Introduction
Metastasen goed voor meer dan 90% van de sterfgevallen als gevolg van solide tumoren. Bot is de meest voorkomende orgaan beïnvloed door metastasen van verscheidene soorten kanker, in het bijzonder borstkanker en prostaatkanker. Wanneer de diagnose in de kliniek, meestal botmetastasen al hebt ingevoerd gevorderde stadia met ofwel osteolytische of osteoblastische veranderingen in bot, vaak gepaard met neurologische symptomen.
Eerdere studies voornamelijk gericht op de openlijke osteolytische botmetastasen 1-3, maar we momenteel beperkte begrip van micrometastasen in botten voor het begin van het proces osteolytische. Dit is althans gedeeltelijk te wijten aan gebrek aan geschikte experimentele modellen en benaderingen. Genetisch gemanipuleerde muis modellen van borstkanker metastaseren vaak longen, maar veel minder efficiënt botten 4. Ook de orthotopically getransplanteerde tumoren ontwikkelen zelden spontaan botmetastasen, met een aantal bot-tropische 4T1 borstklier carcinoomeen sub-klonen en MSP overexpressie PyMT transgene muismodel als uitzonderingen 5-7. Intra-scheenbeen boren kan kankercellen te leveren aan het bot 8-10, maar zij maakt ook schade en ontstekingen aan de lokale weefsels. Momenteel intracardiale injectie van borstkanker cellijnen belangrijke benadering bot kolonisatie 11-13 onderzoeken geweest. Echter, na kankercellen worden ingebracht in linker ventrikel slechts een beperkt deel zal uiteindelijk bij bot en beenmerg, waardoor het moeilijk microscopische uitzaaiingen volgen op een meetbare manier.
In deze studie hebben we vastgesteld techniek, namelijk intra-iliacale arterie (IA) injectie 14, om kankercellen selectief leveren aan achterpoot weefsels, waardoor kankercellen in bot en beenmerg verrijken zonder schade aan lokale weefsels. Door het bot specificiteit, deze benadering ook voldoende voor indolent kankercellen uiteindelijk koloniseren alvorens het eenij dieren bezwijken voor primaire tumoren en uitzaaiingen in andere vitale organen. In combinatie met verschillende andere technieken, zoals bioluminescentie, immunofluorescentie kleuring en bothistomorfometrie, IIA injectie is potentieel nuttig voor een breed scala aan onderzoeksdoeleinden verband met botmetastasen, vooral voor de overgang van één kankercellen meerdere cellen volgen micrometastasen. In het bijzonder hebben we aangetoond dat IIA injectie kunnen we de interacties tussen kankercellen en diverse omringende cellen in het bot micro visualiseren.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle dierlijke werk werd gedaan in overeenstemming met de richtlijnen van het Baylor College of Medicine Animal Care.
1. Celbereiding
Op: verschillende kankercellijnen kunnen worden gebruikt voor injectie IIA afhankelijk onderzoeksdoeleinden. Wij hebben borstkankercellijnen MCF7, 4T1, 4T07, MDA-MB-361, MDA-MB-231, MDA-MB-436 en prostaatkanker cellijn C4-2 in het onderzoek. We gebruiken meestal zowel GFP en vuurvlieg-luciferase gelabeld kankercellen voor onze studie en hier laten zien sommige gegevens van de GFP-Luciferase-label MCF7 cellijn.
- Handhaven cellen in DMEM met 10% FBS en 0,1 mg / ml penicilline-streptomycine bij 37 ° C in 5% CO2.
- Voordat IIA injectie trypsinize cellen bij 80-90% samenvloeiing met 0,25% trypsine / EDTA-oplossing. Gebruik koude PBS om cellen tweemaal wassen en resuspendeer cellen in 10 ml PBS celtelling. PBS Centrifugeer cellen te verwijderen bij 800 xg gedurende 5 minuten.
- Resuspendeer cellenbij een concentratie van 5 x 10 6 cellen / ml in ijskoude PBS.
- Gebruik 100 ul GFP- en vuurvlieg-luciferase gelabeld kankercellen voor IIA injectie van één muis.
Opmerking:. Daarom is het aantal cellen door elk dier ontvangen, is 5 x 10 5 Dit aantal moet worden gewijzigd gebaseerd op de agressiviteit van cellijnen. - Houd celsuspensies op ijs.
Noot: Trillingen kunnen nodig zijn om celaggregatie elke paar minuten te voorkomen totdat het klaar is voor injectie. Voor sommige cellijnen (zoals MDA-MB-231), kunnen strengere procedures (bijvoorbeeld, via 45 urn cel zeef) nodig om aggregatie te voorkomen. Houdt u er rekening mee dat de klomp van de schepen weefselnecrose kan veroorzaken, en daardoor verwarrende de experimenten.
2. Dier Voorbereiding
- Voor dier pijn, geef 5 mg / kg / dag carprofen (of ander analgeticum) met voedingssupplement aan de muizen niet minder dan 24 uur voor de operatie. Behereneen dosis van 0,1 mg / ml subcutaan buprenorfine 60 min voorafgaand aan de operatie. Let op: een optionele procedure is om estradiol pallet te implanteren in de achterkant van de dieren om extra estradiol bieden. Hierdoor wordt de groei van ER + kankercellen (bijvoorbeeld MCF-7 cellen) 9 versnellen.
- Verdoven een 4-6 weken oude muizen (ongeveer 20 g) met ketamine (80 - 100 mg / kg) en xylazine (10 -12,5 mg / ml) door intraperitoneale injectie.
- Bevestig het juiste niveau van sedatie van een 20 g muis door teen knijpen en de waarneming van een vermindering van 50% van de ademhalingsfrequentie en roze slijmvliezen (bv, muis oor huid en poot huid). Houd toezicht op deze vitale functies om de 15 minuten tijdens de operatie. Opmerking: geen beweging van het dier blijkt dat het dier voldoende verdoofd en klaar voor chirurgie.
- Gebruik dierenarts zalf op de ogen om uitdroging te voorkomen.
- Scheer de muis in de onderbuik, in het bijzonder de rechter lies gebied waar de operatie en injectie zalplaatsvinden.
Opmerking: Dit is niet nodig als athymische naakt muizen worden gebruikt. - Zet de muis op zijn rug, spreidde de benen in hun natuurlijke positie en plak de tenen naar mobiele dissectie karton met tape.
- Veeg de rechter liesstreek met 70% isopropyl ethanol gedrenkt steriele wattenstaafjes, volgde met betadine chirurgische scrub meerdere malen.
3. Het gemeenschappelijk Iliac Vein en Artery Locatie en Scheiding
- Maak een incisie in de huid van 1,0-1,2 cm lang tussen de 4 e en 5 e tepels in de rechter onderbuik met steriele, # 10 koolstofstaal scalpelmesjes gehouden in een nummer 3 handvat. Maak dan gebruik van een steriele chirurgische laken om het dier lichaam te bedekken met uitzondering van de incisie.
- Verplaats het dier standaard bench top dissectie microscoop. Gebruik een vergroting 4x voor injectie.
- Onder 4X vergroting van de dissectie microscoop, steek stompe tang scheiding tussen het vetweefsel en de peritoneum, en druk op de weefsels naar buiten aan beide zijden van de iliacale vaten en zenuwen (zie figuur 1) bloot te leggen.
Opmerking: De slagader tussen aorta van de middellijn en het onderste deel van slagader takken wordt bekkenslagader genoemd. Dit is waar de injectie plaatsvindt. - Gebruik een paar rechte fijne tang te breken door het bindweefsel (zoals een membraan) tussen schepen en de zenuw, dichter bij de schepen.
- Schakel de rechte fijne tang aan de linkerhand. Pak een paar schuine fijne tang met de rechterhand. Steek de rechterhand tang in dezelfde positie waar het bindweefsel zijn gebroken. En dan vasthouden aan de rechterhand tang door en onder de schepen.
- Op hetzelfde moment, plaatst de linkerhand een tang in het bindweefsel aan de linkerkant van de schepen aan de rechterhand tang gaan door te leiden.
- Zodra de rechter tang krijgt onder de schepen, proberen om de schepen te scheiden van de omliggende tissue een beetje meer, en dan blijven ze op de top van de rechterhand tang.
- Gebruik linkerhand tang om het uiteinde van een 4-0 zijden hechtdraad te leveren aan de rechterhand een tang, en trek de hechtdraad voorzichtig en langzaam door middel van onder de schepen. Opmerking: Nu zowel de gemeenschappelijke ader en slagader schepen worden opgesteld door de hechtdraad opgeheven (zie figuur 2).
4. Injectie en Post-injectie Care
- Maak de cellen voor injectie in een 31 G insulinespuit. Gebruik 100 gl celsuspensie in PBS per injectie. Zorg ervoor dat u pipet op en neer meerdere malen om de cellen te scheiden en aggregatie te vermijden, zodat de geïnjecteerde cellen niet zal verstoppen en blokkeren de bloedstroom.
- Met de schuine pincet in de linkerhand, zet de tang onder de schepen langs de leiding van de hechtdraad, en open vervolgens de twee takken van de tang, met de vaten voorzichtig gehouden op de tang.
Opmerking: De tijd tussen de twee takken van de tang zal de i wordennjection website. - Houd de 31 G naald met 100 gl celsuspensies in de rechterhand, met de schuine kant van de naald naar boven, klaar voor injectie.
- Steek de naald in de slagader lumen (bloed zal de naald in te voeren). Duw vervolgens celsuspensie langzaam in om de cellen te injecteren. De celsuspensie zal wegduwen van de rode bloedcellen in het vat. Probeer niet om de schepen breken of lekken, de celsuspensie uit.
- Wanneer de injectie is voltooid, voorzichtig terug te trekken van de naald en houd houden van de schepen tot aan de linkerkant een tang om het bloeden te stoppen. Trek vervolgens weg van de hechtdraad.
- Weg te trekken de linkerhand een tang, en snel gebruik maken van een wattenstaafje om de slagader incisie gebied drukken om het bloeden te stoppen.
Opmerking: Meestal 5-10 min voortdurende druk is voldoende om het bloeden te stoppen. - Als het bloeden stopt, gebruik dan de huid lijm om de huid randen van de operatie gebied te sluiten. Maak een oormerk, en controleer op bioluminescentie signalering naar de verdeling van de geïnjecteerde cellen te onderzoeken. <br /> Opmerking: Een succesvolle injectie resulteert in een afbeelding soortgelijk aan figuur 3.
- Raadpleeg bioluminescentie signalering door injectie van 100 pi 15 mg / ml luciferine in PBS bij 75 mg / kg muis concentratie via het intra-orbitale sinus.
- Voor intra-orbitale injectie, zet vingers aan beide zijden van de muis oog, gebruik druk om maken oogbol iets pop uit het oog kader, neem 28 G insulinespuit naalden tussen de oogbol en neus, en duw dan langzaam spuit luciferine injecteren .
Opmerking: Bij de juiste positie, moet de naald in staat tot een diepte van 2 bereikt - 3 mm alvorens hard weefsel (bot). - Plaats de muis in afbeeldingsstelsel voor in vivo beeldvorming van gehele dieren 10-60 sec in 5 minuten (zie figuur 3).
Opmerking: Een optionele procedure is om estradiol pellet implanteren in de achterkant van de dieren om extra estradiol bieden. Hierdoor zal de groei van ER + kankercellen (bijvoorbeeld MCF-7 versnellencellen) 15.
- Voor intra-orbitale injectie, zet vingers aan beide zijden van de muis oog, gebruik druk om maken oogbol iets pop uit het oog kader, neem 28 G insulinespuit naalden tussen de oogbol en neus, en duw dan langzaam spuit luciferine injecteren .
- Raadpleeg bioluminescentie signalering door injectie van 100 pi 15 mg / ml luciferine in PBS bij 75 mg / kg muis concentratie via het intra-orbitale sinus.
- Laat de muis op een warme verwarming pad totdat hij wakker wordt. Bewaken van de bloeden, zwelling, tekenen van dehiscence en pijn tijdens de post-operatieve periode. Leg de muizen terug naar de kooi met pijnstillende dekking (carprofin voedingssupplement voorgesteld) gegeven voor pijnbestrijding totdat er geen tekenen van pijn. Besteed veel aandacht en zorg aan de dieren gedurende 7 dagen na de operatie.
5. Toezicht gemetastaseerde Growth
- histomorfometrie:
- Harvest tumordragende botweefsel, bevestig de botten in 4% paraformaldehyde gedurende 24 uur, vervolgens ontkalken ze in pH 7,0 14% EDTA oplossing voor 3-5 dagen, en deze te onderwerpen aan inbedden in paraffine zoals eerder beschreven 14.
- Gedeelte paraffine inbedding botweefsel met een dikte van 3 urn en uitvoeren standaard histologische Werkwijze hematoxyline / eosine kleuring zoals eerder beschreven 14.
- Immunohistochemisproberen:
- Onderwerp paraffine ingebedde tumor dragende bot glijdt naar immunohistochemie kleuring voor diverse doeleinden zoals eerder beschreven 14. In het kort immunostain MCF7 kankercellen door anti-GFP antilichamen en immunostain osteogene cellen (pre-osteoblasten en Osteoblasten) door anti-Osterix antilichamen en anti-alkalische fosfatase (ALP) antilichamen, respectievelijk.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Figuur 1 toont de anatomische locatie en de relatie van bekkenslagader (rood) en ader (blauw).
Figuur 2 toont relatieve positie van iliacale bloedvaten en zenuwen onder dissectie microscoop. Zoals weergegeven in figuur 2A, de vaten en zenuwen direct onder de peritoneale wand en kan worden onthuld na de incisie wordt gemaakt en het peritoneum wordt weggeduwd. De vena iliaca communis is aan de linkerkant en is groter en donkerder opzichte van de slagader. De slagader is in het midden, en het ziet er roze. Het is dunner dan de ader maar heeft dikkere spierwand. De ader en slagader parallel en nauw met elkaar verbonden. Verderop aan de rechterkant is de witte lumbosacrale zenuw. Figuur 2B toont gemeenschappelijke iliac schepen gescheiden van het omringende bindweefsel, spieren en zenuwen, en opgetild door een 4-0 zijden hechtdraad. De gemeenschappelijke iliacale ader, slagader en lumbosacrale zenuw zijn ook aangegeven.
Figuur 3 toont representatieve in vivo en ex vivo bioluminescentie beelden van dieren na intra-iliaca injectie. Vijf x 10 5-GFP-gemerkte luciferine MCF7 cellen in 100 pi werden toegediend rechts achterpoot van de muis door intra-iliaca injectie. D-luciferine werd vervolgens toegediend door intra-orbit sinus injectie, gevolgd door de in vivo gehele dier bioluminescentie. De geïnjecteerde MCF7 cellen werden verrijkt rechts achterpoot van de muis zoals aangegeven door de bioluminescentie signalen (Figuur 3A). De in vivo bioluminescentie signalen van het hele dier werden gevolgd om de 3 dagen of elke week, en vervolgens werden de muis bot weefsels geoogst op dag 14 na de injectie als het hele dier bioluminescentie signaal een bepaalde drempel bereikt (Fotonflux> 10 4). Na D-luciferine toediening werden het bot weefsel van intra-iliaca geïnjecteerde muis snel geoogst en ondergedompeld in PBS voor ex vivo beeldvorming. De sterke bioluminescentie signaal van het intra-iliacale arterie geïnjecteerd rechter achterpoot bot maar niet van controle bot linker toonde de specifieke lokalisatie van geïnjecteerde cellen (Figuur 3B).
Figuur 4 toont representatieve beelden van histologische en immunofluorescentie kleuring. Wanneer de tumor-dragende botten werden geoogst, werden ze onderworpen aan paraformaldehyde fixatie, EDTA ontkalking, en dan paraffine-inbedding. Drie urn been objectglaasjes werden bereid en standaard H & E kleuring uitgevoerd. De compacte kasseien-achtige cellen met grotere kernen waren microscopische MCF7 metastatische lesies in het botweefsel 14 dagen na intra-iliacale arterie injectie, zoals aangegeven door de rode pijlen. Beenmerg (BM) En de grote roze platte trabeculaire beenderen (TB) met dunne kernen zo gemerkt (Figuur 4A). Figuur 4B toont GFP gemerkte MCF7 cellen (groen), ALP-gemerkte osteoblasten (rood in de linker afbeelding) en Osterix gelabelde pre-osteoblasten (rood in de juiste afbeelding) na immunofluorescentie kleuring. Blauw DAPI kleuring duidt de kern.
Figuur 1:. Anatomie van bekkenslagader (rood) en ader (blauw) in muizen buikaorta, bekkenslagader, iliaca externa en femorale slagader worden weergegeven zoals aangegeven. Injectie wordt uitgevoerd bij bekkenslagader van de aorta in de richting van dijbeenslagader richting. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 2:. Iliaca vaten en zenuwen onder standaard dissectie microscoop met 4x vergroting (a) Beeld van het intacte bloedvaten en zenuwen. (B) Beeld van opgeheven schepen. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 3: Vertegenwoordiger in vivo en ex vivo bioluminescentie beelden van de muis na intra-iliaca injectie. (A) In vivo bioluminescentie signaal van het hele dier direct na injectie. (B) De ex vivo bioluminescentie signaalvan links controle bot en rechts geïnjecteerd bot uit geïnjecteerde dieren die 14 dagen later werden geoogst. Alle bioluminescentie signalen werden gemeten door het volgen van aanbevolen procedure en de instellingen van de fabrikant. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 4: Vertegenwoordiger beelden van histologische en immunofluorescentie kleuring. (A) Vertegenwoordiger H & E beeld kleuring van MCF7 tumordragende botweefsel na intra-iliaca injectie. Schaal bar = 25 pm. Opmerking: HE kleuring is geen effectieve manier om tumoren te detecteren. In kleinere vergroting, HE kleuring is niet gevoelig genoeg om tumoren te onderscheiden. In grotere vergroting is niet efficiënt alle een scanReas. (B) Immunofluorescente kleuring beelden van de MCF7-tumor dragende botweefsel. Groen: GFP-gelabelde MCF7 cellen, Rood in de linker afbeelding: ALP-gelabeld osteoblasten, Rood in de juiste afbeelding: Osterix-gelabeld pre-osteoblasten. Blauw DAPI kleuring duidt de kern. Schaal bar = 25 pm. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Hoewel slechts de iliacale slagader is het doelwit van injectie voor kankercellen, adviseren wij de scheiding van zowel ader iliacale slagader en uit de omliggende weefsels, en om ze samen te heffen als een bundel. Dit komt omdat de ader en slagader intensief contact met elkaar, en de veneuze vaatwand is dun en gemakkelijk te breken. Daarom is voor een succesvolle injectie, bespaart tijd en moeite bij elkaar houden van de twee vaten, hoewel kankercellen worden geïnjecteerd alleen de slagader. Een 4-0 zijden hechtdraad wordt gebruikt om dit proces te ondersteunen zoals weergegeven in figuur 2. De hechting kan ook helpen stop bloeden moet plaatsvinden.
De meeste stappen van IIA injectie moeten worden uitgevoerd onder de dissectie microscoop. De muis schepen zijn zacht en klein, wat de procedures uitdagend maakt. 100% in onze ervaring - Echter, na voldoende ervaring, de kans op succes kan 90 bereiken.
Met deze techniek kunnen onderzoekers eenble bot kolonisatie modellen van hun favoriete kankercel modellen, waaronder die traditioneel gedacht "niet-uitgezaaide" vast te stellen. MCF-7 cellen vormen een goed voorbeeld. Sterker nog, bij aankomst in het bot micro-omgeving, MCF-7-cellen ondergaan een korte rustperiode alvorens af te koloniseren. Zeer weinig spontane botmetastasen zijn gedetecteerd bij dieren dragen orthotope MCF-7 xenotransplantaten. Evenwel storing ook het gevolg zijn van de resthoeveelheid van uitgezaaide tumorcellen, de langzame start van kolonisatie en de meer agressieve groei van orthotope tumoren (dat dieren gedood voor botletsels kan vaststellen). Aldus gebrek aan detectie kan niet als bewijs tegen vermogen MCF-7 cellen te metastaseren. In feite kan indolent of slapend been micrometastasen vaker in menselijke borstkanker patiënten, zoals voorgesteld door jaar naar decennia kiemrust die vaak wordt gezien in de kliniek.
IIA injectie kan niet alleen worden toegepast luminal of basale borstkankercellen, maar ook voor andere soorten kanker zoals prostaatkanker. In combinatie met verschillende keuzen technieken toezicht botziekte, kan intra-iliacale arterie injectie een significante bijdrage aan vele onderzoeksdoeleinden maken. We gebruiken vaak bioluminescentie signalering naar botmetastase progressie sporen na intra-iliaca injectie, en vervolgens oogst tumor-dragende botten voor fluorescerende immunohistochemie kleuring om interacties tussen kankercellen en omliggende bot micro-niches te definiëren. Bothistomorfometrie 16-17 en 18-20 μCT kan worden gebruikt om botstructuur wijzigingen en andere anatomische details bot die wordt veroorzaakt door de inoculatie van kankercellen evalueren. Proper overwegingen en combinaties moeten worden bepaald door elke groep voor hun specifieke onderzoek doel.
Net als bij intra-scheenbeen 8-10 en intra-cardiale inenting 11-13, een waarschuwing van de intra-iliac arterie injectie is dat het niet vroeg stappen metastatische voorafgaand aan embolie en binnendringen van tumorcellen in de circulatie heeft recapituleren. Idealiter zou een spontane metastase proces vanaf orthotope tumoren nodig zijn om volledig te recapituleren metastase cascade. Echter, dit proces is zeer inefficiënt in de meeste modellen, met slechts een paar uitzonderingen na zoals bepaalde bot-troop 4T1 sub-klonen 5-6 en MSP overexpressie PyMT transgeen muismodel 7. We hopen dat de IIA injectie zal nieuwe inzichten in het bot kolonisatie proces, dat op zijn beurt het ontwerp en de ontwikkeling van echt efficiënte spontane botmetastase modellen voor preklinische studies kan vergemakkelijken.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Materials | |||
| DMEM | HyClone | SH30022.01 | |
| FBS | Gibco | 16000 | |
| Pen/Strep Amphatericin B | Lonza Biowhittaker | 17-745E | |
| PBS | Lonza Biowhittaker | 17-516F | |
| Trypsin/EDTA solution | HyClone | SH30042.01 | |
| 45 μM cell strainer | VWR International Laboratory | 195-2545 | |
| MediGel CPF with carprofen | Controlled item from veterinary care in BCM | For pain management | |
| Buprenorphine | Controlled item from veterinary care in BCM | For pain management | |
| Estradiol pellet | Innovative Research of America | SE-121 | |
| Ketamine and xylazine | Controlled item from veterinary care in BCM | ||
| Vet ointment | Controlled item from veterinary care in BCM | Avoid eye dryness | |
| Shaver | Oster | 78005-050 | For furred mice |
| Isopropyl ethanol | ACROS | 67-63-0 | |
| Betadine surgical scrub | Controlled item from veterinary care in BCM | ||
| #10 scalpel blades | Ted Pella, Inc | 549-3CS-10 | Multiple |
| No. 3 handle | Ted Pella, Inc | 541-31 | Need to be autoclaved |
| Sterile surgical drape | Sai Infusion Technology | PSS-SD1 | |
| Straight forceps | Roboz Surgical Instrument | RS-5132 | Need to be autoclaved |
| Straight fine forceps | Fine Science Tools | 11253-20 | Need to be autoclaved |
| Edged fine forceps | Fine Science Tools | 11253-25 | Need to be autoclaved |
| 4-0 Vicryl silk suture | Johnson & Johnson Health Care | J214H | |
| 31 G insuline syringes | BD | 328418 | Multiple |
| Q-tips cotton swabs (Sterile) | VWR International Laboratory | 89031-272 | |
| Skin glue | Henry Schein Animal Health | 31477 | For surgery site skin closure |
| Ear Tag Applicator | Fine Science Tools | 24220-00 | |
| Ear tags | Fine Science Tools | 24220-50 | |
| D-luciferin | Gold Biotechnology | LUCK | Avoid light and put on ice |
| 28 G insulin syringes | BD | 329410 | For intra-orbital injection |
| Paraformadehyde | Alfa Aesar | 30525-89-4 | For tissue fixation |
| EDTA | OmniPur | 4050 | For bone tissue decalficication |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Equipment | |||
| Dissection microscope | Leica | Leica S6E stereo | |
| IVIS Lumina II imaging system | Advanced Molecular Vision | ||
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Antibodies | |||
| Anti-GFP antibodies (JL-8) | Clontech | 632381 | |
| Anti-ALP antibodies | Abcam | ab108337 | |
| Anti-Osterix antibodies | Abcam | ab22552 |
References
- Kang, Y., et al. A multigenic program mediating breast cancer metastasis to bone. Cancer cell. 3 (6), 537-549 (2003).
- Lu, X., et al. VCAM-1 promotes osteolytic expansion of indolent bone micrometastasis of breast cancer by engaging alpha4beta1-positive osteoclast progenitors. Cancer cell. 20 (6), 701-714 (2011).
- Ell, B., Kang, Y.
- Kretschmann, K. L., Welm, A. L. Mouse models of breast cancer metastasis to bone. Cancer Metastasis Rev. 31 (3-4), 579-583 (2012).
- Lelekakis, M., et al. A novel orthotopic model of breast cancer metastasis to bone. Clin Exp Metastasis. 17 (2), 163-170 (1999).
- Rose, A. A., et al. Osteoactivin promotes breast cancer metastasis to bone. Mol Cancer Res. 5 (10), 1001-1014 (2007).
- Welm, A. L., et al. The macrophage-stimulating protein pathway promotes metastasis in a mouse model for breast cancer and predicts poor prognosis in humans. Proc Natl Acad Sci U S A. 104 (18), 7570-7575 (2007).
- Li, X., et al. Loss of TGF-beta Responsiveness in Prostate Stromal Cells Alters Chemokine Levels and Facilitates the Development of Mixed Osteoblastic/Osteolytic Bone Lessions. Mol. Cancer. Res. 10 (4), 494-503 (2012).
- Gregory, L. S., Choi, W., Burke, L., Clements, J. A. Breast Cancer Cells Induce Osteolytic Bone Lesions In vivo through a Reduction in Osteoblast Activity in Mice. PLoS ON. 8 (9), e68103 (2013).
- Waning, D. L., et al. Excess TGF-β mediates muscle weakness associated with bone metastases in mice. Nat Med. 21 (11), 1262-1271 (2015).
- Simmons, J. K., et al.
- Werbeck, J. L., et al. Tumor microenvironment regulates metastasis and metastasis genes of mouse MMTV-PymT mammary cancer cells in vivo. Vet Pathol. 51 (4), 868-881 (2014).
- Xiang, J., et al. CXCR4 Protein Epitope Mimetic Antagonist, POL5551, Disrupts Metastasis and Enhances Chemotherapy Effect in Triple Negative Breast Cancer. Mol Cancer Ther. 14 (11), 2473-2485 (2015).
- Wang, H., et al. The osteogenic niche promotes early-stage bone colonization of disseminated breast cancer cells. Cancer Cell. 27 (2), 193-210 (2015).
- Hoffmann, J., et al. Characterization of new estrogen receptor destabilizing compounds: effects on estrogen-sensitive and tamoxifen-resistant breast cancer. J Natl Cancer Inst. 96 (3), 210-218 (2004).
- Tannehill-Gregg, S. H., Levine, A. L., Nadella, M. V., Iguchi, H., Rosol, T. J. The effect of zoledronic acid and osteoprotegerin on growth of human lung cancer in the tibias of nude mice. Clin Exp Metastasis. 23 (1), 19-31 (2006).
- Slyfield, C. R., Tkachenko, E. V., Wilson, D. L., Hernandez, C. J.
- Koba, W., Jelicks, L. A., Fine, E. J. MicroPET/SPECT/CT imaging of small animal models of disease. Am J Pathol. 182 (2), 319-324 (2013).
- Simmons, J. K., et al. Canine prostate cancer cell line (Probasco) produces osteoblastic metastases in vivo. Prostate. 74 (13), 1251-1265 (2014).
- Amend, S. R., et al. Thrombospondin-1 regulates bone homeostasis through effects on bone matrix integrity and nitric oxide signaling in osteoclasts. J Bone Miner Res. 30 (1), 106-115 (2015).
