Cortex, Hippocampus-, Thalamus-, Hypothalamus, Lateral Septal Nucleus- und Striatum spezifische<em&gt; In Utero</em&gt; Electroporation in der C57BL / 6-Maus,

Jan Baumgart; Nadine Baumgart

doi:10.3791/53303

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Methodenartikel

Cortex, Hippocampus-, Thalamus-, Hypothalamus, Lateral Septal Nucleus- und Striatum spezifische

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DOI:

10.3791/53303

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18. Januar 2016

Jan Baumgart¹ , Nadine Baumgart¹

¹TARC (Translational Animal Research Center), University Medical Center, JGU Mainz

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Dieses Protokoll beschreibt im Detail, wie verschiedene Regionen im Zentralnervensystem C57BL/6 mittels in utero-Elektroporation spezifisch transfiziert werden. In diesem Protokoll sind detaillierte Anweisungen für Transfektionen von Regionen enthalten, die sich zum Kortex, Hippocampus, Thalamus, Hypothalamus, Nucleus lateralis septum lateralis und Striatum entwickeln.

Zusammenfassung

Die In-utero-Elektroporation ist eine weit verbreitete Technik zur schnellen und effizienten raumzeitlichen Manipulation verschiedener Gene im zentralen Nervensystem von Nagetieren. Eine Überexpression erwünschter Gene ist ebenso möglich wie shRNA-vermittelte Loss-of-Function-Studien. Daher bietet es ein breites Anwendungsspektrum. Die Möglichkeit, bestimmte Zellen in einem bestimmten Bereich gezielt anzusprechen, erweitert das Spektrum der Anwendungsmöglichkeiten dieser sehr nützlichen Methode weiter. Für eine effiziente Ausrichtung auf bestimmte Regionen ist die Kenntnis der Feinheiten wie des embryonalen Stadiums, der anzulegenden Spannung und vor allem der Position der Elektroden unerlässlich.

Hier stellen wir ein detailliertes Protokoll zur Verfügung, das eine spezifische und effiziente In-utero-Elektroporation mehrerer Regionen des zentralen Nervensystems der C57BL/6-Maus ermöglicht. Insbesondere wird gezeigt, wie Regionen, die sich in den retrosplenialen Kortex, den motorischen Kortex, den somatosensorischen Kortex, den piriformen Kortex, den cornu ammonis 1-3, den Gyrus dentatus, das Striatum, den Nucleus septus lateralis, den Thalamus und den Hypothalamus entwickeln, transfiziert werden können. Für diese Information über das geeignete Embryonalstadium wird die entsprechende Spannung für das entsprechende Embryonalstadium bereitgestellt. Vor allem aber wird eine Winkelkarte abgebildet, die die entsprechende Position des Pluspols anzeigt. Dieses standardisierte Protokoll trägt zu einer effizienten In-utero-Elektroporation bei, die auch zu einer geringeren Anzahl von Tieren führen kann.

Einleitung

Seit der ersten Beschreibung im Jahr 2001 von drei unabhängigen Gruppen ^1-3 i n utero Elektroporation hat sich zu einem weit verbreiteten Standard-Tool zur Analyse der Genexpression in der Nagetier zentralen Nervensystems. Im Vergleich zu der Erzeugung von Knockout-Mäusen, die, trotz kontinuierlich Verbesserung der Techniken, noch Zeit und Geld raub, die in utero Elektroporation gefällt durch ihre Einfachheit. Also, in utero Elektroporation ermöglicht eine schnelle und effiziente Verstärkungs- und loss-of-function-Studien ^4.

Die Hirnregionen zu transfizieren, wird die Lösung, welch....