können mit diesem Test gemessen werden.

Zusammenfassung

Alkoholabhängigkeitsstörungen sind ein bedeutendes Problem der öffentlichen Gesundheit, für das es nur wenige wirksame Behandlungsstrategien gibt. Eine Schwierigkeit, die die Entwicklung wirksamerer Behandlungen verzögert hat, ist das relative Fehlen an Verständnis der molekularen Grundlagen der Auswirkungen von Ethanol auf das Verhalten. Der Fadenwurm Caenorhabditis elegans (C. elegans) bietet ein nützliches Modell, um Hypothesen über die molekularen Auswirkungen von Ethanol zu generieren und zu testen. Hier beschreiben wir einen Test, der entwickelt und verwendet wurde, um die Rollen bestimmter Gene und Umweltfaktoren bei Verhaltensreaktionen auf Ethanol zu untersuchen, bei denen die Fortbewegung die Verhaltensreaktion ist. Ethanol verursacht dosisabhängig eine akute Verringerung des Kriechens auf einer Agaroberfläche. Die Wirkungen sind dynamisch; Tiere, die einer hohen Konzentration ausgesetzt sind, zeigen eine anfänglich starke Verringerung des Kriechens, hier als anfängliche Empfindlichkeit bezeichnet, und erholen dann trotz der anhaltenden Anwesenheit des Medikaments teilweise die Fortbewegungsgeschwindigkeit. Diese durch Ethanol induzierte Verhaltensplastizität wird hier als Entwicklung einer akuten funktionellen Toleranz bezeichnet. Dieser Test wurde verwendet, um zu zeigen, dass diese beiden Phänotypen unterschiedlich und genetisch trennbar sind. Der unkomplizierte Fortbewegungstest, der hier beschrieben wird, eignet sich zur Untersuchung der Auswirkungen sowohl genetischer als auch umweltbedingter Manipulationen auf diese akuten Verhaltensreaktionen auf Ethanol bei C. elegans.

Einleitung

Alkoholkonsumstörungen (AUD) sind weit verbreitet und verursachen ernsthafte gesundheitliche, soziale und wirtschaftliche Probleme. Bei Menschen wird die Anfälligkeit für die Entwicklung einer AUD stark sowohl durch Genetik als auch durch die Umwelt beeinflusst1,2. Ein starker physiologischer Prädiktor für die Missbrauchsanfälligkeit ist das anfängliche Reaktionsniveau (LR) auf Alkohol (Ethanol), das von naiven Trinkern gezeigt wird3-5. Dieses LR-Phänotyp wird durch genetische und nicht-genetische Komponenten beeinflusst6. Die Bestimmung der molekularen Mechanismen, die die LR zu Ethanol beeinflussen, ist ein wichtiges Ziel der Untersuchung von Ethanol-Reaktionsverhalten.

Der Fadenwurm Caenorhabditis elegans wird zunehmend als Modell für die Untersuchung der Auswirkungen von Ethanol auf das Verhalten verwendet7-9. Es gibt eine starke molekulare Konservierung in der Maschinerie der Nervensystemfunktion zwischen Würmern und Säugetieren, und mehrere Gene, die gezeigt haben, dass sie die LR zu Ethanol in Würmern beeinflussen, haben gezeigt, dass sie LR zu Ethanol in Säugetieren beeinflussen10-16 und sind bei Menschen in die Missbrauchsanfälligkeit involviert17-19.

Ethanol berauscht Würmer, was sich in einer Abnahme ihrer Fortbewegungsgeschwindigkeit widerspiegelt. Mehrere verschiedene Laboratorien haben Verhaltenstests entwickelt, die sich in mehreren Punkten unterscheiden, zum Beispiel das untersuchte Fortbewegungsverhalten (Kriechen versus Schwimmen11,12,14,20,21) oder die Zusammensetzung der Lösungen, in denen die Tests durchgeführt werden (Nematoden-Wachstumsmedium versus Dent’s Saline20,22). Interessanterweise haben diese verschiedenen Tests etwas unterschiedliche Dosis-Wirkungs-Profile für die Auswirkungen von Ethanol ergeben. Diese Ergebnisse haben auf wichtige Unterschiede in den zugrunde liegenden Verhaltensweisen des Kriechens und Schwimmens9,23 sowie auf eine Rolle der Umweltvariable Osmolarität bei Ethanol-Reaktionen20 hingewiesen und haben die Bedeutung der Beschreibung der experimentellen Details der verschiedenen Tests hervorgehoben.

Ein Test zur Messung der akuten Auswirkungen von Ethanol auf das Kriechverhalten wird hier vorgestellt. Dieser Test wurde ausführlich zur Untersuchung der genetischen und umweltbedingten Einflüsse auf die LR zu Ethanol verwendet8,10,20,24,25. Das LR-Phänotyp bei Säugetieren ist ein Zusammenspiel von mindestens zwei Komponenten, der anfänglichen Empfindlichkeit gegenüber Ethanol und der akuten funktionellen Toleranz gegenüber Ethanol26,27. Bei Würmern wurde gezeigt, dass sich das LR-Phänotyp durch die Verwendung dieses Verhaltenstests in diese beiden Komponenten trennen lässt. Die Einflüsse genetischer und umweltbedingter Manipulationen auf beide Phänotypen können mit diesem einzelnen Test untersucht werden. Wichtig ist, dass diese beiden Phänotypen genetisch trennbar sind.

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Protokoll

1. Schritte für den am Tag vor dem Test durchführen

  1. Wählen L4 Stadium Würmer an die frische Nematoden Wachstumsmedium (NGM) Platten ausgesät mit einem Rasen von OP50 E. coli und Kultur sie bei 20 CO / N. Jeder Test Zustand erfordert 10 Würmer; holen einen Überschuss von Würmern für O / N-Verlust von Würmern ermöglichen.
    1. Nur Tiere, die erste Test-Tag Erwachsene sind; viele Mutanten wachsen mit einer geringeren Geschwindigkeit als der Wildtyp. Stellen Sie den Zeitpunkt der Kommissionierung für Stämme, die Entwicklungsverzögerungen haben, so dass alle getesteten Tiere ersten Tag Erwachsene.

2. Schritte für den am Tage der Durchführung des Tests

  1. Vorbereitung für den Test:
    1. Führen Sie Tests auf Standard ungeimpften 60 x 15 mm NGM-Platten. Trocknen Sie alle Platten bei 37 C für 2 h verwendet werden, mit Deckel aus. Für jede experimentelle Studie, verwenden Sie vier getrocknete NGM-Platten; diese werden die 0 mM und 400 mM Ethanol Assay-Platten und die sie begleitenden Akklimatisierung Platten sein.
      HINWEIS:Die Verwendung von NGM-Platten ist es wichtig, Unterschiede in der Zusammensetzung der Platten, insbesondere deren Osmolarität kann stark Einfluss auf die Dosis-Antwort von Ethanol auf Verhalten ist dies aufgrund, zumindest teilweise auf Änderungen in der Menge von Ethanol von den Tieren 20 akkumuliert. NGM-Agar ist 160 mOsm.
    2. Nach dem Trocknen wiegen jede der ungeimpften NGM-Platten, um im Assay verwendet werden und das Gewicht. Bestimmen das Volumen der Medien in den Platten basierend auf dem Gewicht einer leeren Platte. Um die Umwandlung des Gewichts des Agars zu Volumen anzunähern, davon ausgehen, dass die Medien wiegt das gleiche wie ein gleiches Volumen Wasser.
      HINWEIS: Unsere beständigsten Ergebnisse wurden mit NGM Medien, die ausreichend entwässert hat, dass ein Original 10 ml Volumen hat eine Nachtrocknungsvolumen zwischen 8,3 bis 8,9 ml gefunden. Eine Alternative zu der 2 Stunden Trockenzeit ist, um zu trocknen, bis die Platten erreichen diesen Volumenbereich, um Unterschiede in Inkubatoren ausmachen.
    3. Schmelze 4 Kupferringe (Innendurchmesser von 1.6 cm) in der Oberfläche jeder der Platten als Hürden für die verschiedenen Genotypen oder Behandlungsgruppen worms.Grasp jeder Ring mit einer Zange und Hitze in einer Flamme (eine starke Flamme eines Bunsenbrenners funktioniert gut) für etwa 3 handeln sec. Sofort legen Sie den Ring auf einer Platte, während immer noch den Ring mit der Zange, um sie von "Überspringen" zu verhindern.
      1. Sicherzustellen, dass der Ring ruht flach auf der Oberfläche des Agars durch Herunterdrücken mit der Zange an mehreren Stellen auf dem Ring. Beim Anbringen des Rings, seien Sie vorsichtig, um Platz für weitere drei Ringe zu verlassen.
      2. Schmelzen die drei zusätzlichen Kupferringe in die Oberfläche der Platte, wobei darauf zu ihnen so nahe wie möglich beieinander zu platzieren, so dass alle vier werden in das Sichtfeld der Kamera sein.
        HINWEIS: Erstellen Sie eine gute Abdichtung mit dem Agar ist wichtig, um die Würmer in den Ringen während des Tests zu halten. Ringe, die um überspringen auf der Platte ist unwahrscheinlich, dass die korrekte Abdichtung mit dem Agar zu machen undkann das Agar, der Würmer zu graben können und stört die Visualisierung der Würmer Narbe.
      3. Für jede Testplatte vorbereiten eine begleitende "Akklimatisierung" Platte, die getrocknet werden sollte und ungeimpften und kein Ethanol erhalten. Zeigen vier Kupferringe auf diesen Platten.
    4. Kennzeichnen die Unterseite der Platten neben jeder Ring mit dem Wurmstamm, in den Ring eingesetzt werden, wobei darauf zu nicht im Sichtfeld der Ring selbst schreiben. Bringen Sie die Etiketten auf der Testplatte mit der dazugehörigen Akklimatisierung Platte.
    5. Berechnen der Menge von 100% igem Ethanol zu jeder Testplatte hinzuzufügen, so dass die Endkonzentration 0 mM oder 400 mM Ethanol (Gewicht zu Volumen). Für jedes Experiment (n = 1), wird eine 0 mM und eines 400 mM Ethanol Platte sein; Akklimatisierung Platten erhalten keine Ethanol. Hinzufügen des Ethanols Pipettieren sie um die Oberfläche der Platte. Verwenden Labor Film, um die Platte zu versiegeln und lassen Sie es auf der Tischplatte für 2 Stunden ins Gleichgewicht.
    6. Wenn 1,5 Stunden verstrichen ist, beginnt der Akklimatisierungsschritt des Assays, Schritt 2.2.
  2. Führen Sie die Fortbewegung Test: Testplatten
    1. Sorgfältig über 10 Würmer von jeder Versuchsgruppe zum Zentrum von einem Kupferring auf der Akklimatisierung Platte. Entfernen Sie alle Lebensmittel, die durch Kratzen leicht mit dem Wurm Pick auf dem Agar an dieser Stelle zu sehen ist. Variiert die Reihenfolge, in der die Versuchsgruppen werden auf den Platten in experimentellen Studien legen, so dass die gleichen Stämme werden auf den Platten in der gleichen Reihenfolge in den Studien legen.
      HINWEIS: Das Ziel ist es, die Tiere auf dem Teller mit minimalen Mengen von Lebensmitteln zu übertragen, denn wenn Lebensmittel auf dem Akklimatisierung Platte an der Testplatte übertragen die Würmer zu aggregieren um das Essen und die Wirkung des Medikaments auf die Fortbewegung wird verdeckt werden.
    2. Achten Sie darauf, die Oberfläche des Agar mit dem Pick zu brechen, da dies ermöglicht es die Würmer zu graben und den Test zu unterbrechen. Die Würmer bei RT inkubieren für 30 Minuten.
    3. Stellen Sie sicher, dass es eine entsprechende Abstand zwischen den Einweihungen jeder Platte. Ein erfahrener Experimentator 40 Tiere, 10 / ring für 4 Ringe in <1,5 min bewegen, aber jedes Intervall von bis zu 2 Minuten ist akzeptabel. Der Standardtest hat Filme Aufnahme bei 10-12 min und 30 bis 32 Minuten der Exposition sowohl für 0 mM und 400 mM Ethanol.
    4. Initiieren Sie die Akklimatisierung Platte für die 0 mM Belichtung und der Akklimatisierung Platte für die 400 mM Exposition ca. 2 min und 30 s auseinander, um für das Speichern der ersten Film-Datei, bevor der zweite Film müssen anfangen können.
    5. Nach dem 30-Minuten Eingewöhnungszeit, übertragen Sie die Würmer aus den Akklimatisierung Platten zu den Testplatten. Übertragen Sie die Würmer zu den Testplatten (0 mM oder 400 mM Ethanol) in der gleichen Reihenfolge, dass sie auf die Akklimatisierung Platte gegeben, die Verfolgung des Zeitpunkts zwischen den Fertigstellungen jeder Platte. Verschließen Sie die Platte mit Labor Film, um den Verlust von Ethanol zu Verdampfung zu minimieren.
    6. Use eine Schöpfbewegung mit einer dünnen Kanten abgeflacht Wurm Pick Würmer auf der Oberseite des abgeflachten Pick sammeln. Wird die Übertragung von Würmern aus dem ungesetzten Akklimatisierung Platte an der Testplatte ohne die Verwendung von Bakterien, die üblicherweise bei der Übertragung Würmer verwendet wird, da es hilft, die Schnecke zu der Aufnahme kleben.
      HINWEIS: Die Geschwindigkeit, mit denen die Tiere in diesem Schritt transferiert ist sehr wichtig, weil die ersten Würmer auf der Platte länger als die letzten Würmer zu der Platte zugegeben, um Ethanol ausgesetzt werden, und früheren Zeitpunkten können einige zeitabhängige Wirkung. Dies ist der Hauptgrund für die dreh Stämme werden auf einer Platte zuerst über Experimentwiederholungen gesetzt.
  3. Führen Locomotion Assay: Die Dreharbeiten
    1. Mikroskop verwenden / Kamera-Kombination, die für die gleichzeitige Darstellung aller vier Ringe in dem Sichtfeld (ca. 42x42 mm 2 Quadrat), ermöglicht, wie einem Mikroskopobjektiv 0,5x, 0,8x Vergrößerung und einer Kamera mit einer Auflösung von 2048x2048 7,481; m Pixel-CCD.
    2. Verwenden Sie gleichmäßige Ausleuchtung über das Sichtfeld, das in der Objekterkennung in der Intensitätsschwelle Schritt unterstützt (siehe unten). A 3 "x3" Hintergrundbeleuchtung funktioniert gut.
    3. Bild die Würmer auf einer Platte positioniert Medienseite nach oben (Deckel nach unten), der Kontrast, die bei der Verwendung der Hintergrundbeleuchtung im Vergleich zu einem herkömmlichen Mikroskop Durchlichtquelle verloren wird erzeugt.
    4. Bereiten Sie die Bildanalyse-Software, um Zeitraffer-Filme der sich bewegenden Würmern zu erfassen. Legen Sie die Software zur Erfassung 12-Bit-Graustufenbilder alle 1 Sek, als 2-min (120 Rahmen) Film. Um die Größe der Ausgabedatei zu reduzieren, doch behielt er ausreichende Bildauflösung, mit einem 2x2 Binning-Modus zu 1024x1024 Pixel Bilder zu fassen.
    5. Notieren Sie sich die Filme. Beginnen der Aufzeichnung eines 120-Rahmens Film der ersten Platte (0 mM Ethanol) 10 min nach der letzten Würmer wurden auf dieser Platte angeordnet. Speichern Sie die Videodatei.
    6. Notieren Sie sich die zweite Platte (400 mM Ethanol). Wiederholen Sie diesen Vorgang fürbeide Platten ab 30 Minuten nach der letzten Würmer wurden auf der ersten Platte (0 mM Ethanol) platziert, um die 30 bis 32 min Zeitpunkten für jedes Engagement mit ein.
      HINWEIS: Lassen Sie ausreichend Zeit, um die Bilddateien nach jeder Aufnahme-Session, bevor die Aufnahme beginnt die nächste Platte zu analysierende speichern.
    7. Für Zukunftssicherheit der archivierten Filme und, damit diese Filme zu öffnen und von anderen öffentlichen Bereich Open-Source-Bildbearbeitungssoftware-Programmen wie ImageJ 28 analysiert werden, wandeln eine Kopie jeder Film in 8-Bit 256 Graustufen TIFF-Dateien.
      HINWEIS: Die hier beschriebene Bildanalyse-Software ein proprietäres Dateiformat verwendet.
  4. Die Analyse der Filme mit ImagePro Software.
    1. Einmal erfasst, analysiert die Filme mit Hilfe von Image-Pro Plus-Software oder den Gegenwert.
      HINWEIS: Eine Vielzahl von anderen Objekt-Tracking-Software zur Verfügung, die verwendet wurde, um mehrere C erfolgreich verfolgen elegans zu einem Zeitpunkt 29 und solchenSoftware könnte einem angemessenen Ersatz für die hier beschriebene, da die Objektidentifikation Schritte auf ähnlichen Prinzipien. Das beschriebene Verfahren bezieht sich auf Image-Pro Plus-Software-Versionen von 6,0 bis 6,3 und 7,0, neuere Versionen von Image-Pro Plus-Software kann geringfügige Unterschiede haben.
    2. Analysieren Sie Filme in 2-min (120 Rahmen) Segmenten. Erstens, einen Filter auf die Bilder, um den Hintergrund glätten und verbessern Sie den Kontrast der Wurm Objekte. Wählen Sie den Filter wie folgt: Menü> Prozess> Filter> Zubehör> Flatten: Parameter: Hintergrund = Dunkel; Verfügen Breite = 20 Pix.
    3. Re-speichern Sie die Filme nach dem Filterschritt, sondern auch in der Originalfilm in seiner ungefiltert zu erhalten.
      1. Analysieren der Fortbewegung eines Tiere in jeder Ring getrennt mit einem kreisförmigen Bereich von Interesse (ROI), der angeordnet ist und bemessen ist, um mit dem Kupferring überlappt. Identifizieren und verfolgen die Würmer mit dem Menü> Messen> Track Objects ... Befehl; Dadurch wird das Tracking-Data Tabellenfenster. Der Button-Tracking-Optionen können bestimmte Titel ausgeschlossen werden und zu experimentellen Artefakte begrenzen.
    4. Unter dem Reiter Auto Tracking, verwenden Sie die folgenden Parameter: Spur-Parameter: Geschwindigkeits-Grenzwert (Suchradius) = 400 & mgr; m / Rahmen, Beschleunigungsbegrenzung = Auto, Mindestgesamtstreckenlänge = 400 & mgr; m Wiegende Bewegung type = chaotisch; Objekte in Spuren Parameter: Lassen Teilspuren = yes, Mindestlänge = 21 Frames, Kamera Vorhersage Tiefe = 1 Frame.
    5. Um die Verfolgung einzuleiten, klicken Sie auf Suche Alle Titel automatisch funktionieren um das Dialogfeld Count / Größe Optionen und das Dialogfeld Verfolgung aufzurufen. Wählen Sie die Option Manuell für die Intensitätsbereichsauswahl im Dialogfeld Count / Größe, die die wichtige Schwelle Schritt, der die Graustufen-Intensität der Wurm Pixel verwendet, um einen Wurm Objekt zur Analyse hervorheben und die helleren Hintergrund Pixel ignorieren bietet.
      1. Stellen Sie die Intensität Schwelle sliders (eine, die obere Grenze gesetzt, ein, um die untere Grenze gesetzt), um einen inklusiven Bereich, die alle dunklen Objekten unterstreicht erstellen. Ein Bereich von 0-1,500 auf einer Skala von 0-4,095 ist ein guter Ausgangspunkt für die Feinabstimmung.
      2. Anwenden einer Filtergröße von Objekten, die größer und kleiner als eine einzige Schnecke Objekt, wie dem Kupferring und Schutt auf den Platten aus. Stellen Sie zwei Größenparameter dazu, die Größen für den individuellen Würmer decken in einer Vielzahl von Körperhaltungen mit der Maßnahme zu tun> Wählen Messungen Menüpunkt im Dialogfeld Count / Größe angezeigt werden. (Bereich Bereich: 28,000-120,000 um 2 und Perimeter Bereich: 600-2,500 um).
      3. Wenn ein Mutantenstamm ist wesentlich kleiner oder größer als andere Tiere auf dem Teller zu analysieren, erweitern den Bereich der Filtereinstellungen für die Objekterkennung, um die verschiedenen Größen der Stämme, bevor die Verfolgung von Tieren unterzubringen, so dass Einstellungen nicht geändert werden müssen Mitte der Analyse.
    6. Füllen Sie das Tracking-Prozess, indem Sie auf Weiter im Dialogfeld Verfolgung. Visuell vergleichen die Ausgangsspuren mit dem Fortschritt der einzelnen Wurm in dem Film, um zu gewährleisten, dass jeder Wurm vertreten ist, es sei denn es gibt einen triftigen Grund, basierend auf den automatischen Filtereinstellungen, um sie auszuschließen. Spuren, die durch die Anwesenheit von nicht-bestätigten Schnecken Objekte, die die Größe Filterkriterien erfüllt hergestellt wurden manuell zu löschen.
    7. Verwenden Sie die Software, um die Geschwindigkeit eines jeden Wurm zwischen den einzelnen Bildern berechnen (zurückgelegte Strecke für den Schwerpunkt eines Objekts pro 1 Sekunde zwischen den Rahmen) und zeigt die Durchschnittsgeschwindigkeit für jede Spur und die Durchschnittsgeschwindigkeit über alle Spuren für die Bevölkerung von Würmern in der Kupferring. Betrachten Sie diese endgültige Durchschnitt n = 1 in Bezug auf die experimentellen Studien sein. Exportieren Sie die Daten in ein Tabellenkalkulationsprogramm für statistische Auswertungen und Datenarchivierung.
    8. Nachdem die Daten für das erste Ring auf der Platte aufgezeichnet wurden, bewegen Sie den ROI auf die nächste Ring undwiederholen Sie den Tracking-Prozess, ohne Änderung der Parameter.
    9. Berechnen Sie die relative Geschwindigkeit der Fortbewegung durch:
    10. Relativgeschwindigkeit (%) = behandelt (400 mM) Geschwindigkeit / unbehandelt (0 mM) Geschwindigkeit x 100.
      HINWEIS: Verschiedene genetische Manipulationen verändern oft die basale Fortbewegungsgeschwindigkeit der Tiere. Um die Wirkung von Ethanol auf die Fortbewegungsgeschwindigkeit von Tieren zu bestimmen und in der Lage, diese Effekte in verschiedenen Genotypen oder Bedingungen zu vergleichen, die Berechnung einer Relativgeschwindigkeit.

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Ergebnisse

Repräsentative Daten (Figur 1) aus mehreren verschiedenen Genotypen und ihrer gepaarten Bedienelemente vorgestellt 8,24; Daten wurden speziell ausgewählt, dass Highlight Unterschiede in den untersuch Tiere. Der Grad der Wirkung bei 10 Minuten der Exposition wird als die anfängliche Empfindlichkeit einer Dehnung, die auf der linken Achse in 1B-G dargestellt ist. Mutanten-Stämme mit einer Relativgeschwindigkeit größer als die Kontrolle bei 10 min werden als Ethanol beständig

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Diskussion

Die einfache Neurobiologie und genetische Werkzeuge zur Verfügung, in C. elegans machen die Schnecke ein ausgezeichnetes Modell, in dem die molekularen Grundlagen der Auswirkungen von Ethanol auf Eigenschaften zu untersuchen. Hier beschreiben wir einen Assay, der verwendet wurde, um mehrere molekulare und Umweltmediatoren der akuten Verhaltensreaktion zu Ethanol 8,10,20,24,25 identifizieren. Diese Methode erlaubt die Differenzierung und der gleichzeitigen Prüfung von zwei verschiedenen Ethanol Anspre...

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Offenlegungen

Die Autoren haben nichts zu offenbaren.

Danksagungen

R01AA016837 (JCB) und P20AA017828 (AGD und JCB): Diese Studien wurden durch Zuschüsse aus den National Institutes of Health, Nationales Institut für Alkoholmissbrauch unterstützt.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
C. elegans-StämmeCaenorhabditis Genetics Center
60 x 15 mm Petrischalen, dreifach gelüftetGreiner Bio-One628161Andere Plattenmarken sind ausreichend.
NGM-AgarVerschiedeneNaCl (3 g/l), Agar (17 g/l), Pepton (2,5 g/l), 1 ml Cholesterin (5 mg/ml in Ethanol), 1 ml (1 M) MgSO4, 1 ml (1 M) CaCl2, 25 ml (1 M) KPO4, pH=6, 975 ml H2O
PinzetteVerschiedeneZ. B. Fisher Scientific #10300
37 °C InkubatorVerschiedeneZum Trocknen von Agar
DigitalwaageVerschiedeneZum Bestimmen von Plattengewichten und Agarvolumen
KupferringePlumbmasterSTK#35583 (48 Kappenfadendichtung)1,6 cm Innendurchmesser, 1,8 cm Außendurchmesser Kupferringe
100% EthanolVerschiedene
Parafilm MBemisPM996
CCD-KameraQImagingRET-4000R-F-M-12Diese Kamera hat ein großes Sichtfeld.
Stereomikroskop mit C-Mount und 0,5x-ObjektivLeicaMZ6Eingestelltes Modell, M60 ist das aktuelle Äquivalent.
LichtquelleSchottA089233"x3" Hintergrundbeleuchtung für gleichmäßige Ausleuchtung des Sichtfelds
Bildgebungs- und Tracking-SoftwareMedia CyberneticsImagePro-Plus v6.0-6.3Neuere Versionen der Software verfügen über Tracking-Funktionen.

Referenzen

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Fortbewegung von C elegansEthanol ExpositionsassayKupferring CorralVideobasierte Geschwindigkeitsmessunginitiale Sensitivit takute Funktionstoleranzgenetisch umweltbedingte ManipulationObjekterkennungssoftwareNGM PlattenherstellungWurmtransferprotokoll
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