Methodenartikel
Viele Vision-bedrohlichen okuläre Erkrankungen gehen einher mit dysfunktionalen retinalen mikrogefäßen. Daher ist die Messung der retinalen arteriola Antworten wichtig, die zugrunde liegenden pathophysiologischen Mechanismen zu untersuchen. Dieser Artikel beschreibt ein detailliertes Protokoll für Maus retinalen arteriola Isolation und Vorbereitung zur Bewertung der Auswirkungen von vasoaktive Substanzen auf vaskuläre Durchmesser.
Vaskuläre Insuffizienz und Veränderungen in der normalen retinalen Durchblutung gehören zu den Hauptfaktoren für die Pathogenese der verschiedenen Anblick-bedrohlichen okuläre Erkrankungen wie Diabetische Retinopathie, Hypertensive Retinopathie und Glaukom. Netzhaut mikrovaskuläre Vorbereitungen sind daher entscheidende Instrumente zur physiologischen und pharmakologischen Studien, die zugrunde liegenden pathophysiologischen Mechanismen abzugrenzen und zu Design-Therapien für Krankheiten. Trotz der breiten Verwendung von Mausmodellen in Augenheilkunde sind Studien über die Netzhaut vaskuläre Reaktivität knapp in dieser Spezies. Ein wesentlicher Grund für diese Diskrepanz ist die anspruchsvolle Isolierungsmaßnahmen aufgrund der geringen Größe der diese Netzhautgefäße, die ~ ≤ 30 µm luminalen Durchmesser. Um das Problem der direkten Isolation dieser Netzhaut mikrogefäßen für funktionelle Studien zu umgehen, haben wir eine Isolation und Vorbereitung Technik, die ex-Vivo -Studien der retinalen Vasoactivity Maus in der Nähe von physiologischen Bedingungen ermöglicht . Obwohl die vorliegenden experimentellen Vorbereitungen speziell auf die Maus retinalen Arteriolen beziehen werden, kann diese Methode leicht zu mikrogefäßen von Ratten eingesetzt werden.
Störungen im retinalen Durchblutung haben in der Pathogenese der verschiedenen augenfälligen Krankheiten, z. B. Diabetische Retinopathie und Hypertensive Retinopathie Glaukom1,2,3verwickelt. So Studien zur Messung der vaskulären Reaktivität in der Netzhaut sind wichtig, um die Pathophysiologie dieser Krankheiten zu verstehen und entwickeln neue Behandlung nähert.
Durch die Möglichkeit der Genmanipulation im murinen Genom ist die Maus eine weit verbreitete Tiermodell für Studien des Herz-Kreislauf-System4geworden. Jedoch wege....
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Die experimentellen Verfahren dieser Studie wurden durch die Animal Care Ausschuss des Landes Rheinland-Pfalz, Deutschland genehmigt. Tierbetreuung entsprach der institutionellen Richtlinien and The Association Research in Vision and Ophthalmology (ARVO) Erklärung für den Einsatz von Tieren in der Augenheilkunde und Vision Forschung. Nach der EU-Richtlinie 2010/63/EU für Tierversuche wurden die Tiere behandelt. Männliche C57BL/6J Mäuse (The Jackson Laboratory, Bar Harbour, ME, USA) im Alter von 3 bis 4 Monate waren für die Experimente verwendet. Tiere waren unter Standardbedingungen (Temperatur 23 ± 2 ° C, Luftfeuchtigkeit Bereich 55 ± 10 % und 12 h hell/dunkel-Zyklen....
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U-46619 produziert Konzentration abhängig Vasokonstriktor Antworten in retinalen Arteriolen von Wildtyp Mäusen C57Bl/6J Hintergrund. Bei einer Konzentration von 10-6 M war die Reduktion der luminalen Durchmesser ≈50 % aus ruhenden Durchmesser. Abbildung 9A zeigt eine repräsentative Konzentration-Wirkungs-Kurve von einem retinalen arteriola. In Arteriolen mit U46619 preconstricted evozierte kumulative Gabe von Acetylcholin Konzentration abhängig Erh.......
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Die Messung der vaskulären Antworten in der Maus Netzhaut ist schwierig, aufgrund der geringen Größe der Netzhautgefäße. Mit der vorgestellten Technik sind retinale Arteriolen durch übertragbare Lichtmikroskopie visualisiert. Dies ist möglich, weil die isolierte Netzhaut lichtdurchlässig ist. Der Vorteil des Verfahrens ist die hohe optische Auflösung. Die berechnete räumliche Auflösung beträgt 11 px/µm. Allerdings ist die echte Auflösung für das optische System, das weißes Licht verwendet, zwischen 200 und 300 nm, die du.......
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Die Autoren haben keinen finanziellen Interessenkonflikt.
Diese Arbeit wurde durch Zuschüsse aus dem Ernst Und Berta Grimmke Stiftung und die Deutsche Ophthalmologische Gesellschaft (DOG) unterstützt.
....Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Stahlschere | Carl Roth GmbH | 3576.1 | 1x 140 mm |
| Augenschere | Geuder | G-19390 | 1x gerade, 10,5 cm |
| Präzisionspinzette, gerade mit feinen | Spitzen Carl Roth GmbH | LH68.1 | 2x Typ 4 |
| Präzisionspinzette, gerade mit extra feinen Spitzen | Carl Roth GmbH | LH53.1 | 2x Typ 5 |
| Vannas Kapsulotomieschere | Geuder | 19760 | 1x gerade, 77 mm |
| Student Vannas Federschere | Fine Science Tools | 91501-09 | 1x gebogen, |
| Barraquer Nadelhalter | Geuder | G-17500 | 1x gebogen, 120 mm |
| Nadel | Becton, Dickinson and Company | 305128 | 1x 30 g |
| Glaskapillaren (zur Herstellung von Mikropipetten) | Drummond Scientific Company | 9-000-1211 | 1x (1,2 x 0,8 mm; Außen-/Innendurchmesser) |
| Nylon Nahtmaterial | Alcon | 198001 | 1x 10-0 |
| Nunclon Zellkulturschale | Thermo Fisher Scientific | 153066 | 1x 35 mm Durchmesser |
| Nunclon Zellkulturschale | Thermo Fisher Scientific | 172931 | 1x 100 mm Durchmesser |
| Discofix C | Braun | 16500C | 10 cm |
| Histoacryl selbstklebend | B. Braun Surgical, S.A. | 1050052 | |
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
| Ausrüstung | |||
| Perizyklische Pumpe (CYCLO II) | Carl Roth GmbH | EP76.1 | 1x |
| Vertikaler Pipettenabzieher Modell 700C | David Kopf Instruments | 1x | |
| Mikroskop (Vanox-T AH-2) | Olympus | 1x | |
| Wasserimmersionsobjektiv LUMPlanFL, 1.0 NA | Olympus | 1x | |
| Digitalkamera (TK-C1381) | JVC | 1x | |
| Perfusionskammer | Eigenbau | 1x | |
| Name | <>Unternehmen | Katalognummer< | strong>Kommentare |
| Arzneimittel und Lösungen | |||
| Ethanol | Carl Roth GmbH | K928.4 | |
| Calciumchlorid-Dihydrat (CaCl2) | Carl Roth GmbH | 5239.1 | |
| Kaliumchlorid (KCl) | Carl Roth GmbH | 6781.1 | |
| Kaliumdihydrogenphosphat (KH2PO4) | Carl Roth GmbH | 3904.2 | |
| Magnesiumsulfat (MgSO4) | Carl Roth GmbH | 261.2 | |
| Natriumchlorid (NaCl) | Carl Roth GmbH | 9265.2 | |
| Natriumhydrogencarbonat (NaHCO3) | Carl Roth GmbH | 0965.3 | |
| α-(D)-(+)- Glukosemonohydrat | Carl Roth GmbH | 6780.1 | |
| 9,11-Dideoxy-9α,11α-Methanoepoxyprostaglandin F2α (U-46619) | Cayman Chemical | 16450 | |
| Acetylcholinchlorid | Sigma-Aldrich | A6625-25G |
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