Hier stellen wir ein Protokoll für einen mausspezifischen Test der Kognition vor, der kein Schwimmen erfordert. Dieser Test kann verwendet werden, um kontrollierte kortikale Auswirkungen-induzierte traumatische Hirnverletzung Mäuse von Scheinkontrollen erfolgreich zu unterscheiden.
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Methodenartikel
Beurteilung der räumlichen Gedächtnisstörung in einem Mausmodell der traumatischen Gehirnverletzung unter Verwendung eines Radialwasserlaufstreifens
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Trotz der jüngsten Zunahme der Verwendung von Mausmodellen in der wissenschaftlichen Forschung, Forscher weiterhin kognitive Aufgaben, die ursprünglich entworfen und validiert wurden für Ratte verwenden. Der Radial-Wasser-Schritt (RWT) Labyrinth-Test des Raumgedächtnisses (speziell für Mäuse entworfen und kein Schwimmen erforderlich) wurde bisher gezeigt, um erfolgreich zwischen kontrollierten kortikalen Schlag-induzierten TBI-Mäusen und Scheinkontrollen zu unterscheiden. Hier wird ein ausführliches Protokoll für diese Aufgabe vorgestellt. Das RWT-Labyrinth nutzt die natürliche Tendenz von Mäusen, um offene Flächen zugunsten der Umarmung der Seiten eines Apparates (Thigmotaxis) zu vermeiden. Die Wände des Labyrinths sind mit neun Fluchtlöchern versehen, die über dem Boden des Apparates platziert sind, und Mäuse sind ausgebildet, um visuelle Hinweise zu verwenden, um das Fluchtloch zu finden, das aus dem Labyrinth herausführt. Das Labyrinth ist mit einem Zoll kaltes Wasser gefüllt, genug, um die Flucht zu motivieren, aber nicht tief genug, um zu verlangen, dass die Maus schwimmt. Die Erwerbszeit beträgt nur vier SchulungenTage, mit einem Test der Gedächtnisretention am Tag fünf und ein Langzeitgedächtnistest am Tag 12. Die hier gemeldeten Ergebnisse deuten darauf hin, dass das RWT-Labyrinth eine machbare Alternative zu Ratten-validierten, schwimmenden kognitiven Tests bei der Beurteilung von räumlichen ist Speicherdefizite in Mausmodellen von TBI.
Einleitung
Gedächtnisstörungen gehören zu den häufigsten Symptomen, die von Patienten nach traumatischen Hirnverletzungen (TBI) 1 , 2 berichtet wurden . Eine genaue Identifizierung und Bewertung von analogen Speicherdefiziten in Tiermodellen von TBI ist daher für unser Verständnis dieser Bedingung und ihrer Verwaltung unerlässlich. Hier stellen wir ein Protokoll vor, um räumliches Gedächtnis in einem Mausmodell von TBI unter Verwendung eines Radial Water Tread (RWT) Labyrinths zu testen. Dieses Gerät wurde bisher gezeigt, um kognitive Defizite in Mausmodellen von kontrollierten kortikalen Auswirkungen (CCI) -induzierten....
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Protokoll
Alle Verfahren und Tierhandhabung wurden in Übereinstimmung mit den Tierpflege-Richtlinien von den National Institutes of Health und von der University of Washington Animal Care and Use Committee durchgeführt.
1. Chirurgie
- Anästhesieren Sie die Maus bei 5% Isofluran in einer Induktionskiste bis unbewusst. Bestätigen Sie die Anästhesie durch eine Verringerung der Atemfrequenz und das Fehlen eines Rückzugsreflexes nach Zehensperre.
- Pflegen Sie die Anästhesie über Nasenkegel bei 2-2,5% während der Operation. Überwachen Sie die Atemfrequenz während der Operation, um sicherzustellen, dass die Maus unbewusst bleibt.
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Ergebnisse
Das RWT-Labyrinth ( Abbildung 1 ) wurde verwendet, um verletzungsabhängige räumliche Gedächtnisdefizite bei Mäusen zu untersuchen, die zufällig zugeordnet wurden, um entweder kontrollierte kortikale Schlag-induzierte TBI- oder Sham-Chirurgie zu erhalten. Die Verletzung erfolgte mit einem solenoidgetriebenen kortikalen Aufprall mit einer 3 mm konvexen Spitze und den folgenden Verletzungsparametern: 6 m / s Schlaggeschwindigkeit, 1 mm Eindringtiefe und 200 ms .......
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Diskussion
Das hier vorgestellte RWT-Labyrinth-Protokoll unterscheidet erfolgreich zwischen CCI-induzierten TBI-Mäusen und Sham-Kontrollen und stellt eine durchführbare, mauszentrische Alternative zum MWM- und Barnes-Kreis-Labyrinth dar. Während die hier gemeldeten Ergebnisse nur über die Verwendung des RWT-Labyrinths in einem TBI-Mausmodell sprechen, wurde dieses Gerät erfolgreich in alten und transgenen Modellen eingesetzt, bei denen eine stressbedingte Nichteinhaltung durch schwimmende Tests mit dem MWM unpraktisch
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Offenlegungen
Die Autoren haben nichts zu offenbaren.
Danksagungen
Diese Forschung wurde unterstützt durch das Institut für Translational Health Sciences Pilotprojekt Zuschuss Gelegenheit (UL1TR000423), die University of Washington Zentrum für menschliche Entwicklung und Behinderung, und die University of Washington Animal Behavior Core und Brain Imaging Core. Wir möchten Dr. Warren Ladiges für seine Rolle bei der Entwicklung und Verbreitung des ursprünglichen Radial Water Tread Labyrinthdesigns und Protokolls, das hier vorgestellt wird, anerkennen. Wir danken auch Toby Cole für seine Unterstützung bei diesem Projekt.
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| 35 Gal. Feuergetauchte Stahl-Rundwanne | Home Depot | Internet #206638142 | Benötigt: 1 |
| 1-1/2 Zoll ABS DWV SPG x SJ Trap Adapter | Home Depot | Internet #100344703, Store SKU #188956 | Benötigt: 9 |
| 1-3/4 Zoll x 1-7/16 Zoll Schwarzer Gummistopfen | Home Depot | Internet #100114974 Store SKU #755844 | Benötigt: 8 |
| 1-1/2 Zoll. ABS DWV 90 Degree Hub x Hub Elbow | Home Depot | Internet #100346663 Store SKU #188603 | Benötigt: 1 |
| HDX 10 Gal. Storage Tote | Home Depot | Internet #202523587 Store SKU #258804 Store SO SKU #258804 | Benötigt: 1 |
| Impact One Stereotaxic Impactor für CCI | Leica Biosystems | 39463920 | Benötigt: 1 |
| Vernier Stereotaxic mit manuellem Feinantrieb Stereotaxisches Instrument für Kleintiere | Leica Biosystems | 39463001 | Benötigt: 1 |
Referenzen
- Levin, H. Neurobehavioral outcome of closed head injury: Implications for clinical trials. J. Neurotrauma. 12 (4), 601-610 (1995).
- Schretlen, D., Shapiro, A. A quantitative review of the effects of traumatic brain injury on cognitive functio....
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Nachdrucke und Genehmigungen
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