Methodenartikel
* These authors contributed equally
Die Live-Zell-Bildgebung der markierten Blutzellen im Augenkreis kann Informationen über Entzündungen und Ischämie bei diabetischer Retinopathie und altersbedingter Makuladegeneration liefern. Ein Protokoll zur Etikettierung von Blutzellen und Bild der markierten Zellen in der Netzhautzirkulation ist beschrieben.
Die retinale und choroidale Blutflussdynamik kann einen Einblick in die Pathophysiologie und Folgeerscheinungen verschiedener Augenkrankheiten wie Glaukom, diabetische Retinopathie, altersbedingte Makuladegeneration (AMD) und andere okuläre Entzündungszustände geben. Es kann auch helfen, die therapeutischen Reaktionen im Auge zu überwachen. Die korrekte Markierung der Blutzellen, gepaart mit der lebenden Zellenabbildung der markierten Zellen, ermöglicht die Untersuchung der Strömungsdynamik im Netzhaut- und Aderhautkreislauf. Hier beschreiben wir die standardisierten Protokolle von 1,5% Indocyaningrün (ICG) und 1% Natriumfluorescein-Markierung von Mäusen-Erythrozyten bzw. Leukozyten. Die Scanning-Laser-Ophthalmoskopie (SLO) wurde angewendet, um die markierten Zellen in der Retinalzirkulation von C57BL / 6J-Mäusen (Wildtyp) zu visualisieren. Beide Methoden zeigten deutliche fluoreszenzmarkierte Zellen in der Maus-Retinalzirkulation. Diese Etikettierungsmethoden können breitere Anwendungen bei verschiedenen Augenerkrankungen habenModelle.
Das Studium der Strömungsdynamik der Blutzellen im Netzhaut- und Aderhautkreislauf ist für das Verständnis der Pathogenese potenziell visionsbedrohender Augenkrankheiten und anderer okulärer entzündlicher Zustände unerlässlich. Die herkömmlichen Angiographietechniken, die die Bindung von Fluoreszenzfarbstoffen an Plasmaproteine beinhalten, liefern jedoch keine Information über die Dynamik der Erythrozyten oder Leukozyten 1 . Die Erythrozyten-Retinalströmungsdynamik ist wichtig für das Studium der metabolisch wirksamen Zirkulation in der Netzhaut und die Leukozytenströmungsdynamik zum Verständnis der Zellmigration, der Erkennung, der Adhäsion....
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Die Tierprotokolle, die in dieser Studie verwendet wurden, wurden vom Institutional Animal Care and Use Committee von SingHealth, Singapur, genehmigt und entsprechen den Richtlinien der Vereinigung für Forschung in der Vision und Ophthalmologie (ARVO) Erklärung zur Verwendung von Tieren in Ophthalmologie und Vision Forschung.
1. Markierung von Erythrozyten und Leukozyten mit Fluoreszenzfarbstoffen
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Erythrozyten, markiert mit 1,5% ICG, wurden in der Netzhautzirkulation von C57BL / 6J-Mäusen (Wildtyp) sichtbar gemacht. Sowohl 1% als auch 5% Hämatokrit von 1,5% ICG-markierten Erythrozyten waren im Retinalkreislauf zu unterscheiden. Allerdings wurden die einzelnen markierten Zellen mit 1% Hämatokrit von 1,5% ICG-markierten Erythrozyten deutlicher sichtbar gemacht ( Abbildung 1 ). In 5% Hämatokrit war es aufgrund der großen Anzahl markierter Zellen in den N.......
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Das Studium der Hämodynamik im Netzhaut- und Aderhautkreislauf ist für das Verständnis der Pathophysiologie vieler Augenerkrankungen unerlässlich. Die Blutflussdynamik in der Netzhautzirkulation kann durch Fourier-Domänen-optische Kohärenztomographie (FD-OCT), Laser-Speckle-Flowgraphie (LSFG) und Netzhautoximetrie untersucht werden. Obwohl diese Methoden unterschiedliche Ansätze zur Untersuchung des Gesamtblutflusses in der Netzhautzirkulation 40 , 41 ,
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Die Autoren haben nichts zu offenbaren. Kein finanzieller oder interessenkonflikt
Das Forschungsprojekt wurde unter dem New Investigator-Stipendium des National Medical Research Council (NMRC), Singapur, finanziert. Das Team wird gern die von Dr. Agrawal am Institut für Ophthalmologie (IoO), University College London (UCL) unter National Medical Research Council (NMRC) ausländische Forschungsausbildungsstipendien von November 2012 bis Oktober 2014 unter Mentoren von Prof. David Shima Dr. Agrawal erwarb das Konzept und die Fähigkeiten für die Etikettierung der Zellen und die Live-Bildgebung in Dr. Shimas Labor. Das Team wird daher während der Trainingsstiftung von Prof. David Shima, Pro.f Kenith Meissner, Dr. Peter Lundh und Dr. Daiju Iwata, die Be....
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| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Cardiogreen Polymethin Farbstoff (Indocyaningrün) | Sigma Aldrich | 12633-50MG | |
| Fluorescein 100 mg/mL | Novartis | U1705A/H-1330292 | |
| 10x phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS) Ultra Pure Grade | 1st BASE | BUF-2040-10X1L | |
| Rinderserumalbumin | Sigma Aldrich | A7906-100G | |
| Microtainer-Röhrchen mit K2E (K2EDTA) - EDTA-Konzentration - 1,8 mg/mL Blut | BD, USA | REF | |
| Histopaque 1077 Lösung | Sigma Aldrich | 10771 | |
| Zentrifuge 5810 R | Eppendorf | 05-413-401 | |
| Mikrozentrifugenröhrchen 2 mL | Axygen | MCT-200-C-S | |
| Vortex-Mischer | Insta BioAnalytik pte. ltd | FINE VORTEX | |
| Shaker-Inkubator | Lab Tech | ||
| Ceva Ketamin-Injektion (Ketaminhydrochlorid 100 mg/ml) | Ceva | KETALAB03 | |
| ILIUM XYLAZIL-20 (Xylazinhydrochlorid 20 mg/ml) | Troy Laboratories PTY. Limited | LI0605 | |
| 1% Mydriacyl 15 mL (Tropicamid 1%) | Alcon Laboratories, Inc. USA | NDC 0998-0355-15 | |
| 2,5 % Mydfrin 5 mL (Phenylephrinhydrochlorid 2,5 %) | Alcon Laboratories, Inc. USA | NDC 0998-0342-05 | |
| Terumo Spritze mit Nadel 1 cc/mL Tuberculin | Terumo (Philippenes) Corporation, Philippinen | SS-01T2613 | |
| Vidisic Gel 10 g | Dr. Gerhard Mann, Chem.-Pharm, Fabrik Gmbh, Berlin, Deutschland | ||
| Alkoholtupfer | Assure medizinische Einwegartikel | 7M-004-L-01 | |
| Konfokales Laser-Scanning-Angiographie-System (Heidelberg Retina Angiograph 2) | Heidelberg Engineering, GmbH, Heidelberg, Deutschland | ||
| Hiedelberg Spectralis Viewing Module Software, v4.0 | Heidelberg Engineering, GmbH, Heidelberg, Deutschland | ||
| Fluoreszenzmikroskop | ZEISS | Modell: axio imager z1 |
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