Getrocknete Blut und Serum Spots als ein nützliches Werkzeug für die Lagerung der Probe, Cancer Biomarkers zu bewerten

Zusammenfassung

Dieses Protokoll beschreibt eine einfache und nützliche Methode zum Speichern von peripherem Blut und Serum/Plasma für nachgelagerte Analysen wie Einzel-Nukleotid Polymorphie (SNP) Bewertung und ELISA-Assay.

Zusammenfassung

Blut-Sample-Qualität ist entscheidend für genaue nachgeschalteten Analysen wie Real-Time PCR und ELISA zu gewährleisten. Richtige Lagerung von biologischen Materialien ist der Ausgangspunkt, reproduzierbare und zuverlässige Ergebnisse zu erzielen. Alle Proben sollten auf die gleiche Weise von Blutentnahme zur Lagerung behandelt werden. Je nach den Analysen durchgeführt werden sollten Vollblut und Serumproben bis zur Verwendung bei-20 ° C oder-80 ° C gelagert werden. Blut/Serum Proben sollte auch regelmäñig, mehrere Einfrieren Auftauen zu vermeiden. Ein weiteres wichtiges Thema ist die Probe Bedingungen während des Transportes von einem Labor zum anderen. Trockeneis ist nicht verfügbar, oder die Sendung dauert länger als ein paar Tage, sind alternative Ansätze erforderlich. Eine Option ist, Filterpapier für die Blutentnahme zu verwenden. Hier schlagen wir eine Methode für Blut und Serum-Sample-Sammlung, die nutzt getrocknete Blutflecken (DBS) und getrocknete Serum Flecken (DSS). Wir entwickelten das Verfahren, um durch Real-Time PCR DNA von DBS für die nachgelagerten Bewertung der einige Einzel-Nukleotid-Polymorphismen (SNPs) zu extrahieren. Wir haben auch einen ELISA-Test ab Proteine eluiert von DSS optimiert. Diese Methode kann mit anderen ELISA-Assays oder Verfahren, die Bewertung von Proteinen verwendet werden.

Einleitung

Das Hauptziel der Forschung in Krebs-Biomarker ist die Identifizierung neuer biologischer Parameter, die verwendet werden können, für die Diagnose und für Vorhersage Prognose der Patienten, für die Bestimmung, ob ein Patient auf eine bestimmte Behandlung ansprechen wird. Dieses Forschungsgebiet ist von grundlegender Bedeutung für die Entdeckung des innovativen Krebstherapien und spielt eine Schlüsselrolle in maßgeschneiderte Behandlung.

Bei jedem Schritt der Biomarker-Identifizierung und Validierung durchgeführten Verfahren müssen zuverlässig und reproduzierbar sein. Ein Eckpfeiler für den Erfolg der translationalen Forschung ist die korrek....

Protokoll

Peripherem Blut und Serum wurden gesammelt und gespeichert von gesunden Spendern und Patienten, die schriftliche Einwilligungserklärung, an der Studie teilzunehmen gab. Das Studienprotokoll wurde von der lokalen Ethik-Kommission im Einklang mit den ethischen Standards gemäß der Deklaration von Helsinki 1964 genehmigt.

(1) Blut Lagerung im DBS

1. Blut-Musterkollektion
   1. Sammeln Sie 3 mL des peripheren Blutprobe in einer 3 mL-Tube mit 5,4 mg Ethylenediaminetetraacetic Säure (EDTA).
      Hinweis: Bewahren Sie peripherem Blut als DBS so bald wie möglich und innerhalb von 8 h.
   2. Schreiben Sie die Patienten....

Ergebnisse

Wir nutzten die DBS und DSS Verfahren zum Speichern von Blut und Serum bei Raumtemperatur ohne dass die Qualität des biologischen Materials. Abbildung 1 zeigt ein Beispiel für die Protein-Karte-Saver ohne Blut und nach der Blutentnahme. Um zu bestätigen, dass die Speicherung auf Filterpapier und das Verfahren zum Blut eluieren probenqualität nicht beeinträchtigen, haben wir einen Vergleich mit Standardspeicher Methoden durchgeführt. Wir extrahierten DNA aus 3.......

Diskussion

Dieses Protokoll untersucht das Potential für die Lagerung von Blut und Serum auf Filterpapier bei die Übungseinheiten keine Mitarbeiter oder Infrastrukturen benötigt für die korrekte Handhabung von Blutproben haben. Vor allem Vollblut oder Serum gesammelt in standard Röhren oder per Finger-stechen kann mit dieser Methode gespeichert werden und gibt es keine Notwendigkeit, sofort nach der Blutentnahme Proben bei-20 ° C oder-80 ° C eingefroren. DBS/DSS können bei Raumtemperatur bis zu 14 Tage lang ohne jede Änderung im Bl.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Whatman Protein Sparkarten 903 Protein Sparkarte, 100/pk‎	Sigma	Z761575	Nützlich für die Lagerung von Proben bei Raumtemperatur für nachgelagerte Analysen
Falcon Serologische Pipetten, 5 mL	Stammzell	#38003
50-200 & Mikro; L-Spitzen	Star-Lab	S1120-8810
1,5 mL Zentrifugenröhrchen	Eppendorf	4036-3204
QIAamp DNA Microkit	Qiagen	56304	Dies ist ein DNA-Extraktionskit, das für die Isolierung kleiner DNA-Mengen entwickelt wurde.
Puffer ATL (im QIAamp DNA-Mikrokit enthalten)	Qiagen		Dies wird im Text als Lysepuffer 1 gemeldet
Puffer AL (im QIAamp DNA-Mikrokit enthalten)	Qiagen		Dies wird als Lysepuffer 2 im Text
QIAamp Mini-Eluspalten	gemeldet Qiagen		Dies wird als Spalte im Text
AW1  (im QIAamp DNA Microkit enthalten)	Qiagen		Dies wird als Waschpuffer 1 im Text
AW2  (im QIAamp DNA Microkit enthalten)	Qiagen		Dies wird als Waschpuffer 2 im Text
Human Vitamin D BP Quantikine ELISA Kit	R& D Systeme	DVDBP0