Ein Mausmodell der Gruppe B<em&gt; Streptococcus</em&gt; Vaginal Colonization

Zusammenfassung

Der Zweck dieses Protokolls ist die menschliche Gruppe B Streptococcus (GBS) vaginale Besiedlung in einem Mausmodell zu imitieren. Dieses Verfahren kann verwendet werden, Wirtsimmunantworten und bakterielle Faktoren zu untersuchen, um GBS vaginal Persistenz beitragen, sowie therapeutische Strategien testen.

Zusammenfassung

Streptococcus agalactiae (Gruppe B Streptococcus, GBS) ist ein Gram-positive, asymptomatische Besiedler des menschlichen Magen - Darm - Trakt und vaginalen Trakt von 10 - 30% der Erwachsenen. In immungeschwächten Personen, einschließlich Neugeborene, Schwangere und ältere Menschen, wechseln kann GBS zu einem invasiven Erreger der Sepsis, Arthritis, Pneumonie und Meningitis. Da GBS ein führender bakterielle Erreger von Neugeborenen ist, wird der Strom Prophylaxe von späten Schwangerschaft Screening umfasste für GBS vaginale Besiedlung und die anschließende peripartum Antibiotika-Behandlung von GBS-positiven Müttern. Schwere GBS vaginale Belastung ist ein Risikofaktor für beide Neugeborenen Krankheit und Kolonisation. Leider ist wenig über den Host und bakterielle Faktoren bekannt, die zu fördern oder GBS erlauben vaginale Besiedlung. Dieses Protokoll beschreibt ein Verfahren zur Ermittlung persistent GBS vaginal Kolonisierung eine einzelne β-Estradiol Vorbehandlung und tägliche Probennahme unter Verwendung von bakterieller loa zu bestimmen,d. Es weitere Details Methoden zusätzliche Therapien oder Reagenzien von Interesse zu verwalten und vaginalen Lavage und Fortpflanzungstraktes Gewebe zu sammeln. Dieses Mausmodell wird das Verständnis des GBS-Wirt-Interaktion in der vaginalen Umgebung fördern, die potentielle therapeutische Targets führen mütterliche vaginale Besiedlung während der Schwangerschaft zu kontrollieren und Übertragung an den gefährdeten Neugeborenen zu verhindern. Es wird auch von Interesse sein, zu unserem Verständnis der allgemeinen Bakterien-Wirt-Interaktionen in der weiblichen vaginalen Trakt erhöhen.

Einleitung

Streptococcus agalactiae, Streptococcus Gruppe B (GBS), ist eine gekapselte, Gram-positives Bakterium , das häufig aus dem Darm und Urogenitaltrakt von gesunden Erwachsenen isoliert. In den 1970er Jahren entstand GBS als führende Mittel von Infektionsneugeborenensterblichkeit, mit mehr als 7.000 Fälle von Neugeborenen Krankheit jährlich ^1. Frühem Beginn GBS Krankheit (EOD) tritt in den ersten Stunden oder Tage des Lebens, stellt sich eine Lungenentzündung oder Atemnot, und entwickelt sich oft in Sepsis, während late-onset-Krankheit (LOD) erfolgt nach mehreren Monaten und präsentiert mit Bakteriämie, die häufig Fortschritte ² bi....

Protokoll

Alle Tier Arbeit wurde durch das Amt für Lab Animal Care in San Diego State University und führte unter anerkannten Veterinär Standards zugelassen. Weibliche Mäuse, Alter 8 bis 16 Wochen wurden für die Entwicklung dieser Methode verwendet.

1. Herstellung und intraperitoneale Injektion von β-Östradiol

1. Messen Sie β-Estradiol (0,5 mg / Maus) auf dem Papier wiegen, während geeignete persönliche Schutzausrüstung tragen (PPE). ACHTUNG: β-Östradiol durch die Haut und der Schleimhäute absorbiert werden.
2. Übertragen β-Estradiol in ein 15-ml konischen Röhrchen und Wirbel, bis alle Klumpen entfernt und das β-Estradiol ist ein feines ....

Ergebnisse

Bei der Entwicklung dieses Modells wurden mehrere Beobachtungen in Bezug auf Faktoren, welche die Dauer von GBS vaginale Besiedlung beeinflussen. Um zu bestimmen, wie estrous Stufe bei der Impfung Auswirkungen GBS bakterielle Persistenz, Mäuse wurden am Tag der Impfung über vaginalen Lavage in Szene gesetzt. Abbildung 1 zeigt die vier Stufen der Maus Östrocyclus, bestimmt durch nass-Mount vaginalen Lavage, ein gut etabliertes Verfahren ^29. Mäuse wurden in Grup.......

Diskussion

Um die Förderung des Verständnisses von GBS Wechselwirkungen mit der sowohl dem Host und andere Mikroben im Rahmen des Host Ferner ist ein Tiermodell erforderlich. Diese Arbeit beschreibt die technischen Aspekte bei Mäusen GBS vaginale Besiedlung zu etablieren. Dieses Protokoll erreicht> 90% Kolonisierung von Mäusen ohne die Verwendung von Anästhetika Bakterien zu beimpfen, oder Abstrichproben, immununterdrück zu sammeln Kolonisierung, vaginal Vorwaschen zu aktivieren, oder Zusätze, um die Impfkultur zu verdicken. Da.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Sesamöl	Sigma Aldrich	S3547-250ML
β-Östradiol	Sigma Aldrich	E8875-1G	ACHTUNG: Tragen Sie geeignete PSA. β-Östradiol kann über die Haut und die Schleimhautoberflächen aufgenommen werden.
200 μ l Pipettenspitzen zum Laden von Gelen	USA Scientific	1252-0610
Urethro-genitale, sterile Calciumalginat-Tupfer	Puritan	25-801 A 50
CHROMagar StrepB	DRG International	SB282
Todd Hewitt Bouillon	Hardy Diagnostics	7161C
18 G, 1,5-Zoll-Nadeln	BD	305199
26 G, 0,5-Zoll-Nadeln	BD	305111
10 ml Spritzen	BD	309604
1 ml Spritzen	BD	309659
0,45 μ m PVDF-Spritzenvorsatzfilter	Whatman	6900-2504
Dulbecco's Phosphatgepufferte Salzlösung 1x	Corning	21-031-CV