Rose Bengal Photothrombosis von konfokalen optischen Imaging<em&gt; In Vivo</em&gt;: Ein Modell des Einzelfahrzeug Stroke

Zusammenfassung

Hier beschreiben wir einen semi-invasiven optischen Mikroskopie-Ansatz zur Induktion eines photothrombotischen Gerinnsels in der somatosensorischen Hirnrinde einer Maus in vivo. Es werden die technischen Aspekte des bildgebenden Verfahrens von der Induktion eines photothrombotischen Ereignisses über die Anwendung bis hin zur Datenerhebung beschrieben.

Zusammenfassung

In vivo Bildgebungsverfahren haben aufgrund der jüngsten Fortschritte bei bildgebenden Farbstoffen und optischen Technologien zugenommen, die die Möglichkeit ermöglichen, zelluläre Ereignisse in einem intakten Tier abzubilden. Darüber hinaus erhöht die Fähigkeit, physiologische Krankheitszustände wie Schlaganfall in vivo zu induzieren, deren Nutzen. Die hierin beschriebene Technik ermöglicht eine physiologische Beurteilung der zellulären Reaktionen innerhalb des ZNS nach einem Schlaganfall und kann für andere pathologische Zustände, die untersucht werden, angepasst werden. Die vorgestellte Technik verwendet die Laseranregung des lichtempfindlichen Farbstoffs Rose Bengal in vivo, um ein fokales ischämisches Ereignis in einem einzelnen Blutgefäß zu induzieren.

Das Videoprotokoll zeigt die Vorbereitung eines dünnschädeligen Schädelfensters über dem somatosensorischen Kortex bei einer Maus für die Induktion eines photothrombotischen Ereignisses in Rose Bengal, wodurch die Schädigung der zugrunde liegenden Dura-Materie und des Gehirns auf ein Minimum reduziert wird. Die chirurgische Vorbereitung wird zunächst unter einem Präpariermikroskop mit einer speziell angefertigten chirurgischen/bildgebenden Plattform durchgeführt, die dann auf ein konfokales Mikroskop übertragen wird, das mit einem inversen Objektivadapter ausgestattet ist. Repräsentative Bilder, die mit diesem Protokoll aufgenommen wurden, werden ebenso präsentiert wie Zeitraffersequenzen der Schlaganfallinduktion. Diese Technik ist insofern leistungsfähig, als derselbe Bereich an den folgenden Tagen wiederholt abgebildet werden kann, was longitudinale In-vivo-Studien zu pathologischen Prozessen nach einem Schlaganfall erleichtert.

Einleitung

Die beschriebene Technik ermöglicht die Visualisierung der in vivo zellulären Reaktionen unmittelbar nach der Induktion von Rose Bengal photothrombosis in einer intakten Maus. Rose Bengal (4,5,6,7-Tetrachlor-2 ', 4', 5 ', 7'-tetraiodofluorescein) ist eine lichtempfindliche Farbstoff verwendet werden, um einen ischämischen Schlaganfall bei Tiermodellen (Maus und Ratte) induzieren. Nach einer Bolus-Injektion von RB durch die Schwanzvene und anschließender Bestrahlung durch einen ausgedünnten Schädel mit einem 564 nm-Laserlicht wird ein Thrombus induzierte verursacht eine physiologische Takt ^1. Das Verfahren wurde ursprünglich von Ros....

Protokoll

Hinweis: Alle tierischen Verfahren wurden von der Institutional Animal Care und Verwenden Committee der University of Texas Health Science Center in San Antonio genehmigt und wurden im Einklang mit den Leitlinien ANKOMMEN.

1. Anästhesie für Cortical Vorbereitung

1. Platzieren Sie die Maus in eine Induktionskammer mit 2-3% Isofluran mit Sauerstoff gemischt, um Anästhesie zu induzieren. Beachten Sie die Atemfrequenz ab, wenn die Maus induziert. Klemmen Sie die Pfote der Maus, um festzustellen, ob die Maus ist bereit, an den Nasenkegel bewegen. Hinweis: Anesthesia Ebene ist ein entscheidender Schritt in einer in vivo-Erstellung

Ergebnisse

Das Ziel dieses Verfahrens war es, ein Schlaganfall in Tiermodellen (Maus und Ratte) nach einer Bolus-Injektion von RB durch die Schwanzvene und anschließende Beleuchtung einer dünnt Schädel mit einem 561 nm Laserlicht zu induzieren. Die Bilder in Figur 4 zeigen den Verlauf der Gerinnselbildung in einem einzigen Gefäß nach Bestrahlung des Bereichs auf 0, 1, 1,5 und 2 min. Vor der Gerinnselbildung der gesamte Behälter ist weiß aufgrund fließt Rose Bengal zu befreien. Nach der Induktion der Bestrahlung de.......

Diskussion

Die Fähigkeit, experimentellem Schlaganfall Pathophysiologie vom Tier zum Menschen Anwendung übersetzen mit Ausfall geplagt. Jedoch ist die Verwendung von Tiermodellen, wie dem photothrombosis Modell ermöglicht ein besseres Verständnis der Pathophysiologie und der Hub der Erforschung neuer Therapieansätze für die Neuroprotektion bereitzustellen nach einem Schlaganfall. Kleine Schlaganfällen und kortikaler Mikroinfarkten durch die photothrombotic Modell produziert werden, sind klinisch relevant subklinischer oder "s.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Reagenzien
Rose Bengal		Sigma 330000
Isofluran Anästhetikum	MWI Veterinary Supply	088-076
Vetbond	1469SB	1469SB
aCSF	126 mM NaCl, 2,5 mM KCl, 1,25 mM NaH2PO4, 2 mM MgCl2, 2 mM CaCl2, 10 mM Glukose und 26 mM NaHCO3 (pH 7,4).
[header]
Ausrüstung
Präparierschere	Bioindustrial Products	500-410
Operationsschere 14 cm	Bioindustrial Products	12-055
Pinzette Dumont High Tech #5 Style, gerade	Bioindustrial Products	TWZ-301.22
LabJack 132X80	Optosigma Co	123-6670
Plattform für Labjack 8X 8	Optosigma Co	145-1110
Ohrstangenhalter aus stereotaktischem Setup	Stoelting/Cyborg	51654
Dispomed Labvent Nagetier-Anästhesiegerät	DRE, Inc.	15001
Tech IV Isofluran-Verdampfer	DRE, Inc.	34001
F Luftbehälter	DRE, Inc	80120
Beatmungsschlauch für den Wasserkreislauf	DRE, Inc	86111B
Nagetieradapter für Wannenschlauch	DRE, Inc	891000
O2 Regler für Sauerstofftanks	DRE, Inc	CE001E
Induktionskammer für Nagetiere	DRE, Inc	15004C
Ethicon Silk 6-0; 18 Zoll mit P-3 Nadel	Naht Express	1639G
Objektiv Wechselrichter Optischer Adapter	LSM Technologien
Vorlaufbohrer Dual voltage 110/120	Foredom	134.53
Meisinger 3.9 mm Bohrer	Meisinger		(Ref#310 104 001 001 009)