Ex-vivo-Live-Imaging von Lungenmetastasen und deren Mikromilieu

Renske J.E. van den Bijgaart; Niwen Kong; Carrie Maynard; Vicki Plaks

doi:10.3791/53741

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Methodenartikel

Ex-vivo-Live-Imaging von Lungenmetastasen und deren Mikromilieu

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DOI:

10.3791/53741

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3. Februar 2016

Renske J.E. van den Bijgaart^*¹ , Niwen Kong^*¹ , Carrie Maynard¹^,² , Vicki Plaks¹^,³

¹Department of Anatomy, University of California, ²Hubrecht Institute-Royal Dutch Academy of Science and University Medical Center Utrecht, ³Department of Cell and Developmental Biology, Sackler Faculty of Medicine

^* These authors contributed equally

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Wir beschreiben ein relativ einfaches Verfahren zur ex vivo Echtzeit-Bildgebung der Tumorzell Stroma Wechselwirkungen innerhalb Lungenmetastasen unter Verwendung fluoreszierenden Reportern in Mäusen. Verwendung von Spinnplatten konfokale Mikroskopie, ermöglicht diese Technik Visualisierung von lebenden Zellen für mindestens 4 h und angepasst werden könnten andere entzündliche Lungenerkrankungen zu untersuchen.

Zusammenfassung

Metastasierung ist eine Hauptursache für krebsbedingten Morbidität und Mortalität. Metastasierung ist ein mehrstufiger Prozess und aufgrund seiner Komplexität, die genauen zellulären und molekularen Prozesse, die metastatische Verbreitung und Wachstum sind immer noch schwer zu regieren. Echtzeit-Bildgebung ermöglicht die Visualisierung der dynamischen und räumlichen Wechselwirkungen von Zellen und ihrer Mikroumgebung. Soliden Tumoren metastasieren häufig in die Lunge. Jedoch stellt die anatomische Lage der Lungen eine Herausforderung für die intravital Bildgebung. Dieses Protokoll stellt eine relativ einfache und schnelle Methode zur ex vivo Echtzeit-Bildgebung der dynamischen Wechselwirkungen zwischen Tumorzellen und ihrer Umgebung Stroma in Lungenmetastasen. Mit dieser Methode kann die Motilität von Krebszellen als auch Wechselwirkungen zwischen Krebszellen und Stromazellen in ihrer Mikroumgebung für mehrere Stunden in Echtzeit visualisiert werden. transgenen fluoreszierenden Reporter-Mäuse Durch die Verwendung eines fluoreszierenden Zelllinie, injizierbare fluoreszenzmarkiertenMoleküle und / oder Antikörper, mehrere Komponenten der Lunge Mikroumgebung visualisiert, wie Blutgefäße und Immunzellen werden. Um das Bild zu den verschiedenen Zelltypen, eine sich drehende Scheibe konfokalen Mikroskop, das langfristige kontinuierliche Bildgebung mit schnellen, vierfarbige Bildaufnahme ermöglicht verwendet wurde. Zeitraffer-Filme aus Bildern zusammengestellt mehrere Positionen und Brennebenen gesammelt über zeigen Wechselwirkungen zwischen Live-metastatischen und Immunzellen für mindestens 4 Stunden. Diese Technik kann weiter zu testen Chemotherapie oder gezielte Therapie verwendet werden. Darüber hinaus könnte dieses Verfahren für die Untersuchung von anderen Lungenbezogenen Pathologien angepasst werden, dass die Lunge Mikroumgebung beeinflussen.

Einleitung

Der tödlichste Aspekt von Krebs ist die Metastasierung, die mehr als 90% der krebsbedingten Morbidität und Mortalität ausmacht¹. Die Metastasierung ist ein mehrstufiger Prozess, und aufgrund ihrer Komplexität sind die genauen zellulären und molekularen Mechanismen, die die Ausbreitung und das Wachstum von Metastasen steuern, noch schwer fassbar. Um Metastasen zu bilden, müssen sich Tumorzellen im Primärtumor von ihren Nachbarzellen und der Basalmembran lösen, die extrazelluläre Matrix durchqueren, intravasieren, über Blut- oder Lymphgefäße wandern, an der sekundären Stelle extravasieren und schließlich überleben und Sekundärtumoren etablieren. Neben den Eig....