Die Amyloid-β (Aß) -injected Tiermodell die Verabreichung einer definierten Menge und Arten von Aß-Fragmente ermöglicht und reduziert individuelle Unterschiede innerhalb der einzelnen Studiengruppe. Dieses Protokoll beschreibt die intracerebroventricular (ICV) Injektion von A & bgr; ohne stereotaktischen Instrumente, die Produktion von Alzheimer-ähnliche Verhaltensstörungen in normalen Mäusen ermöglichen.
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Methodenartikel
Intracerebroventricular Injektion von Amyloid-β-Peptide in normalen Mäusen zu Akut Induce Alzheimer-ähnliche kognitive Defizite
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Amyloid-β (Aβ) ist ein wichtiger pathologischer Mediator sowohl der familiären als auch der sporadischen Alzheimer-Krankheit (AD). Im Gehirn von Alzheimer-Patienten wird eine fortschreitende Akkumulation von Aβ-Oligomeren und Plaques beobachtet. Es wird angenommen, dass solche Aβ-Anomalien die langfristige Potenzierung blockieren, die synaptische Funktion beeinträchtigen und kognitive Defizite induzieren. Klinische und experimentelle Beweise haben gezeigt, dass der akute Anstieg des Aβ-Spiegels im Gehirn die Entwicklung von Alzheimer-ähnlichen Phänotypen ermöglicht. Daher ist in vielen Fällen ein detailliertes Protokoll erforderlich, das beschreibt, wie ein AD-Mausmodell akut über die intrazerebroventrikuläre (ICV) Injektion von Aβ generiert werden kann. In diesem Protokoll sind die Schritte des Experiments mit einer Aβ-injizierten Maus enthalten, von der Herstellung der Peptide bis zur Testung von Verhaltensauffälligkeiten. Der Prozess der Vorbereitung der Werkzeuge und der Probanden vor der Injektion, der Injektion des Aβ in das Mäusegehirn durch ICV-Injektion und der Beurteilung des Grades der kognitiven Beeinträchtigung wird im gesamten Protokoll leicht erklärt, wobei der Schwerpunkt auf Tipps für eine effektive ICV-Injektion von Aβ liegt. Durch die Nachahmung bestimmter Aspekte der Alzheimer-Krankheit mit einer bestimmten Injektion von Aβ können Forscher den Alterungsprozess umgehen und sich auf die nachgelagerte Pathologie von Aβ-Anomalien konzentrieren.
Einleitung
Gegeben ist, dass Amyloid-β (Aß) ein pathologisches Merkmal der Alzheimer-Krankheit (AD) ist die Entwicklung von AD Tiermodellen auf neuronale Überexpression von Aß konzentriert. Da Mutationen in Amyloid - Vorläuferprotein (APP) oder Presenilin (PS) , um Störungen des Aß Gleichgewicht führen und letztlich zu der Pathogenese von familiärer AD 1, Maus - Modellen beteiligt APP oder PS - Gen - Mutationen im Allgemeinen angenommen wurden. Zu der breiten Palette von transgenen Mäusen, sind prototypische Mausmodellen die folgenden: TG2576, PDAPP, APP / PS1 und APP23. Im Gehirn zeigen diese Mäuse im allgemeinen Aß Aggregation und schließlich senile Plaques; Plaque....
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Protokoll
Alle Tierversuche wurden in Übereinstimmung mit den National Institutes of Health Guide für die Pflege und Verwendung von Labortieren (NIH Publications No. 8023, überarbeitet 1978) und mit dem Animal Care und Use Committee des Institutional Animal Care und Use Committee durchgeführt von KIST (Seoul, Korea).
1. Vorbereitung der Tiere
- Bereiten Sie eine Gruppe von 7-Wochen alte männliche ICR-Mäuse (oder C57BL / 6).
- Lassen Sie die Mäuse für 3-7 Tage nach dem Transport einer Eingewöhnungsprozess durchlaufen Homöostase wiederherzustellen. In der Regel stellen eine Gruppe von 4-5 Mäuse in jedem Käfig und halten sie bei 22 bis 23 ° C und 40% Luft....
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Ergebnisse
Dieser Abschnitt veranschaulicht Beispiele der Ergebnisse, die durch Bestätigung von Aß Aggregation und Y-maze Bewertung der Gedächtnisdefizite erhalten werden kann. Verwendung des Volllängen - A & bgr; (1-42) Peptid von 42 Aminosäuren, eine Mischung von Aß Monomeren, Oligomeren und Fibrillen (3) hergestellt. Durch die HFIP-induzierten Monomerisierung Schritt relativ homogenen Monomere (Spur B) erhalten. Nach der 7-tägigen Inkubation entwickelt diverse Größen von Aß-.......
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Diskussion
Der wichtigste Schritt in diesem Protokoll ist das ICV-Injektion von Aß. Dieses Protokoll wurde entwickelt , Aß in den ICV - Region von Mäusen ohne stereotaktischen Instrumente 11,12 einzuspritzen. Bevor ein Experiment starten, eine vorläufige Zeit der Praxis Injektionen mit einem blauen Farbstoff anstelle von Aß stattfinden sollte ausreichend Geschicklichkeit zu erreichen. Unmittelbar nach der Injektion, ist es notwendig, ob das Pigment Injektion zu prüfen, wurde ordnungsgemäß durchgeführt. Vorsichtig das Ge.......
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Offenlegungen
Die Autoren haben nichts offenzulegen.
Danksagungen
Diese Forschung wurde unterstützt durch einen Zuschuss des Korea Health Technology R & D-Projekt durch die Korea Health Industry Development Institute (Khidi) unterstützt, gefördert durch das Ministerium für Gesundheit und Soziales, Republik Korea (Grant-Nummer: H14C04660000).
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| ICR-Maus | Orientbio | männlich, 6-8 Wochen, 27-29 g Körpergewicht | |
| C57BL/6 Maus | Orientbio | männlich, 6-8 Wochen, 21-23 g Körpergewicht | |
| Amyloid-beta1-42 | im Haus Synthese | Stammkonzentration: 1 mM/DMSO, injizierte Konzentration: 100 μ M/10% DMSO und 90% PBS | |
| ICV-Injektionsspritze (26s Gauge) | Hamilton | 80308 | |
| Evans blauer Farbstoff (EBD) | abcamBIochemikalien | ab120869 | 1% EBD in PBS |
| DMSO | Sigma D2650 | ||
| PBS | gibco | 10010-023 | |
| Gradi-GelTM II Gradient PAGE Analysis Kit | ELPiS Biotech | EBS-1056 | 15% Gel |
| Precision Plus ProteinTM Dual Xtra Standards | Bio-Rad | 161-0377 | |
| Silber-Färbeset | GE-Healthcare | 17-1150-01 | |
| LabDiet | Orientbio | 5053 |
Referenzen
- Kam, T. I., Gwon, Y., Jung, Y. K. Amyloid beta receptors responsible for neurotoxicity and cellular defects in Alzheimer's disease. Cell Mol Life Sci. 71, 4803-4813 (2014).
- Elder, G. A., Gama Sosa, M. A., De Gasperi, R. Transgenic mouse models of Alzheimer's disea....
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Nachdrucke und Genehmigungen
