Ein Protokoll für die neuroprotektive Anwendung von niedrig dosierten Atmosphärendruck Plasmabehandlung auf Glukose Entbehrung-induzierte SH-SY5Y Verletzungen.
Ein Abonnement von JoVE ist erforderlich, um diesen Inhalt anzuzeigen. Melden Sie sich an oder beginnen Sie noch heute mit einer kostenlosen Testphase.
Methodenartikel
* These authors contributed equally
Ein Protokoll für die neuroprotektive Anwendung von niedrig dosierten Atmosphärendruck Plasmabehandlung auf Glukose Entbehrung-induzierte SH-SY5Y Verletzungen.
Der Atmosphärendruck Plasma Jet (APPJ) hat die Aufmerksamkeit vieler Forscher aus verschiedenen Disziplinen in den letzten Jahren angezogen, weil seine Emissionen mehrere Arten von reaktivem Stickstoff-Spezies (RNS) und reaktive Sauerstoffspezies (ROS gehören). Unsere frühere Studie hat die zellschützenden Wirkung des APPJ gegen oxidativen Stress-induzierte Verletzungen gezeigt. Das Ziel der vorliegenden Studie ist es, eine detaillierte in-vitro- Behandlungsprotokoll betreffend die neuroprotektive Anwendungen von Helium APPJs auf Glukose Entzug verursachten Verletzungen in SH-SY5Y Zellen zur Verfügung zu stellen. SH-SY5Y menschlichen Neuroblastoma abgeleitet Zelllinie wurde RPMI 1640 Medium mit 15 % fetalen Kälberserum ergänzt gehalten. Das Kulturmedium änderte dann in RPMI 1640 ohne Glukose vor der APPJ Behandlung. Nach einer 1 h Inkubation in einer Zelle-Inkubator wurde Zellviabilität bestimmt mit Zelle zählen Kit 8. Die Ergebnisse zeigten, dass, ausgestellt im Vergleich zu Glukose Entbehrung Gruppe, Zellen mit APPJ behandelt deutlich erhöhte Zellviabilität in einer Dosis-abhängigen Weise mit 8 s/gut als eine optimale Dosis beobachtet. Unterdessen hatte Helium Flow keinen Einfluss auf die Glukose Entbehrung-induzierte Zelle Beeinträchtigung. Unsere Ergebnisse zeigten, dass APPJ möglicherweise als eine Behandlungsmethode für die Krankheiten in das zentrale Nervensystem im Zusammenhang mit Glukose Entbehrung genutzt werden könnte. Dieses Protokoll könnte auch als zellschützenden Anwendung verwendet werden, für andere Zellen mit unterschiedlichen Beeinträchtigungen, aber die Zellkultur und APPJ Behandlungsbedingungen nachgestellt werden sollte und die Behandlungsdosis relativ niedrig sein.
Die Erwachsene Gehirn verwendet fast ausschließlich Glukose als Substrat für den Energiestoffwechsel unter normalen physiologischen Bedingungen. Das menschliche Gehirn verbraucht ca. 25 % der gesamten Glucose innerhalb der Körper1aber stellt nur 2 % des Körpergewichts. Es ist gut dokumentiert, dass Glukose-Stoffwechsel-Dysfunktion ist eine der wichtigsten pathologischen Änderungen während ischämischen Schlaganfall und verschiedenen neurodegenerativen Erkrankungen wie Alzheimer-Krankheit (AD), Chorea Huntington (HD) und der Parkinson-Krankheit (PD) 2,3. Der Mangel an Glukose und beeinträ....
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
1. Vorbereitung des Geräts APPJ
Vorsicht: konsultieren Sie bitte alle relevanten Sicherheitsdatenblätter (SDB) vor dem Gebrauch. Bitte verwenden Sie geeignete Sicherheitsmaßnahmen bei der Durchführung der Experimente, einschließlich der Verwendung einer Dampfhaube und persönliche Schutzausrüstung (Schutzbrille, Schutzhandschuhe, Laborkittel, etc.). Das Protokoll erfordert Standardzelle Umgang mit Techniken (Sterilisation, Zelle Erholung, Zelle Passagierung, Zelle Einfrieren, Zelle Färbung, etc.).
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Daten sind als Mittelwert ± SD von mindestens drei unabhängigen Experimenten ausgedrückt. Resultate der Gruppe wurden für Varianz mit ANOVA analysiert. Alle Untersuchungen wurden durchgeführt mit der statistischen Analysesoftware Prisma und p < 0,05 wurde die Schwelle für die statistische Signifikanz.
Zellviabilität wurde nach 4 h der CCK-8 Inkubation gemessen. Wie in Abbildung 3dargestellt, Glukose Entzug reduziert die Lebensfähigkeit der SH-SY5Y Zellen auf 44.......
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
SH-SY5Y Zellen sind eine menschliche Neuroblastom abgeleitet Zell-Linie und sind weit verbreitet als entsprechende Zellenmodell für in-vitro- Studien zur Neurotoxizität oder Neuroprotektion12. Die SH-SY5Y-Zell-Linie war empfänglich für Glukose Entbehrung Bedingungen. Zellviabilität sank um fast 50 % nach 1 h Glukose Entzug, das die optimale Zelle Lebensfähigkeit Bedingung für Studien der Pharmakodynamik. Darüber hinaus CCK-8 Reagenz hat keine Zytotoxizität auf Zellen und Zellen inkubiert .......
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Keine Interessenkonflikte wurden in Bezug auf dieses Papier erklärt.
Diese Arbeit wurde durch den Innovationsfonds der neurochirurgischen Beijing Institute (2014-11), der National Natural Science Foundation von China (Nr. 11475019 und 81271286) und Beijing Natural Science Foundation (Nr. 7152027) unterstützt.
....Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| SH-SY5Y Zelllinie | China Center for Type Culture Collection | 3111C0001CCC000026 | |
| RPMI 1640 Medium | Thermo Scientific | 21875091 | gelagert bei 4 &/Grad; C |
| RPMI 1640 Medium ohne Glukose | Thermo Scientific | 11879020 | bei 4 & Grad gelagert; C |
| fötales Kälberserum | Thermo Scientific | 16000044 | bei -20 & Grad gelagert; C |
| tripsin-EDTA-Lösung | Solarbio | T1300 | gelagert bei 4 > C |
| 96 Wells Plate | Corning | 3599 | |
| Cell Counting Kit-8 (CCK-8) | Dojindo Laboratories | CK04 | gelagert bei 4 &Grad; C |
| Mikroplatten-Reader | Tecan | M200 Pro | zur Messung der Absorption bei 450 nm |
| Hochspannung Leistungsverstärker | Trek | PD06087 | zur Verstärkung der Leistung |
| Funktion Signalgenerator | MaZe Electronics Science& Technologie | AT30120 | für die Bereitstellung des spezifischen Signals |
| High – Spannungstastkopf | Tektronix | P6015A | zur Detektion von Hochspannung |
| Digitales Oszilloskop | Tektronix | DPO4104B | zur Anzeige des Signals |
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.