Methodenartikel

Schnelle In-situ- Hybridisierung unter Verwendung von Oligonukleotidsonden auf Paraformaldehyd-Präfix Gehirn von Ratten mit Serotonin-Syndrom

DOI:

10.3791/53165

⸱

23. September 2015

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1Ross University School of Veterinary Medicine, 2Charles E. Schmidt College of Medicine, Florida Atlantic University

In diesem Artikel

Zusammenfassung

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Dieses Protokoll beschreibt eine schnelle und vereinfachte in situ Hybridisierungsmethode, die ideal für das Gehirn mit Paraformaldehyd-Präfix ist, wodurch der Bedarf an langwierigen komplexen Schritten bei der Verwendung von frischem gefrorenem Gewebe reduziert wird. Die Methode wird anhand der Identifizierung des Serotonin-5-HT2A-Rezeptor-Gens htr2a bei Ratten validiert.

Zusammenfassung

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Die Toxizität von

3,4-Methylendioxymethamphetamin (MDMA; Ecstasy) kann aufgrund eines akuten Serotonin (5-Hydroxytryptamin; 5-HT)-Syndroms regionsspezifische Veränderungen in der serotonergen mRNA-Expression verursachen. Diese Hypothese kann mit Hilfe von in situ Hybridisierung zum Nachweis des Serotonin-5-HT 2A-Rezeptor-Gens htr2a getestet werden. In der Vergangenheit waren solche Verfahren mit radioaktiver Ribosonde aufgrund des komplizierten Arbeitsablaufs, der mehrere Tage in Anspruch nimmt, und der zusätzlichen Schwierigkeit, dass die Technik die Verwendung von frischem gefrorenem Gewebe erforderte, das in einer RNase-freien Umgebung aufbewahrt wurde, schwierig. In jüngster Zeit hat die Entwicklung kurzer Oligonukleotidsonden die In-situ-Hybridisierungsverfahren vereinfacht und die Verwendung von Hirnschnitten mit Paraformaldehyd-Präfix ermöglicht, die in Laboratorien häufiger verfügbar sind. Hier beschreiben wir ein detailliertes Protokoll mit nicht-radioaktiven Oligonukleotidsonden auf dem vorfixierten Hirngewebe. Zu den für diese Studie verwendeten Hybridisierungssonden gehören dapB (ein bakterielles Gen, das für Dihydrodipicolinat-Reduktase kodiert), ppiB (ein Housekeeping-Gen, das für Peptidylprolyl-Isomerase B kodiert) und htr2a (ein Serotonin-Gen, das für 5-HT2A-Rezeptoren kodiert). Diese Methode ist relativ einfach, kostengünstig, reproduzierbar und benötigt weniger als zwei Tage, um abgeschlossen zu werden.

Einleitung

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Das Serotonin-Syndrom (5-Hydroxytryptamin; 5-HT) ist eine akute neurologische Störung, die durch 5-HT-fördernde Medikamente wie Antidepressiva verursachtwird 1 und auch in Situationen des MDMA-Konsums zu Freizeitzwecken auftritt2. Die molekularen Mechanismen, die für Stimmungsschwankungen, Lern- und Gedächtnisdefizite verantwortlich sind, die im Zusammenhang mit dem akuten Syndrom auftreten, sind nicht gut verstanden3,4. Die In-situ-Hybridisierung ist ein leistungsfähiges Forschungsinstrument, das den Nachweis und die Quantifizierung spezifischer mRNAs ermöglicht, die möglicherweise auf Einzelzellebene exprimiert werden. Die herkömmliche Methode zur Durchführung einer In-situ-Hybridisierung besteht darin, eine radioaktiv markierte Ribosonde zu verwenden, die das interessierende Gen spezifisch hybridisiert. Ein großer Nachteil ist jedoch, dass die Methode komplizierte und zeitaufwändige Sondenvorbereitungs- und Hybridisierungsschritte sowie den Zugang zu frischen gefrorenen Geweben erfordert, die in einer RNase-freien Umgebung aufbewahrt werden5,6.

Oligonukleotidsonden wurden kürzlich entwickelt, um kürzere RNA-Fragmente zu hybridisieren, als sie für Ribosonden benötigt werden7. Darüber hinaus erzeugen die Sonden ein geringes Hintergrundsignal, ohne die Spezifitätzu beeinträchtigen 8. Diese neu entwickelte Sondentechnologie kann in situ Hybridisierung auf paraformaldehyd-präfixiertes Hirngewebe angewendet werden, das in immunzytochemischen Laboratorien üblich ist.

Hier beschreiben wir ein Protokoll für die in situ Hybridisierung mit Oligonukleotidsonden an Rattengehirn mit Paraformaldehyd-Präfix und vergleichen die Ergebnisse mit denen, die in einem frisch gefrorenen Gehirn beobachtet wurden5,6. Dieses Protokoll wird verwendet, um die Hypothese zu testen, dass MDMA-Substanzmissbrauch Veränderungen in der htr2a-mRNA des 5-HT2A-Rezeptorgens im Gehirn verursacht. Wir begannen das Verfahren mit einer MDMA-Behandlung, gefolgt von einer Paraformaldehyd-Gewebeperfusion des Tieres, einer In-situ-Hybridisierung der thr2a-Sonde und einer Datenanalyse. Beachten Sie, dass dapB (das bakterielle Gen, das für Dihydrodipicolinat-Reduktase kodiert) als Negativkontrolle und ppiB (Housekeeping-Gen, das für Peptidylprolyl-Isomerase B kodiert) als Positivkontrolle verwendet wird.

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Protokoll

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Unten beschriebenen Tiernutzung Verfahren wurden von der Institutional Animal Care und Verwenden Committee (IACUC) bei Ross University School of Veterinary Medicine und Florida Atlantic University zugelassen. Obwohl sterile Techniken und Handschuhe erforderlich sind, ist die RNase-freie Umgebung nicht notwendig, während Sie dieses Protokoll.

1. Vorbereitung

  1. Gewebepräparation und Schneiden
    1. Vergeben Ratten zufällig in drei Gruppen: frisch / Salzlösung (SAL; 0,9% NaCl), vorangestellt ist / SAL und voran / 3,4-methylenedioxymethamphetamine (MDMA, siehe Angaben in Tabelle 1).
    2. Verwalten drei Dosen von 1 ml / kg SAL und 10 mg / kg intraperitoneal MDMA, die jeweils mit den SAL und MDMA Gruppen 2 Stunden-Intervall. Lassen Sie Tiere, die Behandlung für 6 Tage zu überleben.
    3. Am 7. Tag verabreichen 100 mg / kg Ketamin in Kombination von 5 mg / kg Xylazin intraperitoneal den Ratten nach einem tiefe Narkose (dh Verlust an Hornhaut blinken und tail kneifen Reflexe).
    4. Für die Frisch / SAL-Gruppe, schnell zu enthaupten Ratten und entfernen Sie das Gehirn für die frischen Gehirn-Test (siehe Details in der Referenz 5).
    5. Für die voran / SAL und voran / MDMA Gruppen, machen einen Schnitt entlang des Brustbeins etwa 10 bis 12 cm und dann setzen die Ende des Brustbeins.
    6. Halten Sie das Ende des Brustbeins mit einer Gefäßklemme und schneiden Sie die Membran seitlich auf beiden Seiten mit einer scharfen Schere und dann nach oben geschnitten auf den Rippen und parallel zu den Lungen.
    7. Mit einer Hand halten Sie die ventralen Spitze der Herzen mit kleinen Zange. Mit der anderen Hand, durchbohren die linke Herzkammer mit einer 18 G Injektionsnadel (beachten Sie den Adapter Seite der Nadel ist mit einem Y-förmigen Silizium-Schlauch an eiskalten SAL und Para Behälter und Schlauchpumpen verbunden, siehe die Referenz 9).
    8. Schalten Sie den SAL Pumpe an der mittleren Ebene der Flussrate (~ 5 ml / min) und Punktion der rechten Vorhof mit der Zange, um das Entweichen der Rückkehr circ ermöglichenlation. Aufrechtzuerhalten SAL Perfusion für 30 min.
    9. Schalten Sie den Parapumpe auf mittlerem Niveau und lassen Sie das eiskalte 4% Paraformaldehyd, das Tier für 30 Minuten durchströmen.
    10. Entfernen Perfusion Instrument und enthaupten das Tier. Einen posteroanterior durch die Mittellinie des Schädels geschnitten und dann flattern den Schädel, um die Schädelhöhle 10 freizulegen.
    11. Entfernen des Gehirns mit einem Spatel aus der Schädelhöhle und legen das Gehirn in ein 50 ml Zentrifugenröhrchen, das 25 ml von 4% igem Paraformaldehyd. Halten das Gehirn innerhalb des Parahaltigen Röhrchen bei 4 ºC Kühlschrank für 24 Stunden.
    12. Bewegen das Gehirn in ein 50 ml Zentrifugenröhrchen, das 25 ml 30% Saccharose-Lösung bei 4 ° C für 3 Tage. Schließlich speichert das Gehirn in Plastiktüten bei -80 ° C bis Gebrauch.
    13. Montieren Sie das Gehirn auf einem Spannfutter mit Einbettungsmittel und frieren die Einbettungsmittel Gehirn enthält, in einem Kryostaten bei einer Temperatur von -26 ºC. Schneiden Sie den frisch eingefrorenn Gehirn in 20 um Abschnitte und Para-Präfix Gehirn in 10 & mgr; m-Abschnitte. Übertragen Sie den Abschnitt zu einem RT Mikroskop-Objektträger, indem Sie den Schieber auf den Abschnitt.
    14. Luft trocknen bei Raumtemperatur für 4 Stunden. Bewahren Sie die Sektion Folien in einer dicht verschlossenen Beutel bei -80 ° C bis Gebrauch.
  2. Entwässerung
    1. Nehmen Objektträger aus dem -80 ° C Gefrierschrank und weisen Abschnitte in eine von drei Tests: HT2A, PPIB (positive Kontrolle) oder dapB (Negativkontrolle); Zeichen und Etikettenabschnitte mit einem Kugelschreiber (nicht mit einem Bleistift). Tauchen Sie Folien in 100% Alkohol bei Raumtemperatur für 5 min. Trocknen Sie die Objektträger für 5 min in einer Abzugshaube.
  3. Vorbehandlung
    1. Je 20 ul der Vorbehandlung-1-Reagens (Inaktivierung von alkalischer Phosphatase) zu den Abschnitten auf Objektträger. Objektträger auf einem Rack-Schiene in einer feuchtigkeitsFach (beachten Sie, dass die Schale mit einem Deckel abgedeckt, um eine hohe Luftfeuchtigkeit zu verhindern, daß Verdampfung aus dem Reaktions solutio pflegenn).
    2. Schütteln des Feuchtigkeits Tablett auf einem Horizontalschüttler bei niedriger Geschwindigkeit für 10 min. Zweimal für 2 min Waschen Sie die Objektträger mit doppelt destilliertem Wasser (ddH 2 O). Tauchen die Folie in einem 200 ml Becherglas, das 150 ml der Vorbehandlungs-2-Reagenz (Brechen der Querverbindungen von Paraformaldehyd Fixierung induziert). Man kocht die Folien für eine Gesamtzahl von 5 min bei 100 ºC (wärmeinduzierte Wiederherstellung der RNA-Struktur 11).
    3. Zweimal für 2 min Waschen Sie die Objektträger mit ddH 2 O. Objektträger in 100% Alkohol für 5 min. Trocknen Sie die Objektträger für 5 Minuten im Abzug. Verwenden Sie einen hydrophoben Stift, um einen Kreis um den ausgewählten Bereich im Gewebeschnitt zu ziehen (zB nicht-kortikalen Strukturen, einschließlich Thalamus und Hypothalamus, wie in 2 beschrieben).
    4. Je 10 ul der Vorbehandlung-3-Reagenz (Anstieg der Sondenpenetration) zu jedem ausgewählten Bereich, und decken den Feuchtefach mit dem Deckel. Legen Sie das Fach in der Hybridisierungsofenmit dem Horizontalschüttler ausgestattet und stellen Sie die Ofentemperatur bei 40 ºC; schütteln Sie das Fach für 30 min. Zweimal für 2 min Waschen Sie die Objektträger mit ddH 2 O.

2. Die Hybridisierung und Amplifikation

  1. Pipette 10 ul HTR2A, PPIB und dapB Sonde Reagenzien jeweils auf den ausgewählten Bereichen. Decken den Feuchtigkeitsschale mit dem Deckel um eine Verdampfung des Reagens zu verhindern. Schütteln Sie auf dem Horizontalschüttler bei niedriger Geschwindigkeit eingestellt. Die Folien bei 40 ºC inkubieren in den Ofen für 2 Stunden.
  2. Zweimal mit einem Waschpuffer für 2 min Waschen der Objektträger. Je 10 ul der Amplification-1 Reagenz auf jedem ausgewählten Bereich, schütteln und Inkubation der Objektträger bei 40 ° C für 30 min.
  3. Zweimal mit einem Waschpuffer für 2 min Waschen der Objektträger. Je 10 ul der Amplification-2-Reagenz auf jedem ausgewählten Bereich, schütteln und Inkubation der Objektträger bei 40 ° C für 15 min.
  4. Zweimal w Waschen Sie die Objektträgerit einem Waschpuffer für 2 min. Je 10 ul der Amplification-3 Reagenz auf jedem ausgewählten Bereich, schütteln und Inkubation der Objektträger bei 40 ° C für 30 min.
  5. Zweimal mit einem Waschpuffer für 2 min Waschen der Objektträger. Je 10 ul der Amplification-4-Reagenz auf jedem ausgewählten Bereich, schütteln und Inkubation der Objektträger bei 40 ° C für 15 min.
  6. Zweimal mit einem Waschpuffer für 2 min Waschen der Objektträger. Je 10 ul der Amplification-5-Reagenz auf jedem ausgewählten Bereich, schütteln und Inkubation der Objektträger bei Raumtemperatur 30 min.
  7. Zweimal mit einem Waschpuffer für 2 min Waschen der Objektträger. Je 10 ul der Amplification-6-Reagenz auf jedem ausgewählten Bereich, schütteln und Inkubation der Objektträger bei Raumtemperatur für 15 min. Zweimal mit einem Waschpuffer für 2 min Waschen der Objektträger.

3. Signalerkennung

  1. Je 10 ul der Red-Reagenz zu jedem ausgewählten Bereich (Beachten Sie, dass das Reagenz ist eine Mischung aus Rot-B und Red-A bei einem 1:60 Verhältnis und sollte ich nutzennmittelbar). Legen Sie die Folie in der Feuchtigkeit Tablett auf dem Horizontalschüttler bei RT und leicht schütteln bei niedriger Geschwindigkeit für 10 min.
  2. Zweimal für 10 min Waschen Sie die Objektträger mit (ddH 2 O). Trocknen Sie die Objektträger bei 60 ° C in den Ofen für 15 Minuten. Objektträger in Xylol unter dem Abzug für 5 min. Je 20 & mgr; l Xylol-basierten Montagemedium auf jeder ausgewählten Bereichs und mit einem Deckglas.

4. Bildaufnahme

  1. Nehmen digitale Mikrofotografien von den ausgewählten Bereichen (z, Hypothalamus, Figuren 1 und 3) mit einer Vergrößerung von 4 × 20 × und Objektivlinsen. Speichern Sie die Bilddatei.

5. Teilchenbildanalyse

  1. Ziehen Sie die Bilddatei in den Haupt ImageJ Fenster. Gehen Sie auf die Menüleiste und wählen Sie 'Bild', neben auswählen 'Type' aus dem Dropdown-Menü, und wählen Sie "8-Bit".
  2. Wählen Sie "Anpassen", und wählen Sie "Threshold ', um das Dialogfeld zu öffnen. Stellen Sie die untere Stange Wert im Dialogfeld, so dass die unerwünschte Hintergrund wird entfernt. Gehen Sie in der Menüleiste und wählen Sie "Analysieren", wählen Sie dann "Analyze Particles", um ein zweites Dialogfeld zu öffnen.
  3. Stellen Partikelgröße bei 10, nächste Option "umreißt anzeigen" und wählen Sie "Ergebnis anzeigen" und "Zusammenfassen" Boxen. Schließlich klicken Sie auf "OK", um die Partikeldaten in den Dialogfeldern anzuzeigen.

6. Tabellenkalkulation

  1. Geben Sie die Daten in die Excel-Tabelle und der Mittelwert der Anzahl der Partikel in der SAL-Gruppe als Grundlinie. Berechnen Sie die prozentuale Höhe der einzelnen Abschnitte und machen einen Graphen entsprechend (Abbildung 4).

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Ergebnisse

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Unter Verwendung der Oligonukleotid-RNA-Sonden (<25 nt), kann die Hybridisierung als rote Punkte im Hypothalamus Zellen von den Para-Präfix und frisch gefrorenes Hirn hergestellt nachgewiesen werden. Die HTR2A mRNA-Moleküle sind in einigen Zellen (durch durchgezogene Pfeile) vorhanden, aber andere nicht (offene Pfeile). Wir beobachteten, dass es keinen Unterschied zwischen der Paraformaldehyd-Präfix und die frisch gefrorenes Gewebe (Abbildung 1). Eine erfolgreiche Hybridisierung kann zuerst ...

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Diskussion

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Eines der Hauptanliegen des In-situ-Hybridisierungstests ist die Auswahl geeigneter Techniken für die RNA-Konservierung aufgrund von RNase-Enzymen. Es ist allgemein bekannt, dass diese Enzyme in den Zellen und in der Umwelt weit verbreitet sind und die Ergebnisse beeinflussen können. Die Enzymaktivität kann jedoch schnell unterschieden werden, indem das Gewebe in die Trockeneis-Alkohol-Lösunggelegt wird 5,12. Obwohl eine schnelle Konservierung für die Hybridisierung mit einer Ribosonde13 en...

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Offenlegungen

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Die Autoren erklären, dass sie keine konkurrierenden finanziellen Interessen.

Danksagungen

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Diese Studie wurde von den NIH (R15DA029863) unterstützt, der Florida Atlantic University Undergraduate-Forschungsstipendium (M30014) und die Ross University School of Veterinary Medicine Forschungsstipendium. Wir möchten das National Institute on Drug Abuse (Rockville, MD) für die Bereitstellung von (±) 3,4-methylenedioxymethamphetamine (± MDMA) für diese Arbeit danken.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
RNAscope Negativkontrollsonde-DapBErweiterte Zelldiagnostik, INC310098
RNAscope Pretreat 4Erweiterte Zelldiagnostik, INC320046
RNAscope 2.0 HD Reagenzienkit - RedAdvanced Zelldiagnostik, INC310036
RNAscope Sonde - Rn-PpibErweiterte Zelldiagnostik, INC313921
Ratte Htr2aErweiterte Zelldiagnostik, INC300031
KryostatLeicaCM 1850
Horizontaler SchüttlerVWR88032-088
HybridisierungsofenThermo Fisher Scientific222000
Superfrost Plus ObjektträgerFisher Scientific12-550-15
HydrophoberStift VektorH-4000
MikroskopOlympusProvis AX70

Referenzen

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  1. Muzyk, A. J., Jakel, R. J., Preud'homme, X. Serotonin syndrome after a massive overdose of controlled-release paroxetine. Psychosomatics. 51, 437-442 (2010).
  2. Davies, O., Batajoo-Shrestha, B., Sosa-Popoteur, J., Olibrice, M. Full recovery after severe serotonin syndrome, severe rhabdomyolysis, multi-organ failure and disseminated intravascular coagulopathy from MDMA. Heart Lung. 43, 117-119 (2014).
  3. Bosch, O. G., et al. Verbal memory deficits are correlated with prefrontal hypometabolism in 18FDG PET of recreational MDMA users. PLoS On. 8, e61234(2013).
  4. Smithies, V., Broadbear, J., Verdejo-Garcia, A., Conduit, R. Dysfunctional overnight memory consolidation in ecstasy users. J Psychopharmaco. 28, 751-762 (2014).
  5. Winzer-Serhan, U. H., Broide, R. S., Chen, Y., Leslie, F. M. Highly sensitive radioactive in situ hybridization using full length hydrolyzed riboprobes to detect α2 adrenoceptor subtype mRNAs in adult and developing rat brain. Brain Res Brain Res Proto. 3, 229-241 (1999).
  6. Zoeller, R. T., Fletcher, D. L., Butnariu, O., Lowry, C. A., Moore, F. L. N-ethylmaleimide (NEM) can significantly improve in situ hybridization results using 35S-labeled oligodeoxynucleotide or complementary RNA probes. J Histochem Cytoche. 45, 1035-1041 (1997).
  7. Wang, F., et al. RNAscope: a novel in situ RNA analysis platform for formalin-fixed, paraffin-embedded tissues. J Mol Diag. 14, 22-29 (2012).
  8. Wang, H., et al. RNAscope for in situ detection of transcriptionally active human papillomavirus in head and neck squamous cell carcinoma. J Vis E. , (2014).
  9. Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. Whole animal perfusion fixation for rodents. J Vis E. , (2012).
  10. Mishra, A., et al. Imaging pericytes and capillary diameter in brain slices and isolated retinae. Nat Proto. 9, 323-336 (2014).
  11. Shi, S. R., Cote, R. J., Taylor, C. R. Antigen retrieval techniques: current perspectives. J Histochem Cytoche. 49, 931-937 (2001).
  12. Qin, Y., Heine, V. M., Karst, H., Lucassen, P. J., Joels, M. Gene expression patterns in rat dentate granule cells: comparison between fresh and fixed tissue. J Neurosci Method. 131, 205-211 (2003).
  13. Carter, B. S., Fletcher, J. S., Thompson, R. C. Analysis of messenger RNA expression by in situ hybridization using RNA probes synthesized via in vitro transcription. Method. 52, 322-331 (2010).
  14. Mijnster, M. J., et al. Regional and cellular distribution of serotonin 5-hydroxytryptamine2a receptor mRNA in the nucleus accumbens, olfactory tubercle, and caudate putamen of the rat. J Comp Neuro. 389, 1-11 (1997).
  15. Li, Q., et al. Brain region-specific alterations of 5-HT2A and 5-HT2C receptors in serotonin transporter knockout mice. J Neuroche. 84, 1256-1265 (2003).
  16. Horner, K. A., Gilbert, Y. E., Noble, E. S. Differential regulation of 5-HT2A receptor mRNA expression following withdrawal from a chronic escalating dose regimen of D-amphetamine. Brain Re. 1390, 10-20 (2011).
  17. Mocci, G., Jimenez-Sanchez, L., Adell, A., Cortes, R., Artigas, F. Expression of 5-HT2A receptors in prefrontal cortex pyramidal neurons projecting to nucleus accumbens. Potential relevance for atypical antipsychotic action. Neuropharmacolog. 79, 49-58 (2014).
  18. Reneman, L., et al. The acute and chronic effects of MDMA ('Ecstasy') on cortical 5-HT2A receptors in rat and human. 26, 387-396 (2002).

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Nachdrucke und Genehmigungen

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Schlagwörter

Paraformaldehyd fixiertes GehirnHTR2A GenexpressionVorbehandlungsreagenzienAmplifikationsschritteFast Red NachweisImageJ AnalyseRNA Quantifizierung

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