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Methodenartikel

DNA-Nanoröhren als ein vielseitiges Werkzeug, semiflexiblen Polymere zu studieren

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DOI:

10.3791/56056

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25. Oktober 2017

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1Fraunhofer Institute for Cell Therapy and Immunology, 2Institute of Experimental Physics I, Universität Leipzig

* These authors contributed equally

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Semiflexiblen Polymere zeigen einzigartige mechanische Eigenschaften, die ausgiebig von Lebewesen angewendet werden. Systematische Studien über Biopolymere sind jedoch beschränkt, da Eigenschaften wie Polymer Steifigkeit nicht zugänglich sind. Dieses Manuskript wird beschrieben, wie diese Einschränkung durch programmierbare DNA-Nanoröhren, experimentelle Studien über die Auswirkungen der Glühfaden Steifigkeit ermöglicht umgangen wird.

Zusammenfassung

Mechanische Eigenschaften von komplexen, Polymer-basierten weiche Materie, wie Zellen oder Biopolymer Netzwerke können im weder klassische Rahmen von flexiblen Polymeren noch starre Stäbe verstanden werden. Zugrunde liegenden Fäden bleiben ausgestreckten aufgrund ihrer nicht-verschwindende Rückgrat Steifigkeit, die über die Persistenz-Länge (lp) quantifiziert wird, aber sie sind auch starken thermischen Schwankungen unterworfen. Ihre endlicher Biegesteifigkeit führt zu einzigartigen, nicht-triviale kollektive Mechanik lose Netzwerke, ermöglicht die Bildung von stabilen Gerüste bei geringer Lautstärke Fraktionen gleichzeitig große Maschenweiten. Dieses Prinzip ist weit verbreitet in der Natur (z. B. in Zellen oder Gewebe), hohen Gehalt an molekularen und wodurch diffusive oder aktiven Transport zu minimieren. Aufgrund ihrer biologischen Auswirkungen und mögliche technologische Anwendungen in biokompatible Hydrogele wurden semiflexiblen Polymere beträchtliche Studie unterzogen. Nachvollziehbare Untersuchungen blieb jedoch herausfordernd, da sie auf natürlichen Polymeren, z. B. Actinfilamente, gestützt, die nicht frei einstellbaren sind. Trotz dieser Einschränkungen und aufgrund des Fehlens von synthetischen, mechanisch einstellbaren und semiflexiblen Polymere wurden Actinfilamente als gemeinsame Modellsystem etabliert. Eine große Einschränkung ist, dass die zentrale Menge lp frei optimiert werden kann, um ihre Auswirkungen auf die makroskopischen Massen Strukturen zu untersuchen. Diese Einschränkung wurde behoben, durch den Einsatz von strukturell programmierbarer DNA-Nanoröhren, ermöglicht kontrollierte Veränderung der Filament-Steifigkeit. Sie entstehen durch Kachel-basierte Designs, wo eine diskrete Menge von teilweise komplementäre Stränge in eine Ringstruktur mit einem diskreten Umfang hybridisieren. Diese Ringe sind mit klebrige enden, ermöglichen der effektive Polymerisation in Filamente mehreren Mikrometern in der Länge, und ähnliche Polymerisation Kinetik als natürliche Biopolymere anzuzeigen. Diese Rohre sind aufgrund ihrer programmierbaren Mechanik vielseitig, neuartige Instrumente zur Untersuchung der Auswirkungen von lp auf der Einzelmolekül-sowie der Bulk-Skala. Im Gegensatz zu Actinfilamente sie über Wochen ohne nennenswerte Degeneration, stabil bleiben und ihre Handhabung ist vergleichsweise einfach.

Einleitung

Aufgrund der komplexen Verhaltensweisen ermöglicht durch ihre einzigartigen mechanischen Eigenschaften sind semiflexiblen Polymere Grundbausteine der lebenden Materie. Im Gegensatz zu flexiblen Polymeren verabschieden semiflexiblen Polymere eine ausgestreckte Konfiguration aufgrund ihrer nicht-verschwindende Rückgrat Steifigkeit zwar noch immer unter starken thermischen Schwankungen1. Somit können nicht rein stochastische Modelle auf ihr Verhalten, wie bei den extremen voll flexible oder starre Polymere angewendet werden. Das so genannte Endlosschraube-wie Kette Modell2,3,4 wurde entwickelt, um diese Steifheit über die lp, zu quantifizieren, ist die konstante Zerfall der Tangente Tangente Korrelation entlang der Filament-4. Wenn lp die Kontur Länge (lc) des Fadens vergleichbar ist, wird das Polymer semiflexiblen1betrachtet. Analog zu den Polen eines Zeltes, ihre Arrangements in Netzwerken oder Bündel stabilisiert das gesamte kollektive System bei geringer Lautstärke Brüche, führt zu ungewöhnlichen viskoelastischen Eigenschaften5,6,7, 8,9. Diese Strukturen bieten hohe Elastizitäten in großen Größen10, mechanische Integrität während noch diffusive zu erleichtern und aktiven Transportprozesse ineinander greifen. Diese Eigenschaft eignet sich besonders für biologische Systeme wie das Zytoskelett oder die extrazelluläre Matrix, aber es ist auch weit verbreitet in Essen engineering1,11,12.

Ihre Bedeutung für lebende Materie hinausgehen, ist es entscheidend, die physikalischen Eigenschaften dieser Strukturen umfassend zu untersuchen, um die Werkzeuge, um biomimetischer Materialien oder neuartige Hydrogele zu entwickeln. In Bezug auf die semiflexiblen Polymere bedeutet dies die systematische Ermittlung der kollektive Eigenschaften von Netzwerken aus Single-Filament Eigenschaften wie l-p und die Entwicklung eines beschreibenden theoretischen Rahmens. In bahnbrechenden Studien der zellulären Biopolymer-Aktin entstand als Modellsystem für semiflexiblen Polymere und ist immer noch weithin als der Goldstandard5,13,14,15 , 16 , 17. gründlichen Studien sind jedoch mit diesem System beschränkt, da sie die inhärenten Eigenschaften dieses Proteins gebunden sind. Verschiedene theoretische Ansätze zielten auf eine Baubeschreibung der nicht-triviale mechanischen Verhaltensweisen auf der Single-Filament-Ebene und führten zu insbesondere unterschiedliche Skalierung Prognosen für die Abhängigkeit von der linearen elastischen Plateau Schubmodul, G 0 (d. h. die "Elastizität" des Netzes), in Bezug auf die Konzentration (c) und lp6,7,13,14, 15,18,19,20,21,22,23. Während die Konzentration Skalierung leicht zugänglich in Experimenten mit Actin-basierte oder andere Modellsysteme ist und theoretische Vorhersagen rigoros wurden überprüft13,16,24, 25, die Skalierung in Bezug auf lp experimentell unzugänglich geblieben. Dies ist jedoch eine wichtige Einschränkung, da lp auch eine unabhängige Variable ist, die definierende Menge semiflexiblen Polymere.

Diese zentrale, natürliche Limitierung durch die festen lp von Aktin oder andere biologisch abgeleitet Polymere wie Kollagen wurde vor kurzem behoben, durch den Einsatz von Kachel-basierte DNA-Röhren, die einstellbaren in ihren mechanischen Eigenschaften sind 9 , 26 , 27 , 28. geringfügige Abweichungen in den Architekturen der Rohre (z. B. unterschiedliche Anzahl von einzelnen DNA-Stränge innerhalb der Einheit Ring) ergeben unterschiedliche Werte für lp, welches per Fluoreszenz-Mikroskopie ausgewertet werden kann, durch die Analyse einer schwankender Röhre oder durch die Auswertung der gebogenen Konfigurationen von mehreren Rohren eingehalten als zuvor beschriebenen9,28. Diese Analysen ergaben, dass l-p -Werte der verschiedenen Rohr Bevölkerungen über mehr als eine Größenordnung variieren und unterschiedliche Bewertungstechniken konsistente Ergebnisse9,28ergeben.

Überraschenderweise wurde die allgemeine Skalierung des linear elastischen Plateau Shear Modulus G0 in Bezug auf die Konzentration und lp berichtet, dass mit allen bisherigen Theorieansätze inkonsistent 9, insbesondere zeigen eine viel stärker als vorhergesagt Abhängigkeit von lp. Diese Ergebnisse unterstreichen den Wert eines neuen Modell-Systems, die zentralen Eigenschaften von semiflexiblen Polymeren zu studieren. Einsatz von n-Helix DNA Röhren drastisch erweitert den Anwendungsbereich dieser Untersuchungen. Nicht nur lp frei variiert werden ohne das Grundmaterial zu ändern, sondern die inhärente programmierbare Natur der DNA kann die systematische Untersuchung von Zusatzelementen, wie Querverbindungen oder kinetische Schaltvorgänge ermöglichen. Darüber hinaus diese Rohre sind in Wasser löslich und im Gegensatz zu den meisten Proteine stabil in angemessenen pH-Wert und ionischen Bedingungen für mehrere Wochen, ohne erkennbare Verschlechterung9.

Diese Rohre montieren eine diskrete Menge von DNA-Oligonukleotide verwendet wird, von denen jede enthält zwei Domänen, die komplementäre Basensequenzen zu zwei benachbarten Stränge Teilen (aufgrund der spezifischen Reihenfolgen kann kein einzigen Strang Strukturen wie Haarnadeln bilden). Die komplementäre Sequenzen hybridisieren zyklisch, geschlossene, halb-überlappende Ringe der doppelt-schraubenartigen Segmente n miteinander verbunden bilden (Abbildung 1A und B). Diese Ringe bilden bei einem diskreten Durchmesser (Abbildung 1) und deren Hälfte-überlappende Konfiguration stellt axiale klebrige enden, die komplementär zu den klebrigen Enden von einem anderen Ring. Diese selektive Ergänzung passender Oligonukleotide löst eine Stapelung der Ringe, führt zu der effektiven Polymerisation filamentöse DNA Helix Schläuche der Größe n (nHT). Ihre Konturen Längen messen in der Regel einige Mikrometer in der Länge, und ihre Längenverteilung ist vergleichbar mit der von Aktin Filamente9,26,27,28. Es wurde für ähnliche DNA Nanoröhrchen gezeigt, dass sie in der Tat Polymerisation Kinetik ähnlich denen von Aktin-Filamenten und Mikrotubuli aufweisenp Class = "Xref" > 29. Abhängig von der Anzahl n der einzelnen DNA-Stränge, aus denen die grundlegenden Ringstruktur ist die nHT-Architektur sowie seinen Umfang und Durchmesser, kontrollierbar variierbar. Weitere DNA-Stränge, erhöht den Umfang der Ringe/Rohre, und die entsprechende Änderung des architektonischen verschiebt sich die mechanischen Eigenschaften zu höheren l-p -Werte (Abbildung 1), entsprechend eine höhere Steifigkeit. Auf der mesoskopischen Skala, übersetzen diese größeren l-p -Werte weniger gebogen Konformationen aufgrund der höheren Steifigkeit (Abbildung 1 und E).

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Protokoll

1. Vorbereitung der n HTs

Hinweis: hier n bezeichnet die Anzahl der verschiedenen DNA-Einzelstränge beteiligt an der Gründung der Helix Rohre einer bestimmten Größe. Für n = 8, acht verschiedene DNA-Einzelstränge bilden eine Einheit-Ring.

  1. Kauf DNA-Sequenzen (HPLC Reinheitsgrad oder höher) aus einer geeigneten DNA-Synthese-service oder führen qualitativ hochwertige Synthese und Reinigung (beispielhaft in Tabelle 1 angegebenen Sequenzen).
  2. Aufschwemmen lyophilisiert Oligonukleotide in gereinigtem Wasser und folgen Sie den weiteren Wiederfreisetzung Schritte in den entsprechenden Handbüchern von der Firma gegeben. Passen Sie die Menge des Wassers, eine Endkonzentration von 200 µM zu erhalten.
  3. Bestimmen-Konzentrationen der einzelnen DNA-Stränge um zu überprüfen, die vom Verteiler angegebenen Werte (z. B. über UV-Vis-Spektroskopie bei 260 nm) da die genaue Stöchiometrie für den Montageprozess entscheidend ist. Berechnen Sie die Konzentration der Oligonukleotide, unter Berücksichtigung der spezifischen molare Gewicht und vom Aussterben bedroht-Koeffizient für jedes einzelsträngigen DNA-Oligonukleotid.
    Hinweis: Die Werte der Koeffizienten der Auslöschung von Natur aus variieren für die verschiedenen Sequenzen und sind in der Dokumentation von im Handel erworbenen DNA angegeben. Sie können auch nach dem nächster-Nachbar-Modell mit einer Reihe von frei verfügbaren Online-Tools berechnet werden. Zur Einhaltung des linearen Bereichs des Spektrometers überlegen Verdünnen der Probe zur Konzentrationsbestimmung.
  4. Mit einer Mikropipette mischen der DNA-Stränge-alle gleichzeitig Konzentration in einen Container für die Thermocycler (z. B. ein 200 µL PCR-Röhrchen) um die gewünschte n HTs zu bilden (endgültige Pufferbedingungen: 1xTE (10 mM Tris und 1 mM EDTA, pH 8) und 12,5 mM MgCl 2).
    Hinweis: Letzte DNA-n HT Proben bestehen aus n - 1 Stränge, U 1 − U n − 1 und ein T-n-Strang. Die Konzentration pro Strang kann variieren von Sub-mikromolaren von mehr als 10 µM, je nach den Bedürfnissen des Benutzers (z. B. < 1 µm pro Strang für die anschließende Verdünnung Einzelfilamenten beobachten oder höheren Konzentrationen für die Prüfung der dichtes Netz Mechanik).
  5. Hybridisieren n HTs in einem Thermocycler (Denaturierung für 10 min bei 90 ° C, mit einer anschließenden schnellen Rückgang auf 65 ° C; langsame Temperatur von 65 ° C auf 55 ° C, mit komplementäre Basenpaarung in 20 Temperaturstufen des-0,50 K für 30 min sinken jede; und einen schnellen Abfall von 55 ° C bis 20 ° C); siehe Abbildung 2A.
    Hinweis: Die langsame Abnahme Schritte von 65 ° C können verlängert werden, um die durchschnittliche Rohrlänge zu erhöhen; die anschließenden schnellen Rückgang auf 20 ° C ist jedoch entscheidend für die Aggregation von polymerisierten Rohren zu vermeiden.
  6. Speichern der hybridisierten n HTs für bis zu 3 Wochen bei 4 ° C ohne Beeinträchtigung der nachweisbar.
    Hinweis: Für Fluoreszenz Mikroskopie, beschriftet n HTs sind hybridisiert mit der (teilweise) Substitution von U1 mit der modifizierten U1-Cy3 (Tabelle 1). Für längere Beobachtungszeiten empfiehlt sich der Zusatz von etablierten Anti-bleichen.
  7. Sorgfältig die Probe auf die gewünschte Endkonzentration verdünnen (z. B. 4 µM für Netzwerke oder 20 nM für Single-Filament Beobachtungen) mit der Probenpuffer, wenn nötig. Um mögliche Fehlerquellen zu minimieren, montieren Proben auf die gewünschte Endkonzentration.

2. Scher Rheologie

  1. Wählen Sie eine geeignete Geometrie (Platte-Platte oder Kegel-Platte) für die dynamische scher-Rheometer. Für kleine Mengen (d. h. unterhalb 200 µL), verwenden Sie die Kegel / Platte Geometrie.
  2. Laden Sie die Probe auf die dynamische scher-Rheometer.
  3. Passiviert die Luft-Wasser-Grenzfläche der Probe und Umgebung mit den folgenden Schritten um potentielle Verdunstung Auswirkungen zu verhindern.
    1. Die Probe mit 2,5 mL der Probe Puffer Badewanne umgeben.
    2. Fügen Sie ein Tensid knapp unterhalb der Micelle Konzentration.
    3. Verwenden eine Hamilton-Spritze, umgeben von der Probe mit einem Lipid, direkten Kontakt der Probe mit Luft zu vermeiden.
  4. Versiegeln die Probenkammer mit einer Kappe ausgestattet mit nassen Schwämmen und, wenn möglich, mit einem zusätzlichen Wasserbad (nicht in Kontakt mit der Probe) weiter unterdrücken Verdunstung.
  5. Starten Sie die Messung mit dem Rheometer-spezifische Software bei Raumtemperatur; Alternativ führen Sie die Messung bei verschiedenen Temperaturen, wie z. B. 37 ° C (wenn physiologische Bedingungen benötigt werden).
    Hinweis: Kühlung der Probenmaterials ist oft begleitet von der Kondensation von Wasserdampf aus der Umgebungsluft Heizung führt zu verstärkten Verdunstung. Beide Effekte können die Konzentration der Probe, unkontrolliert ändern, sodass alle Messungen in einer Reihe auf einer konstanten Temperatur durchgeführt werden sollten.
  6. Ermöglichen die Probe für 2 h bei Raumtemperatur equilibrate. Die zeitliche Entwicklung kann mit einem Sweep Zeit überwacht werden (eine Daten pro Minute; Stamm γ = 5 %; Frequenz f = 1 Hz).
  7. Messen die mechanischen Eigenschaften mit den gewünschten Test-Protokolle. Beginnen Sie mit einer Reihe von Frequenz-Sweeps (f-fegt) weil sie die Probe intakt lassen und für weitere Messungen.
    Hinweis: Darüber hinaus kurz f-Sweeps sollte vor und nach längeren Messungen durchgeführt werden (wie zum Beispiel lange f-fegt mit einer viel höheren Auflösung) um sicherzustellen, dass die Probe während der vollständigen Messprotokoll unverändert blieb.
    1. Führen eine kurze f-Sweep (z. B. γ = 5 %; f = 0,01 Hz auf 30 Hz; 5 Datenpunkte pro Jahrzehnt).
    2. Führen eine lange f-Sweep (z. B. γ = 5 %; f = 0,001 Hz auf 30 Hz; 21 Datenpunkte pro Jahrzehnt); die Niederfrequenz-Regime kann verzichtet werden, wenn nicht notwendig, Messzeit reduzieren.
    3. Führen Sie eine kurze f-Sweep.
    4. Führen Sie einen γ-Sweep (z. B. f = 1 Hz; γ = 0,0125 % bis 100 %; 20 Datenpunkten pro Jahrzehnt).
      Hinweis: Verwenden der kurzen f - sweep zuerst, wie es in der Regel nicht mit früheren f - fegt, weil Netzwerke in der Regel während γ-Sweep platzen oder trennen Sie die Platten. Verwenden Sie alternativ γ-Rampe (z. B. = 0,025 s -1, t = 60 s); die Rampen in der Regel erfordern jedoch ändern den Motorbetrieb, also nachfolgende kurze f-Sweeps würde verfälscht werden.
  8. Bin und/oder glatt die raw-Daten mit einem "glockenförmig" Kernel.

3. Fluoreszenz-gestützte Analyse der DNA Glühen

  1. vorbereiten 8 Aliquote 12 µL für jede Probe mit 1-4 µM DNA pro Strang, 12,5 mM MgCl 2 in 1 x TE-Puffer und 1 x Nukleinsäure-Gel Fleck von einem 10.000 X DMSO Lager. Machen eine Negativkontrolle mit keine DNA, aber einschließen Nukleinsäure-Gel Fleck.
  2. Übertragen die Aliquote auf einer Echtzeit-PCR-Platte und Dichtung mit Klebefolie (z. B. eine Reaktion der 96-Well-Platte).
    Hinweis: Die hohen Temperaturen in der thermischen Tempern Protokolle verwendet werden Proben verdunsten. So stellen Sie sicher, dass die Brunnen mit Klebefilm Wasser verdampfen und Konzentration erhöht, besonders bei langfristigen Experimente zu verhindern dicht verschlossen sind.
  3. Zentrifugieren der Platte 100 X g für 1 min bei Raumtemperatur, die Gasblasen zu entfernen, wenn die Gasblasen erweitern, der Brunnen können nicht analysiert werden.
  4. Die versiegelte Platte in eine Real-time quantitative PCR-System laden.
  5. Ein Glühen-Programm ausführen. Denaturieren Sie die DNA bei 90 ° C für 10 min. die Temperatur schnell auf 72 ° c Tropfen Dann senken Sie die Temperatur langsam um 0,5 ° C alle 30 Minuten. Nachdem das Signal abgeklungen ist, beschleunigen die Temperaturrampe.
    Hinweis: 72 ° C ist ausreichend über die realen Hybridisierung Temperatur; so wird das Signal über einen breiten Temperaturbereich geeignet für die Bestimmung des notwendigen Temperaturbereichs aufgezeichnet.
  6. Stellen Sie sicher, dass der Deckel der Cycler auf mindestens 100 ° C heizt, die Kondensation der verdampften Probe auf die Klebefolie zu verhindern.
  7. Bei der Montage begeistern die Proben mit einem Argon-Ionen-Laser bei 488 nm und erkennen die Fluoreszenz bei 550 nm bei Verwendung eines Nukleinsäure-Gel Fleckes (o.ä. spektral). Wählen Sie für andere Farbstoffe eine entsprechende Anregung/Emission-Kombination. Messung der Fluoreszenzsignal so oft wie möglich, die insgesamt zu erhöhen mit der integrierten Kamera Signalqualität.
    Hinweis: Hier wurden Messungen alle 9 s.
  8. Wenn voreingestellte schmelzen und Glühen Programme angewendet werden, verwenden Sie die mitgelieferte Software zum Analysieren der Daten. Wenn nicht, subtrahieren den früheren Mittelwert aus dem Mittelwert für jeden Schritt der Temperatur, die relative Änderung des fluoreszierenden Signals zu erhalten.

4. AFM Imaging

  1. Glimmer zu Spalten (z. B. Glimmer " V1 ") von handelsüblichen Klebeband anbringen und abreißen; sollte die oberste Schicht des Glimmers entfernt werden.
  2. Mit einer Mikropipette einzahlen vorgeformte n HT in Mg 2 + mit klappbaren Puffer auf dem frisch gespalten Glimmer und lassen Sie es 10 min. zufrieden geben
  3. Spinnen die Proben in kurzer 3-s-Intervallen bei 2.000 x g auf einen kleinen Tisch-Zentrifuge, die restliche Flüssigkeit zu entfernen. Mehrere n HTs sollte noch an die Glimmer-Oberfläche befestigt werden.
  4. Eine hohe Steifigkeit (z. B. 54 Nm -1) ein Freischwinger-Tipp mit und bestimmen seine Resonanzfrequenz mit der internen AFM-Software.
  5. Aufzeichnung des Höhenprofils mit dem AFM in Luft bei der Erschließung von Modus bei niedrigen Abtastraten (z. B. 1 Zeile/s), vermeiden Beschädigungen und verdrängen die n HTS.

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Ergebnisse

Die Montage der DNA-Nanoröhren über eine Temperaturrampe (Abbildung 2) ist eine sehr zuverlässige Methode, um diese künstlichen semiflexiblen Polymere bilden. Diese Polymere haben vergleichbare Eigenschaften natürlich vorkommenden Pendants, z. B. Actinfilamente, aber bieten ein viel breiter experimentellen Rahmen da ihre mechanischen Eigenschaften kontrollierbar sein können9,27 geändert . Wie Biopolym...

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Diskussion

Um richtig geformte Netze zu erhalten, ist die Montage der DNA-Nanoröhren ein entscheidender Schritt. Fehler während der Syntheseprozess beeinträchtigen die Rohrqualität; Daher wird es empfohlen, HPLC oder ein strenger Prozess verwendet werden, um die Oligonukleotide zu reinigen. Da die Bildung von diskreten anstatt aggregierten DNA-Nanoröhren sowie ihre Längenverteilung der äquimolaren Stöchiometrie der n konstituierende Oligonukleotide innerhalb des Satzes abhängt, ist es notwendig, die Konzentrationen nachzum...

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Offenlegungen

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Danksagungen

Wir anerkennen die Finanzierung durch die DFG (1116/17-1) und der Leipzig School of Natural Sciences "BuildMoNa" (GSC-185). Diese Arbeit wurde durch das Fraunhofer-Attract-Projekt 601 683 unterstützt. T. H. nimmt zur Kenntnis, Mittel aus dem Europäischen Sozialfonds (ESF-100077106).

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
AFM-Cantilever, ACTAAppNano
AFM - NanoWizard 3JPK Instruments
, CCD-KameraAndoriXon DV887
DMSOSigma-AldrichD2650
, Biomers.netFür Sequenzen siehe Tabelle 1
DNA Cy3-markierte OligonukleotideBiomers.netZur Sequenz siehe Tabelle 1
EDTASigma-AldrichE-9884
Epi-FluoreszenzmikroskopLeicaDM-IRB
MgCl2Sigma-AldrichM-8266
Glimmer "V1", 12 mm rundPlano GmbH50-12
MicroAmp® Schnelle optische 96-Well-ReaktionsplatteThermo Fisher Scientific Inc.
MicroAmp® Optische KlebefolieThermo Fisher Scientific Inc.
NanoDrop 1000 SpektralphotometerThermo Fisher Scientific Inc.
100x ObjektivLeica5506168
Gereinigtes WasserMerk Millipore - Milli-Q & Milli-Q & Elix
Saphir PCR RöhrchenGreiner Bio-One683271
TProfessional Standard PCR ThermocyclerCore Life Sciences Inc.070- Standard
7900HT Schnelles Echtzeit-PCR-SystemAngewandte Biosysteme4351405
RheometerTA InstrumentsARES
SYBR® Grüner I-Nukleinsäure-Gel-FarbstoffThermo Fisher Scientific Inc.S7567
TrisSigma-AldrichT4661
Triton X-100Sigma-Aldrich Co.X-100Unterdrückt die Verdunstung der Probe an der Luft-Wasser-Grenzfläche
, , , , , DNA-Oligonukleotide: 43469074306311

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