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Methodenartikel

Neue Anwendung ein Atmosphärendruck-Plasma-Jet als eine neuroprotektive Mittel gegen Glukose Deprivation-induzierten Schädigung des SH-SY5Y Zellen

8.4K Aufrufe

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DOI:

10.3791/56323

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9. Oktober 2017

 ,  ,  ,  , 

* These authors contributed equally

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Ein Protokoll für die neuroprotektive Anwendung von niedrig dosierten Atmosphärendruck Plasmabehandlung auf Glukose Entbehrung-induzierte SH-SY5Y Verletzungen.

Zusammenfassung

Der Atmosphärendruck Plasma Jet (APPJ) hat die Aufmerksamkeit vieler Forscher aus verschiedenen Disziplinen in den letzten Jahren angezogen, weil seine Emissionen mehrere Arten von reaktivem Stickstoff-Spezies (RNS) und reaktive Sauerstoffspezies (ROS gehören). Unsere frühere Studie hat die zellschützenden Wirkung des APPJ gegen oxidativen Stress-induzierte Verletzungen gezeigt. Das Ziel der vorliegenden Studie ist es, eine detaillierte in-vitro- Behandlungsprotokoll betreffend die neuroprotektive Anwendungen von Helium APPJs auf Glukose Entzug verursachten Verletzungen in SH-SY5Y Zellen zur Verfügung zu stellen. SH-SY5Y menschlichen Neuroblastoma abgeleitet Zelllinie wurde RPMI 1640 Medium mit 15 % fetalen Kälberserum ergänzt gehalten. Das Kulturmedium änderte dann in RPMI 1640 ohne Glukose vor der APPJ Behandlung. Nach einer 1 h Inkubation in einer Zelle-Inkubator wurde Zellviabilität bestimmt mit Zelle zählen Kit 8. Die Ergebnisse zeigten, dass, ausgestellt im Vergleich zu Glukose Entbehrung Gruppe, Zellen mit APPJ behandelt deutlich erhöhte Zellviabilität in einer Dosis-abhängigen Weise mit 8 s/gut als eine optimale Dosis beobachtet. Unterdessen hatte Helium Flow keinen Einfluss auf die Glukose Entbehrung-induzierte Zelle Beeinträchtigung. Unsere Ergebnisse zeigten, dass APPJ möglicherweise als eine Behandlungsmethode für die Krankheiten in das zentrale Nervensystem im Zusammenhang mit Glukose Entbehrung genutzt werden könnte. Dieses Protokoll könnte auch als zellschützenden Anwendung verwendet werden, für andere Zellen mit unterschiedlichen Beeinträchtigungen, aber die Zellkultur und APPJ Behandlungsbedingungen nachgestellt werden sollte und die Behandlungsdosis relativ niedrig sein.

Einleitung

Die Erwachsene Gehirn verwendet fast ausschließlich Glukose als Substrat für den Energiestoffwechsel unter normalen physiologischen Bedingungen. Das menschliche Gehirn verbraucht ca. 25 % der gesamten Glucose innerhalb der Körper1aber stellt nur 2 % des Körpergewichts. Es ist gut dokumentiert, dass Glukose-Stoffwechsel-Dysfunktion ist eine der wichtigsten pathologischen Änderungen während ischämischen Schlaganfall und verschiedenen neurodegenerativen Erkrankungen wie Alzheimer-Krankheit (AD), Chorea Huntington (HD) und der Parkinson-Krankheit (PD) 2,3. Der Mangel an Glukose und beeinträ....

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Protokoll

1. Vorbereitung des Geräts APPJ

Vorsicht: konsultieren Sie bitte alle relevanten Sicherheitsdatenblätter (SDB) vor dem Gebrauch. Bitte verwenden Sie geeignete Sicherheitsmaßnahmen bei der Durchführung der Experimente, einschließlich der Verwendung einer Dampfhaube und persönliche Schutzausrüstung (Schutzbrille, Schutzhandschuhe, Laborkittel, etc.). Das Protokoll erfordert Standardzelle Umgang mit Techniken (Sterilisation, Zelle Erholung, Zelle Passagierung, Zelle Einfrieren, Zelle Färbung, etc.).

  1. Wählen Sie ein Quarzrohr mit einem Innendurchmesser von 1 mm und ein Außendurchmesser von 3 mm. glatt die Querschnit....

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Ergebnisse

Daten sind als Mittelwert ± SD von mindestens drei unabhängigen Experimenten ausgedrückt. Resultate der Gruppe wurden für Varianz mit ANOVA analysiert. Alle Untersuchungen wurden durchgeführt mit der statistischen Analysesoftware Prisma und p < 0,05 wurde die Schwelle für die statistische Signifikanz.

Zellviabilität wurde nach 4 h der CCK-8 Inkubation gemessen. Wie in Abbildung 3dargestellt, Glukose Entzug reduziert die Lebensfähigkeit der SH-SY5Y Zellen auf 44.......

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Diskussion

SH-SY5Y Zellen sind eine menschliche Neuroblastom abgeleitet Zell-Linie und sind weit verbreitet als entsprechende Zellenmodell für in-vitro- Studien zur Neurotoxizität oder Neuroprotektion12. Die SH-SY5Y-Zell-Linie war empfänglich für Glukose Entbehrung Bedingungen. Zellviabilität sank um fast 50 % nach 1 h Glukose Entzug, das die optimale Zelle Lebensfähigkeit Bedingung für Studien der Pharmakodynamik. Darüber hinaus CCK-8 Reagenz hat keine Zytotoxizität auf Zellen und Zellen inkubiert .......

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Offenlegungen

Keine Interessenkonflikte wurden in Bezug auf dieses Papier erklärt.

Danksagungen

Diese Arbeit wurde durch den Innovationsfonds der neurochirurgischen Beijing Institute (2014-11), der National Natural Science Foundation von China (Nr. 11475019 und 81271286) und Beijing Natural Science Foundation (Nr. 7152027) unterstützt.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
SH-SY5Y ZelllinieChina Center for Type Culture Collection3111C0001CCC000026
RPMI 1640 MediumThermo Scientific21875091gelagert bei 4 &/Grad; C
RPMI 1640 Medium ohne GlukoseThermo Scientific11879020bei 4 & Grad gelagert; C
fötales KälberserumThermo Scientific16000044bei -20 & Grad gelagert; C
tripsin-EDTA-LösungSolarbioT1300gelagert bei 4 > C
96 Wells PlateCorning3599
Cell Counting Kit-8 (CCK-8)Dojindo LaboratoriesCK04gelagert bei 4 &Grad; C
Mikroplatten-ReaderTecanM200 Prozur Messung der Absorption bei 450 nm
Hochspannung LeistungsverstärkerTrekPD06087zur Verstärkung der Leistung
Funktion SignalgeneratorMaZe Electronics Science& TechnologieAT30120für die Bereitstellung des spezifischen Signals
High – SpannungstastkopfTektronixP6015Azur Detektion von Hochspannung
Digitales OszilloskopTektronixDPO4104Bzur Anzeige des Signals

Referenzen

  1. Yang, S. H., et al. Alternative mitochondrial electron transfer for the treatment of neurodegenerative diseases and cancers: Methylene blue connects the dots. Prog. Neurobiol. , (2015).
  2. Bhat, A. H., et al.

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Nachdrucke und Genehmigungen

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