Hier präsentieren wir das Maus-Laser-induzierte choroidale Neovaskularisation (CNV) Protokoll, ein experimentelles Modell, das die vaskulären Kennzeichen der neovaskulären altersbedingten Makuladegeneration (AMD) nachbildet. Einmal gemeistert, kann es zuverlässig und effektiv CNV als Modellsystem induzieren, um verschiedene experimentelle Maßnahmen zu testen.
Ein Abonnement von JoVE ist erforderlich, um diesen Inhalt anzuzeigen. Melden Sie sich an oder beginnen Sie noch heute mit einer kostenlosen Testphase.
Methodenartikel
Ein Mausmodell für Laser-induzierten CNV
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Das Maus-Laser-induzierte choroidale Neovaskularisation (CNV) Modell war ein entscheidendes Hauptstützmodell für die neovaskuläre altersbedingte Makuladegeneration (AMD) Forschung. Durch die gezielte Laserverletzung des RPE und der Bruch-Membran induziert das Verfahren die Angiogenese und modelliert die charakteristische Pathologie, die bei neovaskulärer AMD beobachtet wird.
Zuerst in nicht-menschlichen Primaten entwickelt, wurde das laserinduzierte CNV-Modell in vielen anderen Spezies implementiert, von denen die jüngste die Maus ist. Mausexperimente sind vorteilhaft kostengünstiger, Experimente können in einem viel schnelleren Zeitrahmen durchgeführt werden und sie ermöglichen die Verwendung verschiedener transgener Modelle. Die Miniaturgröße des Mausauges stellt jedoch eine besondere Herausforderung bei der Durchführung des Eingriffs dar. Die Manipulation des Auges zur Visualisierung der Netzhaut erfordert das Üben feiner Geschicklichkeit sowie die gleichzeitige Hand-Auge-Fuß-Koordination, um den Laser zu bedienen. Sobald das Modell jedoch beherrscht ist, kann es angewendet werden, um viele Aspekte der neovaskulären AMD zu untersuchen, wie z. B. molekulare Mechanismen, die Auswirkungen genetischer Manipulationen und die Auswirkungen der medikamentösen Behandlung.
Das laserinduzierte CNV-Modell ist zwar nützlich, aber kein perfektes Modell der Krankheit. Das Wildtyp-Mausauge ist ansonsten gesund, und die chorioretinale Umgebung ahmt die pathologischen Veränderungen bei der menschlichen AMD nicht nach. Darüber hinaus spiegelt die verletzungsinduzierte Angiogenese nicht die gleichen Signalwege wider wie die Angiogenese, die in einem altersbedingten und chronischen Krankheitszustand wie bei AMD auftritt.
Trotz seiner Unzulänglichkeiten ist das laserinduzierte CNV-Modell eine der besten Methoden, die derzeit verfügbar sind, um die schwächende Pathologie der neovaskulären AMD zu untersuchen. Seine Umsetzung hat zu einem tieferen Verständnis der Pathogenese der AMD geführt und zur Entwicklung vieler der derzeit verfügbaren AMD-Therapien beigetragen.
Einleitung
Der altersbedingten Makuladegeneration (AMD) ist eine der Hauptursachen von Blindheit bei Personen im Alter von über 50 1-3. AMD kann in zwei Formen eingeteilt werden: atrophische ("trocken") AMD und neovaskulären ("wet") AMD. Ersteres wird durch geographische Atrophie des retinalen Pigmentepithel (RPE), Choriokapillaris und Photorezeptoren gekennzeichnet, während diese durch die Invasion der abnormen Gefäßen aus der Aderhaut in die äußeren Netzhautschichten gekennzeichnet Undichtigkeit verursachen, Blutungen, und Fibrose und schließlich was zu Blindheit 1,2. Der beiden Formen, Konten neovaskulärer AMD für die Mehrheit der Sehverlust 1.
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Protokoll
Alle Tiere werden in Übereinstimmung mit dem Leitfaden der Pflege und Verwendung von Labortieren Ausgabe 2013 behandelt, der Association for Research in Vision and Ophthalmology (ARVO) Erklärung für die Verwendung von Tieren in Ophthalmic und Vision Research, und wie von der Institutional Animal zugelassen Pflege und Verwendung Komitee für Northwestern University.
Hinweis: Das folgende Verfahren kann vollständig mit einem Bediener durchgeführt werden; ist es jedoch wesentlich effizienter mit zwei Operatoren durchgeführt mit den Aufgaben entsprechend aufgeteilt.
1. Bereiten Bahnhof Laser und Pre-Laser
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Ergebnisse
Die Quantifizierung der CNV Läsionen können durch die Analyse von Flach montiert Aderhaut mit Immunfluoreszenzfärbung, die CNV Schiffe kennzeichnen durchgeführt werden. Die beiden am häufigsten verwendeten Methoden der Gewebepräparation sind FITC-Dextran Kennzeichnung, über Perfusion unmittelbar vor dem Tieropfer oder Post-mortem-Immunfärbung mit einem Endothelzellen-Markierung. Beide dieser Verfahren wurden bereits im Detail beschrieben worden 13,14,21; Figuren 1 und 2 zeige.......
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Diskussion
Es gibt mehrere Faktoren, die Laser-Lieferung und resultierende CNV Läsionsentwicklung nach erfolgreicher Laserinduktion beeinflussen können. Diese Faktoren sollten für kontrollierte und um die zuverlässigsten Ergebnisse müssen vereinheitlicht werden. Der wichtigste dieser Faktoren sind Mausauswahl (Genotyp, Alter und Geschlecht), Anästhesieauswahl und Lasereinstellungen.
Die spezifische Maus-Modell verwendet werden, können eine signifikante Wirkung auf den Verlauf der CNV Entwicklung. Das a.......
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Offenlegungen
Die Autoren erklären, dass sie keine konkurrierenden finanziellen Interessen haben.
Danksagungen
Die Autoren danken Jonathan Chou, MD für seine Unterstützung bei der Vorbereitung und Bearbeitung des endgültigen Manuskripts und Wenzhong Liu für die OCT-Daten. Wir möchten uns auch für die Unterstützung durch den Macula Society Research Grant (AAF), die Unterstützung durch einen uneingeschränkten Zuschuss an die Northwestern University von Research to Prevent Blindness, Inc., New York, NY, USA, und die Unterstützung durch NIH-EY019951 bedanken.
....Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| 532 nm (grün) Argon-Ophthalmologielaser | IRIDEX | GLx | jeder ophthalmologische 532 nm (grün) Argonlaser kann verwendet werden |
| Spaltlampe | Carl Zeiss | 30SL-M | jede Spaltlampe kann verwendet werden, solange sie mit dem Laser kompatibel ist |
| Tribromethanol | Sigma | T48402-25G | wird zur Herstellung von Anästhetikum |
| tert-Amylalkohol | Sigma | 152463-1L | wird zur Herstellung von Anästhetika verwendet |
| Braunglasfläschchen + Septen | Wheaton | WH-223696 | Tribromethanol-Aufbewahrungstücher |
| VWR | 82003-820 | Sonstiges | |
| 1% Tropicamid | Falcon Pharmaceuticals | RXD2974251 | Pupillenerweiterung |
| 0,5% Tetracainhydrochlorid | Alcon | 0065-0741-12 | topische Anästhesie |
| künstliche Tränen | Alcon | 58768-788-25 | |
| Hydratations-Wärmetherapiepumpe (zur Erwärmung von Tieren) | Kent Scientific | HTP-1500 | zur Aufrechterhaltung der Körpertemperatur von Tieren |
| Warmhaltekissen | Kent Scientific | TPZ-0510EA | hält die Körpertemperatur von Tieren |
| aufrecht 30 G Insulinnadeln | BD | 328418 IP-Anästhesie-Injektionswaage | |
| Amerikanische Waage | AWS-1KG-BLK | Maus Wiegen | |
| Deckglas (25 mm x 25 mm) | VWR | 48366089 | Abflachung der Hornhaut zur Visualisierung der Netzhaut von Mäusen |
| Xylazin | aus der Institution | aus | der Anstaltsanästhesie |
| Ketamin | aus der Institution | Anstaltsanästhesie | |
| Volocity | PerkinElmer | für die volumetrische Rekonstruktion | |
| verwendet ImageJ | National Institutes of Health | für die Bildanalyse |
Referenzen
- Bressler, N. M., Bressler, S. B., Fine, S. L. Age related macular degeneration. Surv Ophthalmol. 32, 375-413 (1988).
- Congdon, N., et al. Causes and Prevalence of Visual Impairment Among Adults in the United States. Arch Ophthalmol. 122, 477-485 (2004).
- Ja....
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Nachdrucke und Genehmigungen
