Die Induktion der mütterliche Immunaktivierung bei Mäusen in der Mitte der Schwangerschaft Bühne mit Viral Mimic Poly (I: C)

Summary

Die mütterliche Immunaktivierung (MIA) ist ein Modell für einen umweltbedingten Risikofaktor für Autismus und Schizophrenie. Das Ziel dieses Artikels ist es, eine Schritt-für-Schritt-Anleitung zur Induktion von MIA bei trächtigen Mäusen zu geben, um die Reproduzierbarkeit dieses Modells zu verbessern.

Abstract

Das Modell der mütterlichen Immunaktivierung (MIA) wird zunehmend als Nagetiermodell für den umweltbedingten Risikofaktor verschiedener psychiatrischer Störungen geschätzt. Zahlreiche Studien haben gezeigt, dass das MIA-Modell in der Lage ist, Gesicht, Konstruktion und prädiktive Validität zu zeigen, die für Autismus und Schizophrenie relevant sind. Um MIA zu modellieren, verwenden Forscher häufig viral imitierte Polyinosimin:Polyzytidylsäure (Poly(I:C)), um das Immunsystem bei trächtigen Nagetieren zu aktivieren. Im Allgemeinen weisen die Nachkommen von immunaktivierten Muttertieren Verhaltensauffälligkeiten und physiologische Veränderungen auf, die mit Autismus und Schizophrenie assoziiert sind. Die Injektion von Poly(I:C) mit unterschiedlichen Dosierungen und zu unterschiedlichen Zeitpunkten kann jedoch zu unterschiedlichen Ergebnissen führen, indem sie die Gehirnentwicklung in verschiedenen Stadien stört. In diesem Artikel stellen wir eine detaillierte Methode zur Induktion von MIA durch intraperitoneale (i.p.) Injektion von 20 mg/kg Poly(I:C) in der Mitte der embryonalen Schwangerschaft von 12,5 Tagen vor (E12.5). Es wurde gezeigt, dass diese Methode eine akute Entzündungsreaktion in der mütterlich-plazentar-fetalen Achse induziert, was letztendlich zu den Hirnstörungen und Verhaltensphänotypen führt, die mit Autismus und Schizophrenie verbunden sind.

Introduction

Das Konzept der mütterlichen Immunaktivierung (MIA) stammt aus den epidemiologischen Studien über die Assoziation der Infektion der Mutter mit Autismus und Schizophrenie ^1. Aufgrund des Fehlens von nachweisbarem replizierenden viralen Pathogenen in der Plazenta oder fetalen Gehirn nach mütterlichen Virusinfektion ^2,3, wird die Wirkung der Infektion auf die Nachkommen Hypothese eher durch die Aktivierung des mütterlichen Immunsystem verursacht werden , als die Pathogene selbst .

Polycytidylsäure: Um die Ursache-Wirkungs-Beziehung zwischen MIA und psychiatrischen Störungen, die Injektion von chemisch synthetisierten, v....

Protocol

Alle Protokolle wurden im Rahmen der Genehmigung des California Institute of Technology Institutional Animal Care und Use Committee (IACUC) durchgeführt.

1. Vorbereitung für Timed-Paarung Paare

1. Verwenden Sie mindestens sechs Dämme für Verhaltensexperimente und 3 für die Genexpressionsanalyse.
   HINWEIS: die doppelte Anzahl der geschätzten weiblichen Mäusen, da nur etwa 50% der Mäuse aus der timed-mating eingesteckt werden.
2. Verwenden weibliche Mäuse ohne vorherige Schwangerschaft und bei 8-16 Wochen alt sind.
   HINWEIS: Weibliche Mäuse, die vor sexuellen Kontakt mit männlichen Mäusen haben, aber noch nicht sc....

Results

Die Injektion von 20 mg / kg Poly (I: C) bei E12,5 konnte eine akute Entzündungsreaktion in der mütterlichen Plazenta-fetale Achse hervorrufen und eine chronische Wirkung auf die Entwicklung des Gehirns und Verhaltens - Phänotypen ^12,13 auszufällen. Erhöhte Niveaus eines proinflammatorischen Cytokin, Interleukin (IL) -6, ist ein zuverlässiger Indikator einer akuten Entzündungsreaktion nach MIA. Die Spitzenzeit für IL6 Genexpression in der Plazenta und fötaler Gehirn i.......

Discussion

MIA Induktion zu unterschiedlichen Zeitfenstern stört unterschiedliche Entwicklung des Gehirns Ereignisse bei Nagern und folglich führt zu unterschiedlichen Verhaltensstörungen und Neuropathologien bei den Nachkommen. Hier beschrieben wir ein Protokoll zu induzieren MIA in Mäusen, die mit Poly (I: C) Injektion an E12.5. Diese Methode der MIA Induktion führt zu Verhaltens, neurologische, immunologische und Magen - Darm - Anomalien im Zusammenhang mit Autismus und Schizophrenie bei den Nachkommen ^8,10,11,16. Es.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Polyinosin– Polyzytidylsäure Kaliumsalz	SIGMA	P9582
0,9% Natriumchlorid INJ. USP	HOSPIRA	NDC 0409-4888-10
MONOJECT Insulin Spritze 3/10 ml 29 G x 1/2"	COVIDIEN	8881600145
50 ml Röhrchen mit konischem Schraubverschluss	USA SCIENTIFIC	1500-1211
Nanodrop 1000 Spektralphotometer	THERMO SCIENTIFIC	1000	Optional
Stereomikroskop	Wild Heerbrugg	M5A	Optional
Dumont #5 Pinzette Inox Spitzengröße .10 x .06 mm		Roboz RS-5045	Optional
RNAlater RNA-Stabilisierungsreagenz	Qiagen	76104	Optional
TRIzol Reagenz	Life Technologies	15596-026	wahlfrei
RQ1 Rnase-freie DNase	Promega	M610A	Optionales
iScript cDNA-Synthesekit	Bio-Rad	170-8891	Optionaler
FastStart Universal SYBR Green Master Mix mit ROX	Roche	4913922001	Optional
Real-time PCR	ABI	7300	Optionaler
Primer: Il6 forward	Life Technologies	TAGTCCTTCCTACCCCAATTTCC	Optionaler
Primer: Il6 Reverse	Life Technologies	TTGGTCCTTCTCACTCCCCTTC Optionaler
Primer: Beta-Aktin Forward	Life Technologies	AGAGGGAAATCGTGCGTGAGAC	Optional
Grundierung: Beta-Aktin Reverse	Life Technologies	CAATAGTGATGACCTGGCCGT	Optionale
optische 96-Well-Reaktionsplatte MicroAmp	Life Technologies	4306737	Option
MicroAmp optische Klebefolie	Life Technologies	4311971	Optionl
EthoVision	Noldus	EthoVision	Optionl
SR-LAB apparatus (PPI)	San Diego Instruments	SR-LAB	Optionl
Marmor	PENN-PLAX	Blaue Edelsteine	Marmor Optionl
Dulbecco's Phosphat-Buffered Saline (DPBS)	Life Technologies	21600-069	Optionl
Paraformaldehyd	MACRON	2621-59	Optionl
Vibratome	Leica	VT1000 S	Optionl
Natriumazid	Sigma	S2002	Optionl
Triton x-100	Sigma	X100	Optionl
Wasserstoffperoxidlösung	Sigma	18312	Optionl
Ziegenserum	Vector Laboratories	S-1000	Optionl
Kaninchen Anti-Calbindin Antikörper	Abcam	ab11426	Optionl
Biotinlyierte Ziege Anti-Kaninchen IgGantikörper	Vector Laboratories	BA-1000	Option
für VECTASTAIN ABC Kit	Vector Laboratories	PK-4000	Option