Entwicklung eines Direkt Pulp-Kappungsmodell für die Beurteilung von Pulpal Wundheilung und Reparative Dentinbildung bei Mäusen

Summary

Wir beschreiben eine Schritt- für -Schritt - Methode der direkten Pulpe an Mäusen Zähne für die Bewertung der Pulpa Wundheilung und reparative Dentin Bildung in vivo Capping durchgeführt wird .

Abstract

Zahnpulpa ist ein lebenswichtiges Organ eines Zahnes, das vollständig durch Zahnschmelz und Dentin geschützt ist. Wenn die Pulpa aufgrund von kariogenen oder iatrogenen Verletzungen freigelegt wird, wird sie oft mit biokompatiblen Materialien bedeckt, um die Heilung der pulpalen Wunde zu beschleunigen. Das ultimative Ziel ist die Regeneration des reparativen Dentins, einer physikalischen Barriere, die als "biologisches Siegel" fungiert und das darunter liegende Pulpagewebe schützt. Obwohl dieses direkte Pulpa-Capping-Verfahren in der Zahnmedizin schon lange eingesetzt wird, ist der zugrundeliegende molekulare Mechanismus der pulpalen Wundheilung und der reparativen Dentinbildung noch wenig verstanden. Um reparatives Dentin zu induzieren, wurde die Pulpaabdeckung experimentell bei großen Tieren durchgeführt, bei Mäusen jedoch weniger, vermutlich aufgrund ihrer geringen Größe und der daraus resultierenden technischen Schwierigkeiten. Hier stellen wir eine detaillierte Schritt-für-Schritt-Methode zur Durchführung eines Pulpa-Capping-Verfahrens bei Mäusen vor, einschließlich der Präparation einer Klasse-I-ähnlichen Kavität, des Platzierens von Pulpa-Capping-Materialien und des Restaurationsverfahrens mit Zahnkomposit. Unser Pulpa-Capping-Mausmodell wird maßgeblich dazu beitragen, die grundlegenden molekularen Mechanismen der pulpalen Wundheilung im Zusammenhang mit reparativem Dentin in vivo zu untersuchen, indem es den Einsatz von transgenen oder Knockout-Mäusen ermöglicht, die in der Forschungsgemeinschaft weit verbreitet sind.

Introduction

Zahnkaries ist eine der häufigsten Munderkrankungen und bei fast allen Personen die Hauptursache für chirurgische Eingriffe in das Gebiss^1,2. Die Prognose von chirurgischen Eingriffen und Restaurationen eines Zahnes hängt weitgehend von der richtigen Reaktion der Pulpa und einer erfolgreichen Wundheilung ab. In der Tat führt Karies, die tief in den Zahnschmelz und das Dentin eindringt, häufig zur Freilegung des darunter liegenden Pulpagewebes, das oft mit Dentalmaterialien wie Calciumhydroxid (Ca(OH)₂) oder hydraulischen Calciumsilikatzementen (HCSCs), einschließlich mineralischer Trioxid-Aggregate (MTA), "bedeckt" ist. Das ultimative Ziel eines ....

Protocol

Die Mäuse wurden von Jackson Laboratory erworben und in einem keimfreien Vivarium in der UCLA Abteilung für Labortiermedizin (DLAM). Die Experimente wurden aus dem Kanzler Animal Research Committee (ARC # 2016-037) nach den anerkannten Richtlinien des Instituts durchgeführt.

1. Maus Betäubung

1. Verwenden Sie acht Wochen alten weiblichen C57 / BL6-Mäusen (n = 3).
2. Anästhesieren die Mäuse unter Verwendung von Ketamin (80-120 mg / kg Mausgewicht) / Xylazin (5 mg / kg Mausgewicht) Lösungen und administrieren intraperitoneal (ip) in einer Dosis von 10 ml / kg.
3. Bereiten Ketamin (80 - 120 mg / kg) / Xylazin (5 mg / kg) Lösungen und verwal....

Results

Hier haben wir gezeigt, die Schritt-für-Schritt-Verfahren Zellstoff zur Durchführung an Mäusen Zähne Capping. Einer der wichtigsten Aspekte der Zellstoff bei Mäusen Capping ist die entsprechende Vorrichtung haben. In dieser Hinsicht mit einem 10fach-facher Vergrößerung des Mikroskops ist von wesentlicher Bedeutung (Abbildung 1A). Um eine Klasse-I-like Vorbereitung in den Zahn zu erstellen, verwendeten wir eine ¼-Runde Grat in einem elektrischen Hochgeschwindigkeitshandst.......

Discussion

Derzeit gibt es mehrere verschiedene experimentelle Modelle zur Verfügung , um die in vivo - Effekte von Dentalmaterialien, Gerüste oder Wachstumsfaktoren auf odontogene Differenzierung von Zahnpulpa Stammzellen (DPSCs) ¹³ zu validieren. Diese Modelle sind mit ektopischen autologe Transplantation von DPSCs in ein Organ, wie die Nierenkapsel oder subkutane Transplantation von DPSCs in immunsupprimierten Mäusen mit Gerüsten ^14,15. Jedoch sind diese Verfahren begrenzt, daß ihre Wirkung auf od.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
BM-LED Stereomikroskop	MEIJI Techno		Mikroskop
Optima MCX-LED	Bien Air Dental	1700588-001	Elektromotor
Isofluran	Henry schein animal health	NDC 11695-0500-2
1/4 round bur	Brasseler	001092T0
Endodontic K-file	Roydent	98947
ProRoot MTA	Dentsply	PROROOT5W	MTA
Paper point	Henry schein	100-3941
Ultra-Etch	Ultradent Produkt Inc.		Phosphorsäureätzmittel
OptiBond SoloPlus	Kerr	29669	Klebstoffe
Coltolux LED	Coltene/whaledent Inc.	C7970100115	Härtungslampeneinheit
Charakterisierung Tönung	Bisco	T-14012	Fließfähiges Komposit
Skyscan	Breuker	1275	uCT Scanner
Microm	Thermo	HM355S	Mikrotom
Hämatoxylin-1	Thermo Scientific	7221
Eosin-Y	Thermo Scientific	7111
Cytoseal 60	Thermo Scientific	8310-16	Eindecklösung