Introduction
Doble emulsjoner består av små dråper skilles fra en bærerfase med en mellomliggende, ikke-blandbart fluidsjikt, og er av spesiell interesse på grunn av deres potensielle anvendelser i industri, farmasøytiske og biologiske anvendelser 1. I noen tilfeller, evnen til å innkapsle høy verdi forbindelser i en dobbel emulsjon kjerne gjør det mulig for materialet som skal beskyttes, og frigis på en kontrollert måte. For eksempel kan stoffer innkapsles i henhold til løselighetsforhold som ikke er passende for det ytre bærerfluidet 2. I tillegg kan det mellomliggende oljelaget brukes som en mal kapsel for innkapsling og avlevering av legemidler, kosmetikk og næringsstoffer 3. I biologi, doble emulsjoner er også nyttige for high throughput screening fordi de tillater et enormt antall sub-nanoliter forsøk som skal utføres, så detektert og sortert ved anvendelse av en fluorescens-aktivert cellesortering (FACS) instrument 4,5.
ent "> Utformingen av dobbelt-emulsjoner med de ønskede ytelseskarakteristika krever nøyaktig kontroll av doble emulsjon størrelse, sammensetning og ensartethet. Selv om masse Emulgering prosesser, så som membran-emulgering, blir brukt i industrien, de resulterende emulsjonene er svært polydispers, som oppviser en bredt utvalg av funksjonelle egenskaper 1. Feltet av dråpe MicroFluidics er naturligvis egnet generering av monodisperse emulsjoner med nøye kontrollert sammensetning 6. microfluidic dobbel emulsjon generasjon har blitt oppnådd med to hovedstrategier, sekvensiell nedgang koker og glass kapillær strømnings fokusering. Doble emulsjoner kan bli generert på plane PDMS enheter ved hjelp av en totrinns rulleprosessen. For det første, vann-i-olje-emulsjoner er opprettet ved hjelp av en vann-i-olje-dråpe-making regionen av en anordning med hydrofobe kanalvegger. Deretter kan emulsjonen bli strømmet eller reinjiseres i en drop-making regionen med hydrofile vegger egnet for olje i vannslippe å lage fire. Imidlertid hydrofil overflatebehandling av pmds krever et ekstra fremstillingstrinn, og er ofte midlertidig 7. Den mest kontrollerbar og repeterbar metode for å danne doble emulsjoner er ved ko-aksial strømning fokusering, utviklet en teknikk ved hjelp av glasskapillar MicroFluidics, hvorved en konsentrisk stråle som inneholder de tre fasene er skåret gjennom en liten åpning for å fremstille monodisperse dråper 8. Denne teknikken gjør det mulig for produksjon av dråper mye mindre enn dimensjonene kanal, med den nøyaktige størrelsen og sammensetningen av den doble emulsjonen er en funksjon av strømningshastighetene for hver fase. Den store forskjellen mellom dråpen og kanalstørrelse og den beskyttende ytre kappe strømmen hindrer dråper fra å kontakte kanalveggene, slik overflatebehandling unødvendig. Men slike glass enheter krever tilpassede fabrikasjon av koniske kapillær tips, sammen med nøye montering og tetting. Tidligere etterforskere har brukt 3D myk litography å generere doble emulsjoner bruker flyt fokus fysikk, men disse enhetene produsert emulsjoner med diameter> 150 mikrometer 9,10, omtrent en størrelsesorden større enn gjenstander vanligvis sortert med FACS. Et attraktivt alternativ vil inkludere robust funksjonalitet og liten dråpe generasjon av glass kapillær koaksial flyt fokus med enkel fremstilling av PDMS myk litografi.I denne artikkelen beskriver vi en dobbel emulsjon generator som bruker co-axial flow fokus å produsere ≤ 50 mikrometer emulsjoner og er konstruert utelukkende ved hjelp av 3D myk litografi 11. Vår Enheten bruker en clamshell tilnærming til å dikte enheter som inkluderer en liten klipping kanal (figur 1) for å tilnærme de emulsjonsdannelse prosesser i en trakk glass kapillær dyse. Enda viktigere, disse enhetene krever ingen spesifikk overflatebehandling, og alle polymer konstruksjon gir enkel og repeterbare fabrikasjon scalable til et stort antall like enheter. Her kan vi skissere design, fabrikasjon og testing av dobbel emulsjon generator. Double emulsjon generasjon er vist å være robust og repeterbare ned til dråpediametere av 14 mikrometer. Koblingen av funksjonalitet med enkle fabrikasjon gjør denne anordningen et attraktivt alternativ for utvikling av nye doble emulsjon anvendelser.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. SU8 Master Fabrication
- Designe microfluidic strukturer for to lag fabrikasjon ved hjelp av AutoCAD og har design skrives ut av en leverandør på kretskort film med 10 mikrometer oppløsning. Detaljene i anordningen utforming er gitt i en vedlagt referanse 11 og kanal geometrier er vist i figur 1. Lagene bør omfatte justeringsmerkene for å sammenstille egenskaper fra hver fabrikasjon lag 12.
- Plasser et pre-renset 3 tommers diameter silisiumskive på en spin coater og slå på vakuum for å feste den til chuck. Påfør 1 ml av SU8-3035 i sentrum av skiven og spinn i 20 sekunder ved 500 rpm, og deretter 30 sekunder ved 2000 rpm, noe som gir en sjikttykkelse på 50 um.
- Fjern skiven og bake på en 135 ° C varmeplate i 30 minutter. La wafer avkjøles til romtemperatur før du går videre til neste trinn.
- Utsett belagt wafer til 1. lagmaske (Figur 2A
- Plasser wafer på spin coater og slå på vakuum for å feste den til chuck. Påfør 1 ml av SU8-2050 i sentrum av skiven og spinn i 20 sekunder ved 500 rpm, og deretter 30 sekunder ved 1375 rpm, noe som resulterer i et lag som gir en ekstra tykkelse på 135 um.
- Ta av wafer og bake på 135 ° C kokeplate i 30 minutter, deretter avkjøles til romtemperatur før du går videre til neste trinn.
- Juster 2. lagmaske (figur 2B) på geometrien mønstret i 1.3 og utsett belagt wafer til en kollimert 190 mW, 365 nm LED for 3 min. Etter eksponering, legger på en 135 ° C kokeplate i 1 minutt, deretter avkjøles til romtemperatur før du går videre til neste trinn.
- Utvikle maskene ved neddykking i et omrørt bad av propylenglykol-monometyleter-acetat i 30 minutter. Vask waferi isopropanol og bake på en 135 ° C varmeplate i 1 min. Plasser utviklet master i en 100 mm petriskål for PDMS støping.
2. PDMS enheten fabrikasjon
- Forbered 10: 1 PDMS ved å kombinere 50 g av silikon base med 5 g av herdemiddel i en plastkopp. Bland innholdet med et multiverktøy utstyrt med en rørepinne. Avgasse blandingen inne i en eksikator i 30 minutter, eller inntil alle luftbobler er fjernet.
- Hell PDMS å gi en tykkelse på 3 mm over master og plassere tilbake i eksikkator for ytterligere avgassing. Når alle bobler er fjernet, bake til enheten ved 60 ° C i 2 timer.
- Skjær enheten fra formen ved hjelp av en skalpell og legg på en ren overflate med mønstrede siden opp. Skjær PDMS mold i to med et barberblad for å skille Master 1 fra Master 2 (figur 3a). På brikken inneholder 50 mikrometer væskehåndtering geometri preges av Master 1, punch fluidumsforbindelsene innløp og utløp med 0,75 mm biopsi punch.
- Plasma behandle enhetene på en mbar O 2 plasma for 60 sek i en 300 W plasma renere. Fukte overflaten av det unpunched stykke av PDMS med en dråpe DI vann for midlertidig å forsinke PDMS-PDMS binding og tjener som et smøremiddel. Mens du ser gjennom et stereomikroskop, sted Master 1 på Master 2 overflate og skyv flater relativt til en mekanisk lås oppnås når de innfelte rammer og utstående rammer i figur 3A kompis.
- Plasser enheten i en 60 ° C ovn og stek den sammensatte enheten (figur 3B) i to dager ved 60 ° C for å fordampe vannet og fullstendig binding.
3. Utarbeidelse av reagenser
- Fyll 1 ml sprøyte med destillert vann for den indre fase.
- Fyll en ml sprøyte med HFE 7500 fluorerte olje med en vekt. % Biokompatible overflateaktivt overflateaktivt middel 13 for den midterste fase.
- Fyll 10 ml sprøyte med 10 wt. % Polyethylene glykol (PEG) i vannløsning inneholdende 1 vekt. % Tween 20 og 1 vekt. % Natriumdodecylsulfat for den kontinuerlige fase.
4. Klargjøring av systemet
- Plasser microfluidic chip på scenen av en invertert mikroskop kombinert med et digitalt kamera som kan <100 usek lukkerhastigheter.
- Monter alle sprøyter på pumper sprøyte og fest 27 G nåler. Fest ~ 30 cm lengder av PE-2 rør på p og sett de løse endene inn i riktig stansede hull i enheten.
- Sett inn en 10 cm lengde på PE-2 i avkjøringen porten på enheten, og plasser den andre enden i en avfallsinnsamling container.
- Prime enheten ved å kjøre sprøytepumper ved høye priser av hastigheter (2000 mL / min) inntil væske i rør segmenter når inntaks portene på enheten.
5. Emulsion Generation
- Fokusere mikroskopet på en region som inneholder 50 um x 50 um åpningen ognedstrøms utløpskanalen.
- Still sprøytepumper for å levere fluid til den doble emulsjonen generatoren ved strømningshastigheter på 250 pl / t for den indre fase, 100 pl / t for den midterste fase, og 700 pl / t for den kontinuerlige fase, og vente 10 min for ekvilibrering.
- Opprettholde strømningshastigheten av den indre og den midtre fase på 250 ul / time, og 100 ul / time, respektivt. Angi strømningshastigheten for den ytre fase på 1050 mL / t. Vent i 3-5 minutter for den doble emulsjoner generasjon for å stabilisere i henhold til dette sett av strømningsforhold.
- Erverve 5 sek av videobilder ved 30 Hz for offline behandling via manuell bildeanalyse.
- Gjenta 5,3 og 5,4 med de strømningshastigheter som er angitt i tabell 1. De indre og midtre fase-strømningsmengder er holdt konstant og bærefasen strømningshastigheten varieres ved å justere innstillingen av sprøytepumpe.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Den doble emulsjon generator består av en co-axial flow fokuseringsanordningen opprettet ved hjelp av 3D PDMS fabrikasjon (figur 1A). Geometrien gjør det mulig at dannelsen av et tre-fase koaksiale stråle som skal kuttes til et kvadrat, 50 um x 50 um åpning, slik at dannelsen av vann / olje / vann-emulsjoner dobbel (figur 1B, figur 1C). Den indre vandige fase og den midtre oljefasen blir brakt sammen i et knutepunkt med kanaldimensjoner på 10 mm x 50 pm (figur 1D, punkt "1"). På grunn av hydrofobisiteten til PDMS, de fluorerte olje klemmer kanalveggene og de indre fase forblir i midten av kanalen som fluidene reise i en kontinuerlig stråle, inntil en plutselig utvidelse kanal ekspansjon nås (figur 1D, punkt "2" ). På dette stedet, blir de indre to fasene injisert inn i sentrum av en 320 um høy juncsjon som gjør den forholdsvis konsentriske innføringen av den vandige bærerfasen. De tre fasene blir tvunget inn i en 50 um x 50 um åpning (figur 1D, punkt "3"), hvorved den høye strømningshastighet av bærefasen kniver de indre to faser i en lang, tynn tendril som dekomponeres til fra ensartede dråper ( Figur 1E).
3D PDMS fabrikasjon krever koblingen av to unike PDMS muggsopp i en clamshell konfigurasjon etter støping på to-lags litografiske mestere. En 50 um høy lag anvendes for å danne de indre og midtre fluidhåndterings kanaler, sammen med skjæreåpningen på Master 1 (figur 2A), sammen med en gratis utstikkende og forsenkede rammer på motsatte hoved. En ytterligere 135 um høye lag brukes til å lage bærefluid og utløpskanaler (figur 2B). Montering av dobbel emulsjon generator utnytter than innfelt og utstående rammer (figur 3A) for geometrisk oppstilling etter plasma behandling (Figur 3B).
Den doble emulsjonen Enheten ble testet ved en rekke forskjellige strømningsforhold for å demonstrere dannelsen av variabel størrelse, monodisperse doble emulsjoner. For disse eksperimentene ble de indre og midtre fasestrømningshastigheter holdes konstant og bærefasen strømningshastigheten ble modifisert for å påvirke skjærkraften under dråpegenerering. Eksperimentelle forhold er parametrisert ved forholdet mellom bærefasestrømmen (Q c) til summen av de indre to faser strømmer (Q sum). Bilder fra dråpe generasjon for eksperimenter utført ved Q c / Q sum fra tre til 57 er vist i figur 4. En langstrakt område som inneholder de indre to faser observert å stikke inn i 50 um x 50 um åpning og bryter inn i dråper som blir konveksjons- nedstrøms. jegncreasing strømmen av bærefasen (økende Q c / Q sum) fører til den indre fase ble skåret opp progressivt tynnere områder som produserer mindre dråper. Doble emulsjoner fremstilt ved hjelp av anordningen ved forskjellige strømningshastigheter viser en gjennomsnittlig diameter variasjonskoeffisient på 5,2%. Histogrammer av dråpediametere for utvalgte verdier av Q c / Q sum viser også den relative ensartethet i størrelsen på dråpene som genereres (figur 5). Enheten viser en evne til å danne doble emulsjoner betydelig mindre åpningens bredde, og viser en tydelig nedadgående trend med økende Q c / Q sum (figur 6). Ved høyeste bærebølgefase strømningstestes, 14 um doble emulsjoner ble dannet ved anvendelse av 50 um x 50 um åpning.
Figur 1. geometri av dobbee emulsjon generator. (A) 3D-modell av den fremstilte enhet. (B) Vertikal tverrsnitt av den midtre kanalen og viser innføringen av den indre (grå), midtre (rødt), og bære (blå) faser. (C) Tverrsnitt som viser jet inneholder de indre to faser inn i firkanten åpningen. (D) ovenfra emulsjon generasjon i enheten. Ved kobling (1) injisering av den hydrofobe mellomfasen blir hjulpet av de hydrofile PDMS, noe som får den til å belegge kanalveggene. Ved kobling (2) til kanalen utvider seg og en stråle av de indre to fasene blir skåret inn i kanalen (3) ved den høyere strømningshastigheten for den kontinuerlige fluidet til et punkt hvor fysiske årsaken dråpedannelse. (E) En mikroskopbilde av dobbelt emulsjon generasjon i enheten. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet. </ p>
Figur 2. litografi produksjon av mesterne. (A) Masken som brukes for fremstilling av 50 um egenskaper. Master 1 brukes til å forme fluidumsforbindelsene viker, den indre / midtre fase junction, emulsjonen generasjon åpnings, og en innfelt trau for justering. Master 2 inneholder en hevet ryggen brukes til justering. (B) Masken brukes for utarbeidelse av 135 mikrometer funksjoner. Mestere er speilbilder som inneholder bærerfluidet ruting kanaler og avkjøringen kanalen. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3. Montering av PDMS enheten. (
Figur 4. Bilder av generert doble emulsjoner ved forskjellige strømningsrater. Strømningshastigheten for den ytre fase blir endret for å endre Q c / Q sum, som er gitt til venstre for hvert bilde. Økende Q c / Q sum begrenser jet av de indre væsker blir skåret gjennom åpningen, og skaper stadig små dråper. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 5. histogrammer av doble emulsjonsdråpene størrelser på forskjellige strømningsrater. Gjennomsnittlig variasjonskoeffisient av diameteren emulsjonsdråpene produsert på et gitt sett av strømningsforholdene er 5,2%. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 6. Droplet diameter versus normalisert strømningshastighet parameter. Justering av strømningshastigheten av den kontinuerlige fase tillater produksjon av doble emulsjoner som er 30% -100% av diameteren åpningen. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Tabell 1. strømningshastighet parametre brukt for forsøkene. Den indre fase og midtre fase strømningsrater (Q i, Q m) holdes konstant, noe som gir en konstant kombinert strømningsrate (Q sum). Bærefasen strømningshastighet (Qc) blir variert for å fremstille doble emulsjoner med forskjellige diametre. Forholdet Q c / Q sum er hoved nondimensional parameter som beskriver eksperimentelle forhold.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Den doble emulsjonen genererende geometri som er beskrevet her, er utformet for å etterligne fysikken for glass kapillære enheter 8. I disse er innrettet sylindriske glasskapillærer som brukes til å lage en tre-fase koaksial stråle som er skåret i like doble emulsjonsdråper. Funksjonen til vår 3D PDMS anordning er avhengig av den sentrale innretning av små funksjoner som er dannet med 50 um høye fremstillings med bærerfase-kanaler som er 320 mikrometer i total høyde. Det er et betydelig potensial for å misaligning de høyere funksjonene mønstret av 2 nd lagmaske i trinn 1,7 i forhold til 50 mikrometer høye geometri hvis masker ikke er nøyaktig på linje. Riktig justering kan bli hjulpet ved å utforme justeringsmerkene, som konsentriske sirkler inn masker for å bli samlokalisert i løpet bildet mønster. Plasmaet binding av PDMS to halvdelene av anordningen er en annen prosess som kan føre til store forskyvninger i den siste enheten. Plasma bondingPDMS til PDMS er generelt momentant, så i trinn 2,4 beskriver vi fukting av en anordning overflate med avionisert vann for å hemme binding og tillate manipulering, slik at justerings rammer som er vist i figur 3A kan få lov til å låse. Hvis dette er forsøkt uten tilstrekkelig fukt vil PDMS overflater irreversibilitet bond før du kommer inn i riktig justering, og må kastes enheten av og nye PDMS muggsopp gjort.
Den doble emulsjon enheten er utformet for å dra nytte av de fabrikasjon teknikker som som fører til jevnt hydrofobe overflateegenskaper. Men brukt utenfor de parametere som er beskrevet i protokollen krever en viss forståelse av de nødvendige fluidic prosesser. En overgangen mellom den indre og den midtre fase (figur 1D, punkt "1"), en forholdsvis høy strøm av den indre fase og lav strømning av den midtre fase skape en tofaset stråle, med den hydrofobe mellomfasen belegg på kanalveggene. Hvisden forholdsmessige strømningen av den midtre fasen økes, generering av diskrete vann-i-olje-dråper vil begynne å skje, noe som eliminerer evnen til å danne en sammenhengende tre-fase jet for dråpedannelse i hullet (figur 1D, punkt "3" ). Etter at kanalen ekspansjon (figur 1D, punkt "2"), en betydelig mengde av bærerfase strømning er nødvendig for å skape geometriske avstanden mellom midtfasen og den hydrofobe kanalveggene. Reduksjoner i bærefasestrømning vil til slutt føre til midten fase fukter de hydrofobe enhets vegger. Betydelige reduksjoner i bærefasestrømmen kan skape strømningsforhold som er tilstrekkelig til å avskjære de indre fasene i en lang, tynn glødetråd, hvorved radikalt å forandre fysikken i dobbel emulsjon dråpedannelse.
Når bygget er denne enheten utformet for å produsere dobbelt emulsjoner fra 14? 50 um, en praktisk størrelse for sortering ved hjelp av kommersielle FACSinstrumenter. Hvis doble emulsjoner utenfor dette størrelsesområde er ønsket, og åpningens dimensjoner må skaleres fra 50 um x 50 um størrelse som er brukt her. Fordi enheten er utformet for å produsere vann / olje / vann doble emulsjoner med jevnt hydrofobe overflateegenskaper, kan olje / vann / olje doble emulsjoner ikke skapt med mindre det var en overflatebehandling brukes for å gjøre enheten jevnt hydrofile.
Dette arbeidet viser en lett å dikte PDMS enhet som kan den robuste dannelsen av vann / olje / vann doble emulsjoner. Selv om tidligere etterforskere har rapportert dannelse av doble emulsjoner i enheter som er opprettet ved hjelp av 3D-litografi 14,15, de doble emulsjoner dannet i sine enheter hadde diameter som ble målt i 100s av mikrometer. Enheten som presenteres her er egnet til fremstilling av doble emulsjoner en størrelsesorden mindre enn denne, noe som gir volumer tilsvarende til pattedyrceller og godt egnet til sortering av FACS.
Selv om disse resultatene kan også oppnås ved bruk av glass kapillær MicroFluidics, fabrikkere glass enheter er arbeidskrevende og krever mange hands-on skritt per enhet. For vår alle PDMS enhet, i stor grad består fabrikasjon av molding, bonding, og baking PDMS plater, prosesser som er enkle, repeterbare, og lett å skalere til store tall.
Anvendeligheten av en litografisk fabrikert enhet for å generere doble emulsjoner ved hjelp av koaksiale strømnings fokusering er blitt demonstrert. Vi håper at den enkle fabrikasjon og robust funksjonalitet på denne doble emulsjon generator design skal føre til tilpasning for vitenskapelige og industrielle applikasjoner. Etterforskerne tidligere avskrekket av spesialisert kompetanse som kreves for å arbeide i glass kapillær MicroFluidics, bør være mer komfortabel med å bruke PDMS myk litografi, nå en felles laboratorieteknikk. Videre de små dråpestørrelser som kan produseres er godt egnet til PERFORm celle og biologiske analyser i dråper, og kvantifisering og sortering ved hjelp FACS. For industrielle applikasjoner, har det allerede blitt vist at denne typen enheter kan monteres i matriser og parallelliserte 10, slik at doble emulsjon generasjon prisene å øke med bestillinger av størrelsene i forhold til enkeltheter. I tillegg til evnen til å danne små doble emulsjoner i store koaksiale strømnings fokusering kanaler bør gjøre enheten motstandsdyktig mot tilsmussing og tilstopping, noe som er kritisk når parallelizing det utstyr som er beregnet til å kjøres i lange perioder uten intervensjon.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
Dette arbeidet ble støttet av en forskningspris fra California Institute for Kvantitative biovitenskap (Qb3), den Bridging the Gap Award fra Rogers Family Foundation, UCSF / Sandler Foundation Program for Gjennombrudd Biomedical Research, et stipend fra BASF, og NSF gjennom Fakultet Early Career Development (KARRIERE) Program (DBI-1253293).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Photomasks | CadArt Servcies | ||
| 3" silicon wafers, P type, virgin test grade | University Wafers | 447 | |
| SU-8 3035 | Microchem | Y311074 | |
| SU-8 2050 | Microchem | Y111072 | |
| Sylgard 184 silicone elastomer kit | Krayden | 4019862 | |
| 1 ml syringes | BD | 309628 | |
| 10 ml syringes | BD | 309604 | |
| 27 gaugue needles | BD | 305109 | |
| PE 2 polyethylene tubing | Scientific Commodities, Inc. | B31695-PE/2 | |
| Novec 7500 | Fisher Scientific | 98-0212-2928-5 | Commonly knowns as HFE 7500 |
| Biocompatable surfactant | Ran Biotechnologies | 008-FluoroSurfactant | |
| 35,000 MW PEG | Sigma Aldrich | 1546660 | |
| Tween 20 | Sigma Aldrich | P1369 | |
| Sodium dodecyl sulfate | Sigma Aldrich | L3771 |
References
- Van Der Graaf, S., Schroën, C. G. P. H., Boom, R. M. Preparation of double emulsions by membrane emulsification - A review. J. Membrane Sci. 251 (1-2), 7-15 (2005).
- Laugel, C., Baillet, A. P., Youenang Piemi, M., Marty, J., Ferrier, D. Oil-water-oil multiple emulsions for prolonged delivery of hydrocortisone after topical application: comparison with simple emulsions. Int. J. Pharm. 160 (1), 109-117 (1998).
- Kim, S. H., Kim, J. W., Cho, J. C., Weitz, D. A. Double-emulsion drops with ultra-thin shells for capsule templates. Lab Chip. 11 (18), 3162-3166 (2011).
- Lim, S. W., Abate, A. R. Ultrahigh-throughput sorting of microfluidic drops with flow cytometry. Lab Chip. 13 (23), 4563-4572 (2013).
- Bernath, K., Hai, M., Mastrobattista, E., Griffiths, A. D., Magdassi, S., Tawfik, D. S. In vitro compartmentalization by double emulsions: sorting and gene enrichment by fluorescence activated cell sorting. Anal. Biochem. 325 (1), 151-157 (2004).
- Seemann, R., Brinkmann, M., Pfohl, T., Herminghaus, S.
- Bauer, W. A. C., Fischlechner, M., Abell, C., Huck, W. T. S. Hydrophilic PDMS microchannels for high-throughput formation of oil-in-water microdroplets and water-in-oil-in-water double emulsions. Lab Chip. 10 (14), 1814-1819 (2010).
- Utada, A. S., Lorenceau, E., Link, D. R., Kaplan, P. D., Stone, H. A., Weitz, D. A. Monodisperse double emulsions generated from a microcapillary device. Science. 308 (5721), 537-541 (2005).
- Chang, F. C., Su, Y. C. Controlled double emulsification utilizing 3D PDMS microchannels. J. Micromech. Microeng. 18 (6), 065018 (2008).
- Romanowsky, M. B., Abate, A. R., Rotem, A., Holtze, C., Weitz, D. A. High throughput production of single core double emulsions in a parallelized microfluidic device. Lab Chip. 12 (4), 802-807 (2012).
- Tran, T. M., Cater, S., Abate, A. R. Coaxial flow focusing in poly(dimethylsiloxane) microfluidic devices. Biomicrofluidics. 8 (1), 016502 (2014).
- Lithography. , Available from: https://www.memsnet.org/mems/processes/lithography.html (2015).
- O'Donovan, B., Eastburn, D. J., Abate, A. R.
- Chang, F. C., Lin, H. H., Su, Y. C. Controlled W/O/W double emulsification in 3-D PDMS micro-channels. 3rd IEEE Int. Conf. Nano/Micro Eng. Mol. Syst. NEMS, , 792-795 (2008).
- Romanowsky, M. B., Abate, A. R., Rotem, A., Holtze, C., Weitz, D. A. High throughput production of single core double emulsions in a parallelized microfluidic device. Lab Chip. 12 (4), 802 (2012).
