Optimierte LC-MS/MS-Methode für die Hochdurchsatz-Analyse der klinischen Proben von Ivacaftor, seinen Hauptmetaboliten und Lumacaftor in biologischen Flüssigkeiten von Mukoviszidose-Patienten

Summary

Kombination aus Ivacaftor und Ivacaftor-Lumacaftor sind zwei neue CF-Medikamente. Allerdings gibt es noch ein Mangel an Verständnis über ihre PK/PD und Pharmakologie. Wir präsentieren Ihnen eine optimierte HPLC-MS-Technik für die simultane Analyse von Ivacaftor und seine Hauptmetaboliten und Lumacaftor.

Abstract

Mängel in der Mukoviszidose-Trans-Membran Leitwert Regulator (CFTR) sind die Ursache für Cystische Fibrose (CF), eine Krankheit mit lebensbedrohlichen pulmonale Manifestationen. Ivacaftor (IVA) und Ivacaftor-Lumacaftor (LUMA) Kombination sind zwei neue Durchbruch CF-Medikamente, die direkt die Aktivität und des Handels des defekten CFTR-Proteins modulieren. Allerdings gibt es noch einen Mangel an Verständnis auf Pharmakokinetische/pharmakodynamische Parameter und der Pharmakologie des Ivacaftor und Lumacaftor. Die HPLC-MS-Technik für die gleichzeitige Analyse der Konzentrationen von Ivacaftor, Hydroxymethyl-Ivacaftor, Ivacaftor-Carboxylat und Lumacaftor in biologischen Flüssigkeiten bei Patienten, die Standardkombination Ivacaftor oder Ivacaftor-lumacaftor Therapie wurde bisher von unserer Gruppe entwickelt und teilweise validiert, um FDA-Standards. Jedoch um die Hochdurchsatz-Analyse einer größeren Anzahl von Proben zu ermöglichen, unsere Gruppe wurde optimiert, die gemeldeten Methode durch den Einsatz einer kleineren Poren Größe Reverse-Phase-Chromatographie Spalte (2,6 µm, C8 100 Å; 50 x 2,1 mm) und ein gradient Lösungsmittelsystem ( 0-1 min.: 40 % B; 1-2 min: 40-70 % B; 2-2,7 min: hielt bei 70 % B; 2,7-2,8 min: 70-90 % B; 2,8-4,0 min: 90 % B waschen; 4.0-4,1 min: 90-40 % B; 4,1-6,0 min: hielt bei 40 % B) anstelle einer isokratischen Elution. Ziel dieser Studie war es, HPLC-MS Analyse pro Probe dramatisch von ~ 15 min, nur 6 Minuten pro Probe, verkürzen die für die Analyse einer großen Menge von Patientenproben unerlässlich ist. Diese sinnvolle Methode werden erhebliche Dienstprogramm für Studien in der Exposition-Wirkungs-Beziehungen dieser Durchbruch CF Medikamente.

Introduction

Cystische Fibrose (CF) ist eine gemeinsame genetische Krankheit unter Einbeziehung der exokrinen Schleim Drüsen von Lunge, Leber, Bauchspeicheldrüse und Darm verursacht progressive Multi-Organversagen, wie einen Rückgang der Lungenfunktion und Pankreasinsuffizienz^{1, 2,3}. Ivacaftor (IVA) ist der erste Food and Drug Administration (FDA, USA) und European Medicines Agency (EMA) genehmigt Mukoviszidose Trans-Membran Leitwert Regulator (CFTR) Potentiator Droge, mit nachgewiesenen klinischen Wirksamkeit produziert eine erhebliche Verbesserung der Lungenfunktion gegenüber Placebo i....

Protocol

Genehmigung für Ethik wurde von Monash Universität menschliche Forschung Ethics Committee (MUHREC).

1. Anwendung des Tests: Patient Musterkollektion

1. nehmen Sie die Zeit, wann der Patient ihre standard-Dosis von 150 mg Ivacaftor oder Ivacaftor 125 mg /lumacaftor nimmt, 200 mg.
2. Hinweis unten die genaue Uhrzeit, wann der Patient Blutprobe erfasst.
   Hinweis: Wir empfehlen 4-5 Probenahmen über einen 24 h-Zeit-Verlauf. Wenn die Auflistung nur eine Probe möglich ist, ist der angegebene Zeitpunkt 2,5-4 h Post Ivacaftor oder Ivacaftor-Lumacaftor Kombination Dosierung wie C _max Konzentrationen im Steady-State na....

Results

Eine Methode, teilweise validiert, um FDA-Standards auf einem Triple-Quadrupol-LC-MS und einer HPLC-Detektor-System haben wir vor kurzem berichtet über eine Spalte C8 (5 µm, 3,9 x 50 mm i.d.) mit der mobilen Phase, bestehend aus 100 % ACN und 0,1 % Ameisensäure in Wasser (40: 60 V/V) bei einer Durchflussmenge von 1 mL/min. Eine lineare Korrelation der Gipfel wurde über einen Konzentrationsbereich von 0,01 bis 10 µg/mL im menschlichen Plasma für alle Metaboliten, Ivacaftor, Iva-M1, Iva-M6 und Lumacaftor^1.......

Discussion

Wie bereits berichtet hat unsere Gruppe für das erste Mal entwickelt und validiert eine HPLC und LC-MS Methode zur schnellen Erkennung und Quantifizierung von Ivacaftor und seiner wichtigsten Metaboliten Hydroxymethyl-IVA M1 (aktiv) und IVA-Carboxylat M6 (inaktiv); und Lumacaftor im Plasma und Auswurf von CF Patienten¹⁴. Der Test unserer Gruppe zuvor berichtet wurde erfolgreich eingesetzt, um die Konzentration von LUMA, IVA, IVA-M1 und IVA-M6 im Plasma und Auswurf von CF-Patienten, die eine statio.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
IVA (Kat#S114)	SelleckChem (USA).
LUMA (Kat#S1565)	SelleckChem (USA).
IVA-Carboxylat (Kat# 510242247CS)	Clearsynth (Kanada).
Hydroxymethyl-IVA (Kat# 510240849CS)	Clearsynth (Kanada).
Methanol (MeOH, LC-MS-Qualität),	Sigma-Aldrich
Acetonitril (ACN, LC-MS-Qualität)	Sigma-Aldrich-Ameisensäure
(FA)	Sigma-Aldrich
Triple-Quadrupol Shimadzu 8030 LC-MS
Phenomenex Kinetex (2,6 & Mikro; m C8 100 Å; 50 & mal; 2.1mm)
(KrudKatcher Ultrea HPLC In-Line Filter 0.5 m Tiefenfilter x 0.004inID).
1,5 mL Mikrozentrifugenröhrchen aus Polypropylen (VWR).
Eppendorf Centrifuge 5430
13-mm-Spritzenvorsatzfilter (0,45 &Mikro; m Nylon, GRACE, USA)
[Phenomenex VEREX, 9 mm, PP, 300 & Mikro; L, PTFE/Silikon-Septen].