Wir stellen ein chirurgisches Verfahren zur Katheterisierung des Darmlymphstamms bei neugeborenen Schweinen vor, um große Mengen an Fettstoffwechselkomponenten aus efferenter Lymphe zu gewinnen.
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Methodenartikel
Long-Term Katheterisierung der Darmlymphe Trunk und Sammlung von Lymphe in Neonatal Pigs
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Die Katheterisierung des intestinalen Lymphstamms bei neugeborenen Schweinen ist eine Technik, die die langfristige Entnahme großer Mengen an intestinaler (zentraler) efferenter Lymphe ermöglicht. Wichtig ist, dass die Entnahme von zentraler Lymphe aus dem Darm es den Forschern ermöglicht, sowohl die Mechanismen und Lipidkonstitutionen zu untersuchen, die mit dem Fettstoffwechsel, Darmentzündungen und Krebsmetastasen verbunden sind, als auch Zellen, die an der Immunfunktion und Immunüberwachung beteiligt sind. Ein ventraler Mittellinien-Operationsansatz ermöglicht eine hervorragende chirurgische Exposition des kranialen Abdomens und einen relativ einfachen Zugang zum intestinalen Lymphstammgefäß, das in der Nähe der Bauchspeicheldrüse und dem rechten ventralen Segment der Pfortader unterhalb des viszeralen Aspekts des rechten Leberlappens liegt. Das Gefäß wird sorgfältig präpariert und von der umgebenden Faszie gelöst und dann mit Nähten erweitert, um das Einführen und anschließende Befestigen des Katheters in das Gefäß zu ermöglichen. Der Katheter wird exteriorisiert und über einen Zeitraum von 7 Tagen wird etwa 1 l/24 h Lymphe entnommen. Während diese Technik die Entnahme großer Mengen zentraler Lymphe über einen längeren Zeitraum ermöglicht, hängt der Erfolg von einer sorgfältigen chirurgischen Dissektion, der Handhabung des Gewebes und der genauen Beachtung der richtigen Operationstechnik ab. Dies ist besonders wichtig bei Operationen bei Jungtieren, da die Lymphgefäße leicht reißen können, was möglicherweise zu chirurgischen und experimentellen Misserfolgen führen kann. Das Video zeigt eine hervorragende Operationstechnik zur Entnahme von Darmlymphe.
Einleitung
Das lymphatische System ist ein wenig erforschten Gebiet der Physiologie. Präklinische Modelle von Lymph - Katheterisierung treten bei verschiedenen Tierarten 1-8 und werden von der pharmazeutischen Industrie und Forschungseinrichtungen verwendet , um Mechanismen der Lipid beteiligt untersuchen 8-12 und Arzneimittelmetabolismus 13-15, Krebsmetastasen 16 mit experimentellen Behandlung 17 und Immunfunktion 18 -26. Diese Studie untersucht die Verwendung von Darmlymphe Stamm Katheterisierung in einem Hausschwein Modellkomponenten von Lipoproteinstoffwechsel zu messen. Lipoprotein-Metabolismus in der Produk....
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Protokoll
Alle Verfahren an Versuchstieren in beschrieben sowohl die Video- und Manuskripts wurden von der Institutional Animal Care und Use Committee genehmigt und anschließend die von der Canadian Council of Animal Care Richtlinien.
1. Chirurgische Anästhesie und OP-Vorbereitung der Neugeborenen-Schweine
- In einem separaten Vorraum, premedicate 25 kg Schweine in der Nähe der Basis des Halses mit einer intramuskulären Beruhigungsmittel-Anästhetika Cocktail mit: Azaperon (0,3 mg / kg), Ketamin-Hydrochlorid (10 mg / kg), Dexmedetomidin (15 ug / kg).
Hinweis: In Buprenorphin (0,005 bis 0,02 mg / kg) in der Pre-Anästhetika Cocktail fü....
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Ergebnisse
Lymphatische Katheterisierung der intestinalen lymphatischen Stamm der Neugeborenen-Schweine ermöglicht Sammlung von etwa 1 l / 24 h zentrale Lymphe über einen Zeitraum von 7 Tagen. Die Lymphe in diesen Experimenten gesammelt enthaltenen Komponenten des Fettstoffwechsels, nämlich Gesamt Lymphe Protein, Lipoprotein ApoB48, Triglyceride, Gesamtprotein und Cholesterin. Tabelle 1 Highlights repräsentative Mengen dieser Lipidkomponenten aus gepoolten Lymphe Proben von drei Schweinen. Be.......
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Diskussion
Darmlymphe Sammeln ist eine ausgezeichnete Methode Mechanismen der Lipid beteiligt zu untersuchen , 8-12 und 13-15 Droge Stoffwechsel, Krebsmetastasen 16,17, Zellhandel und Immunfunktion 18-26, in verschiedenen experimentellen Tiermodellen. Tatsächlich hat die Fähigkeit , große Mengen zu ernten entweder peripher (zuführenden) und Zentral (abführenden und großen Kofferraum Gefäße) Lymphe über einen längeren Zeitraum war besonders wichtig für zeitliche Veränderungen zu verstehen.......
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Offenlegungen
Die Autoren haben nichts offenzulegen.
Danksagungen
Die Arbeit wurde teilweise durch die Finanzierung der Alberta Livestock and Meat Agency und den Natural Science and Research Council Discovery Grant an S. D. Proctor unterstützt.
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Miller Laryngoskop Klinge | Welch Allyn | 68044 | 182 mm Länge |
| Surgivet Berater: Vitalparametermonitor | Surgivet | V9203 | |
| Rektaler Temperaturfühler | Surgivet | V3417 | |
| Monopolarer Elektrochirurgie-Generator | Valley Lab | ||
| Metzenbaum Schere | Fine Science | 14518-18 | |
| Tuffier-Retraktor | Stevens | 162-11-676 | |
| Moskito-Zange | Stevens | 162-7-10 | |
| Kelly-Pinzette-gebogen (14cm) | Stevens | 162-7-38 | |
| Allis Gewebezange | Stevens | 162-7-38 | |
| Pinzette Verbandöse (10.2cm) | Stevens | 162-18-780 | |
| Zange Verband-Adison (12.1cm) | Stevens | 162-17-2510 | |
| Nadeltreiber | Stevens | 162-V98-42 | |
| Irisschere | Fine science | 14058-11 | |
| Umwälzwasserpumpe | Jorvet | J-783X | |
| Maxitherm-Vinyldecke | Jorvet | J-784C | |
| Q-Tip-Applikatoren | Fisher Scientific | 22-037-960 | |
| Katheterisierung Rohre (4,06 OD x 2,31 ID) | Braintree Scientific Inc. | MRE-160 | Mikro-Renethan-Implantationsschlauch |
| 2-0 Seidennaht | Ethicon | LA556 | |
| 2-0 Polyglactin | Naht Ethicon | J443H | 2-0 Vicryl |
| Großtierjacke | Lomir Biomedical Inc. | SSJ2YC | |
| Polypropylen-Waschflaschen | Fisher Scientific | 03-409-22C | 500 ml |
| Penicillin-Streptomycin | Sigma Aldrich | D4333 | |
| EDTA | Sigma Aldrich | 60-00-4 | |
| Amphotericin B | Sigma Aldrich | A2411 | |
| Azaperon | Elanco Animal Health | Stresnil | |
| Dexmedetomidinhydrochlorid | Zoetis | 6295 | Dexdomitor |
| Isofluran | Abbott Tier Gesundheit | 05260-5 | IsoFlo |
| Ketaminhydrochlorid | Zoetis | 2626 | Ketaset |
| Bupenorphin Hydrochlorid | Champion Alstoe Tiergesundheit | DIN:02347510 | |
| 6 mm Endotrachealtubus | Jorvet | J-165d | |
| 10% Lidocain Spray | AstraZeneca | DIN:02003767 | |
| 4 % Chlorhexidin OP-Peeling | Partnar Animal Health | PCH-011 | Verdünnt: 2,0 % ige Lösung |
| 3M Chirurgisches Tuch | 3M Health Care | 1040 | |
| SDS-Seitengel | Invitrogen | EA0375BOX | 3-8 % Trisacetat |
| Polyvinylidenfluorid-Membran | Millipore | IPVH00010 | 0,45 μ m Porengröße |
| ApoB Antikörper | EMD Millipore | AB742 | 1:4000 Verdünnung |
| Esel Anti-Ziegen IgG-HRP | Santa Cruz Biotechnologie | Sc-2304 | |
| ECL Prime Western Blotting Reagenz | GE Healthcare LifeSciences | RPN2232 | |
| Triglycerid-Kit | Wako Pure Chemicals | 998-40391/994-40491 | |
| Gesamtcholesterin-Kit | Wako Pure Chemicals | 439-17501 | |
| Gesamtprotein | Durchbohren | 23225 | Bicinchoninsäure-Assay |
Referenzen
- Lindsay, F. E. F. The cisterna chyli as a source of lymph samples in the cat and dog. Res. Vet. Sci. 17, 256-258 (1974).
- Kohan, A. B., Howles, P. N., Tso, P. Methods for studying rodent intestinal lipoprotein production and metabolism. Curr. Protoc. Mous....
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Nachdrucke und Genehmigungen
