Eine akute Retinal Modell zur Bewertung von Blut Retinal Barrier Breach und potenzielle Medikamente für die Behandlung

Zusammenfassung

Eine kostengünstige, einfach zu bedienende und leistungsfähige System etabliert mögliche Behandlungen zu bewerten, die Blut Retina-Schranke Verletzung durch Histamin induzierte verbessern könnte. Blutgefäße Leckage, Müller-Zell-Aktivierung und die Kontinuität der neuronalen Prozesse werden genutzt, um die Schadensantwort und deren Umkehrung mit einem potenziellen Medikament, Lipoxin A4 zu beurteilen.

Zusammenfassung

Ein kostengünstiges, einfach zu bedienendes und leistungsfähiges Modellsystem wurde etabliert, um potenzielle Behandlungen zu bewerten, die die Verletzung der Netzhautschranke im Blut verbessern könnten. Es wurde gezeigt, dass ein Entzündungsfaktor, Histamin, die Integrität der Gefäße in der kultivierten Netzhaut durch positive Färbung von IgG außerhalb der Blutgefäße beeinträchtigt. Die Auswirkungen von Histamin selbst und die von Medikamentenkandidaten für mögliche Behandlungen, wie z. B. Lipoxin A4, werden anhand von drei Parametern bewertet: Blutgefäßleckage durch IgG-Immunfärbung, Aktivierung von Müller-Zellen durch GFAP-Färbung und Veränderung der neuronalen Dendriten durch Färbung für MAP2. Darüber hinaus ermöglicht die schichtweise Organisation der Netzhaut eine detaillierte Analyse der Prozesse von Müller- und Ganglienzellen, wie z.B. Veränderungen der Breite und Kontinuität. Obwohl die vorgelegten Daten mit Netzhautkulturen von Schweinen stammen, ist das System auf mehrere Spezies anwendbar. Somit bietet das Modell ein zuverlässiges Werkzeug, um die frühen Auswirkungen einer beeinträchtigten retinalen Gefäßintegrität auf verschiedene Zelltypen zu untersuchen und potenzielle Wirkstoffkandidaten für die Behandlung zu bewerten.

Einleitung

Eine wachsende Zahl von Hinweisen unterstützt die Existenz von Blut Retina - Schranke (BRB) ^1-5 und seine Ähnlichkeit mit dem Blut - Hirn - Schranke (BBB) ^​​6,7. Kompromiss der BBB wurde ursächlich oder als diagnostischer Marker für chronische neurodegenerative Erkrankungen, wie Alzheimer-Krankheit (AD) ^8,9 und akuter Erkrankungen wie Delirium ¹⁰ fest verbunden. Mechanistische Einblicke in diese Pathologien und Entdeckungen für potentielle Arzneimittelziele werden durch die begrenzte Zugänglichkeit und Netzwerk Kompliziertheit des Gehirns im Allgemeinen behindert. Alternativen , wie beispielsweise in vivo - Bildgeb....

Protokoll

Alle Protokolle wurden in Übereinstimmung mit den Richtlinien der Institutional Animal Care und Use Committee gegebenenfalls durchgeführt.

1. Vorbereitung

1. Bereiten Sie die Stabilisierungsmedien mit 75% Dulbecco modifiziertem Eagle Medium (DMEM), 25% Hanks 'Balanced Salt Solution (HBSS). Gut mischen, aliquotieren und bei -20 ° C bis zur Verwendung.
2. Bereiten Sie die Phosphat-gepufferte Saline (PBS) und durch Autoklavieren sterilisieren. Bewahren Sie die Lösung bei Raumtemperatur. Erwärmen Sie den PBS auf 37 ° C vor dem Experiment (5 ml pro Vertiefung).
3. Herstellung von 10%, 20% und 30% Saccharose in PBS. Fi....

Ergebnisse

Wir stellen eine kostengünstige, zeitsparende und einfach zu bedienendes System, mögliche Behandlungen zu bewerten, die gegen die BRB Verletzung durch Histamin induzierte schützen könnte. IgG wird in den Gefäßen in Kontrollnetzhaut (Abbildung 1A) beschränkt, sondern tritt aus der Blutgefäße auf Histamin - Exposition (Abbildung 1B), was bestätigt , dass das Modell erfolgreich etabliert.

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Diskussion

In diesem Bericht stellen wir ein aussagekräftiges ex vivo akutes Netzhautmodell der BRB-Dysfunktion anhand der Schweinenetzhaut vor. Dieses Modellsystem erfordert keine speziellen Instrumente und kann unter den meisten Laborumgebungen leicht angepasst werden. Um ein erfolgreiches Ergebnis zu erzielen, sind jedoch mehrere Schritte genau erforderlich. Nachdem die Augäpfel von der Quelle gewonnen wurden, müssen sie bei 4 °C oder auf Eis aufbewahrt und so schnell wie möglich verarbeitet werden. Bei der Analyse der .......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
DMEM	Life Technologies	11965-092
HBSS	Life Technologies	14170-112
Saccharose	J.T.Baker	4072-05
Histamin	Sigma	H7125-1G
Penicillin-Streptomycin	Invitrogen
PFA	Elektronenmikroskopie Sciences	15710
Gefriermedien	Triangle Biomedical Sciences	TFM-5
Normales Ziegenserum	Rockland	D104-00-0050
Triton X-100	Sigma	T8787
GFAP Antikörper	Millipore	AB5804
MAP2 Antikörper	EMD Millipore	MAB3418
FITC konjugiertes Esel-Anti-Kaninchen IgG	Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc.	711-095-152
Cy3 konjugiertes Esel-Anti-Maus-IgG	Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc.	715-165-150
Eindeckmedium mit DAPI	Vector Laboratories, Inc.	H-1200
Konfokales Lasermikroskop	Nikon	Eclipse Ti Mikroskop
ImageJ	National Institutes of Health	1.45s