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Methodenartikel

Empirische, metagenomischen und Computertechniken beleuchten die Mechanismen, durch welche Fungizide Kompromiss Bienengesundheit

9.6K Ansichten

DOI:

10.3791/54631

9. Oktober 2017

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Mikrobielle Konsortien innerhalb von Bumble Bee Hives bereichern und Pollen für Bienenlarven bewahren. Sequenzierung der nächsten Generation, zusammen mit Labor und Feld-basierte Experimente mit beschreibt diesem Manuskript Protokolle verwendet, um die Hypothese zu testen, dass Fungizid Rückstände der Pollen Mikrobiom und Kolonie Demographie, letztlich zu Kolonie verändern Verlust.

Zusammenfassung

Züchter verwenden oft Fungizid Sprays während der Blüte Pflanzen gegen Krankheit, schützen die Bienen Fungizid Rückstände anführt. Obwohl als "Biene-Safe", gibt es Anzeichen dafür, dass Fungizid Rückstände Pollen Biene Rückgänge (für Honig und Bumble Bee Arten) zugeordnet sind. Während die Mechanismen relativ unbekannt bleiben, haben Forscher spekulierten, daß Biene-Mikrobe Symbiosen beteiligt sind. Mikroorganismen spielen eine entscheidende Rolle bei der Erhaltung und/oder Verarbeitung von Pollen, die als Nahrung für die Larven Bienen dient. Durch die Veränderung der mikrobiellen Gemeinschaft, ist es wahrscheinlich, dass Fungizide diese Mikrobe-vermittelten Leistungen stören und damit Gesundheit der Bienen gefährden. Dieses Manuskript beschreibt die Protokolle verwendet, um die indirekte Mechanismen zu untersuchen, durch die Fungizide Kolonie Rückgang verursachen können. Käfig Experimenten auszusetzen Bienen, Blumen Fungizid behandelt haben bereits die ersten belegt, dass Fungizide Tiefe Völkerverluste in eine native Hummel (Bombus Impatiens) verursachen. Mit Feld-relevanten Dosen von Fungiziden, eine Reihe von Experimenten wurden entwickelt, um eine feinere Beschreibung der mikrobiellen Gemeinschaft Dynamik der Fungizid-exponierten Pollen zu bieten. Verschiebungen in der strukturellen Zusammensetzung der Pilz- und bakterielle Assemblagen innerhalb der Pollen Microbiome sind von Next Generation Sequencing und metagenomischen Analyse untersucht. Experimente, die hierin entwickelt wurden so bieten ein mechanistisches Verständnis wie Fungizide Microbiome Pollen-Bestimmungen auswirken. Letztendlich sollten diese Erkenntnisse auf dem indirekten Weg Licht durch die Fungizide Kolonie Rückgänge verursachen können.

Einleitung

Verwaltet und Wildbienenarten sind weit verbreitete Rückgänge, mit großen Auswirkungen auf die beiden natürlichen und landwirtschaftlichen Systemen1erleben. Trotz konzertierte Anstrengungen, die Ursachen des Problems zu verstehen sind die Faktoren, die Honig Biene Rückgänge noch nicht gut verstanden,2,3,4. Für bestimmte Arten von wild, native Bienen ist die Situation dringend5,6geworden. Wenn Bienenvölker nicht aufrechterhalten werden können, wenn sie mit der industriellen Landwirtschaft schnei....

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Protokoll

1. untersuchen die Wirkung von Fungizid Belichtung auf Bumble Bee Colony Erfolg mittels Cage Feldexperimente

  1. Satz bis zehn Gitter Käfige in einem Feld mit Hafer gepflanzt. Graben Sie einen Graben um jeden Käfig und graben Sie alle vier Kanten des Käfigs Netz in den Boden um sicherzustellen, dass die Bienen nicht entziehen können. Lager der Käfige, blühende Topfpflanzen, die bekannt sind für Bienen (z.B. Buchweizen, Borretsch, Alyssum, Kosmos und Sonnenblumen) attraktiv sein ( Abbildung 2).
  2. Ergänzen die Käfige mit einem einzigen Tablett (36 x 42 cm)-Blüte Klee. Cluster-florale Ressourcen innerhalb einer Ecke d....

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Ergebnisse

Feldstudie Käfig:

Den Käfig Experimenten gewonnene Daten zeigte, dass die Hummeln Bienenvölker eine deutliche Reaktion auf Fungizid Exposition. Das Fungizid behandelt Nesselsucht produziert deutlich weniger Arbeiter (12,2 ± 3,8, Mittelwert ± SE) als Kontrolle Nesselsucht (43,2 ± 11,2, F1,9= 6,8, p = 0,03) (Abbildung 4). Darüber hinaus war die Biene Biomasse der Fun.......

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Diskussion

Untersuchungen über die Auswirkungen der Fungizide auf die Bienengesundheit blieben ein erforschten Aspekt des Schädlings-Management-Strategien. Unsere Studie zielt darauf ab, diese Wissenslücke zu überbrücken, mithilfe einer Reihe von ergänzenden Techniken, die explizit die potenziellen Faktoren Biene Rückgänge zu isolieren. Planung, Begründung und Darstellung dieser Experimente sind nachfolgend aufgeführt.

Es ist darauf zu achten, dass keine Bienen erlaubt sind, um das Netz der Käfig Experim.......

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Offenlegungen

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Danksagungen

Die Autoren danken der University of Wisconsin Biotechnologie Center DNA Sequenzierung Anlage für Bereitstellung Amplifikation und Sequenzierung Einrichtungen und Dienstleistungen, Caitlin Carlson, Jennifer Knack, Jake Otto und Max Haase für die Bereitstellung technischen Hilfe molekulare Analyse. Diese Arbeit wurde von USDA-Agricultural Research Service angeeignet Mittel (aktuelle Research Information System #3655-21220-001) unterstützt. Weiterer Unterstützung wurde von der National Science Foundation (unter Grant Nr. bereitgestellt. Deb-1442148), DOE Great Lakes Bioenergy Research Center (DOE Office of Science BER DE-FC02-07ER64494), und der USDA National Institute ....

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
Natupol BienenstockKoppertUSRESM116 Bienenstöcke
Propiconazol 14,3Quali-Ppro60207-90-1Propiconazol 14,3%
Abound Syngenta4033540Azoxystrobin 22,9%
ChlorothalonilSyngenta3452Fungizid für Versuche
verwendet PollengranulatBiene gerettetB004D5650C3X 16oz Flaschen, Pollen für Versuche
Bakterienstämme für die InokulationCurrie Lab
Hefestämme für die InokulationHittinger Lab
Primer PaareUW Biotech Center
DNA Isolation KitMo Bio12830-50Commercial DNA Isolation Kit
Qubit dsDNA HS Assay KitThermo FisherQ32851DNA Quantifizierungstool
Select Master Mix für CFXThermo Fisher4472952Wird zur Durchführung von Echtzeit-PCR mit SYBR GreenER-Farbstoff verwendet.
Real-Time PCR Detection SystemBio Rad1855196Instrument für die PCR-Amplifikation
PCR Clean-Up Kit,Axygen10159-696Wird für die effiziente Entfernung von nicht eingebauten dNTPs, Salzen und Enzymen
verwendet DNA 1000 Kit Agilent5067-1504Wird für die Größenbestimmung und Analyse von DNA-Fragmenten
verwendet MiSeq SequencerIlluminaWird für die nächste Generation verwendet Sequenzierung
Verschiedene Glaswaren (Becher, Kolben, Pipetten, Reagenzgläser, Repietten)VWR

Referenzen

  1. Potts, S. G., Biesmeijer, J. C., Kremen, C., Neumann, P., Schweiger, O., Kunin, W. E. Global pollinator declines: Trends, impacts and drivers. Trends Ecol Evolut. 25 (6), 345-353 (2010).
  2. Vanengelsdorp, D., Meixner, M. D. A hi....

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Nachdrucke und Genehmigungen

Schlagwörter

FungizidexpositionBienenmikrobiommetagenomische AnalysePollenvorr teHummelkolonienK figexperimenteDynamik mikrobieller GemeinschaftenPollenmikrobiomFungizidbehandlung