Wir präsentieren Ihnen ein Protokoll, um die mRNA Ausdruck Biomarker der Knochenhaut-abgeleitete Zellen (PDCs) durch Vitamin C (Vitamin C) und 1,25-Dihydroxy Vitamin D [1,25-(OH)2D3] induzierte untersuchen. Darüber hinaus bewerten wir die Fähigkeit des PDCs, in Osteozyten, Chondrozyten und Adipozyten differenzieren.
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Methodenartikel
Isolierung von mesenchymalen Stammzellen aus menschlichen alveoläre Periost und Effekte von Vitamin D auf knochenbildenden Aktivität Periost-abgeleitete Zellen
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Mesenchymaler Stammzellen (MSCs) sind in einer Vielzahl von Geweben und in zahlreichen Zelltypen, einschließlich Osteoblasten differenzieren. Unter den dental Quellen von MSCs ist der Knochenhaut eine leicht zugängliche Gewebe, die MSCs im Kambium Layer enthalten identifiziert wurde. Allerdings hat diese Quelle noch nicht umfassend untersucht.
Vitamin D3 und 1,25-(OH)2D3 wurden nachgewiesen in Vitro Differenzierung von MSCs in Osteoblasten stimulieren. Darüber hinaus fördert Vitamin C Kollagen-Bildung und Knochen Zellwachstum. Jedoch ist keine Studie die Wirkung von Vitamin D3 und Vitamin C auf MSCs noch untersucht.
Hier präsentieren wir eine Methode der MSCs aus menschlichen alveoläre Periost zu isolieren und untersuchen die Hypothese, dass 1,25-(OH)2D3 Osteoinduktiv Auswirkungen auf diese Zellen ausüben kann. Wir untersuchen das Vorhandensein von MSCs in der menschlichen alveoläre Knochenhaut und Stammzell-Adhäsion und Verbreitung zu bewerten. Zu beurteilen, die Fähigkeit von Vitamin C (als Kontrolle) und verschiedenen Konzentrationen von 1,25-(OH)2D3 (10−10, 10−910−8und 10−7 M), wichtige mRNA Biomarker in zu ändern isolierte MSCs mRNA Expression der alkalischen Phosphatase (ALP), bone Sialoprotein (BSP), Kern-bindende Faktor Alpha-1 (CBFA1), Kollagen-1 und Osteocalcin (OCN) sind mit Real-Time Polymerase-Kettenreaktion (RT-PCR) gemessen.
Einleitung
Obwohl zahlreiche relevante Techniken in den letzten Jahren entwickelt wurden, Knochen Sie Wiederaufbau bleibt durch mehrere Einschränkungen begrenzt, und schätzen, dass das Ausmaß des notwendigen Wiederaufbaus oft unmöglich ist. Hartgewebe Augmentation ist erforderlich, um ästhetische und funktionelle Ziele zusätzlich eine günstige langfristige Erfolgsquote zu erreichen. Üblichen Methoden für solche Verfahren gehören autologen und allogenen Knochentransplantation, Xenografting und alloplastischer Knochentransplantation. Unter den verschiedenen Arten von Knochentransplantat gelten autogene Knochentransplantate am effektivsten. Jedoch wurden Spender Website Morbidität,....
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Protokoll
Das Studienprotokoll wurde von der institutionellen Review Board der Chang Gung Memorial Hospital genehmigt. Allen Teilnehmern zur Verfügung gestellt schriftliche Einwilligungserklärung.
(1) Gewebe-Vorbereitung
- Ernten Sie die periostalen Gewebe von Patienten während der zahnärztlichen Chirurgie (Abbildung 1). Nehmen Sie nach der Klappe Reflexion unter örtlicher Betäubung ein Stück Knochenhaut Gewebe aus der Alveolarknochen mit einer periostalen Separator-31.
- Nach der Ernte Lagern der periostalen Gewebe Scheiben von ca. 5 mm × 2 mm in Dulbeccos Phosphat gepufferte Koch....
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Ergebnisse
Für alle quantitativen Assays werden die Daten als Mittelwert ± Standardabweichung (SD) dargestellt. Alle statistischen Analysen wurden durchgeführt mit der Student t-test. Insgesamt 34 Proben stammen, wobei das Durchschnittsalter der Teilnehmer von 48,1 ± 12,3 y. elf dieser Proben wurden von männlichen Patienten und 23 von weiblichen Patienten erhalten. Achtundzwanzig Proben stammen aus den Molaren Regionen und sechs aus den vorderen Regionen; 26 wurden von den Oberkiefer und 8 .......
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Diskussion
Eine neu entwickelte therapeutische Modalität, nämlich Gewebetechnik mit MSCs, hat zahlreiche Vorteile. MSCs, die in verschiedenen Gewebetypen vorhanden sind, sind multipotente Zellen, die in einer Vielzahl von Funktionsgewebe mesodermalen Zellen37 differenzieren können und andere Zellen wie Osteoblasten.
Das Periost dient als eine Nische für Vorläuferzellen und als reiche Gefäßsystem Lieferung für die Knochen umhüllt es38. In unserer Studie der .......
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Offenlegungen
Die Autoren haben nichts preisgeben.
Danksagungen
Das Studienprotokoll wurde von Institutional Review Board für klinische Forschung der Chang Gung Memorial Hospital (IRB99-1828B, 100-3019 C 99-3814B, 102-1619 C, 101-4728B und 103-4223 C) zugelassen. Diese Studie wurde unterstützt durch Chang Gung Memorial Hospital (CMRPG392071, CMRPG3A1141, CMRPG3A1142 und NMRPG3C0151). Dieses Manuskript wurde von Wallace wissenschaftliche Bearbeitung bearbeitet.
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| 0,25 % Trypsin-EDTA | Gibco | 25200-056 | |
| 2-Phospho-L-ascorbinsäureTrinatriumsalz | Sigma | 49752 | |
| 35-mm-Kulturschalen | Corning | 430165 | |
| 3-Isobutyl-1-methylxanthin | Sigma | I5879 | |
| 6 Well-Platte | Corning | 3516 | |
| Alkalische Phosphatase | ABI | Hs01029144_m1 | |
| Alkalische Phosphatase-Aktivität Kolorimetrisches Assay-Kit | BioVision | K412-500 | |
| Reverse Transkriptase des Vogelmyeloblastosevirus | Roche | 10109118001 | |
| CD146 | BD | 561013 | |
| CD19 | BD | 560994 | |
| CD34 | BD | 560942 | |
| CD44 | BD | 561858 | |
| CD45 | BD | 561088 | |
| CD73 | BD | 561014 | |
| CD90 | BD | 561974 | |
| Cell banker1 | ZEAOAQ | 11888 | |
| Kernbindungsfaktor alpha-1 | ABI | Hs00231692_m1 | |
| Dexamethason | Sigma | D4902 | |
| DPBS | Gibco | 14190250 | |
| FBS | Gibco | 26140-079 | |
| GAPDH | ABI | Hs99999905_m1 | |
| HLA-DR | BD | ||
| Indomethacin | Sigma | I7378 | |
| Insulin | sigma | 91077C | |
| Insulin– übertragen– Selen-A | Sigma | I1884 | |
| MicroAmp Schnelle 96-Well-Reaktionsplatte (0,1 ml) | Lebensdauer | 4346907 | |
| MicroAmp optischer Klebefilm | Lebensdauer | 4311971 | |
| Minimum Essentielles Medium 1X Alpha Modifikation | HyClone | SH30265,02 | |
| Penicillin/Streptomycin | Gibco | 15140-122 | |
| Permeabilisierungspuffer | eBioscience | 00-8333-56 | |
| Natriumpyruvat | Gibco | 11360070 | |
| STRO-1 | BioLegend | 340103 | |
| SYBER Green PCR Master Mix | AppliedBiosystems | 4309155 | |
| TaqMan Master Mix | Life | 4304437 | |
| transformierender Wachstumsfaktor-β | Sigma | T7039 | |
| Trizol-Reagenz (für die RNA-Isolierung) | Life | 15596018 | |
| β-Glycerophosphat | Sigma | G9422 | |
| Kollagen-1 | Invitrogen | Vorwärtsprimer 5' CCTCAAGGGCTCCAACGAG-3 reverse Primer 5'-TCAATCACTGTCTTGCCCCA-3'OCN | |
| Invitrogen | Forward Primer 5'-GTGCAGCCTTTGTGTCCAAG-3' Reverse Primer 5'-GTCAGCCAACTCGTCACAGT-3'BSP | ||
| Invitrogen | Forward Primer 5' AAAGTGAGAACGGGGAACCT-3' Reverse Primer 5'-GATGCAAAGCCAGAATGGAT-3' | ||
| Commercial ALP Primer | |||
| Commercial CBFA1 Primer |
Referenzen
- Kao, R. T., Murakami, S., Beirne, O. R. The Use of Biologic Mediators and Tissue Engineering in Dentistry. Periodontol. 50, 127-153 (2000).
- Rosenbaum, A. J., Grande, D. A., Dines, J. S. The Use of Mesenchymal Stem Cells in Tissue Engineering: A Global Assessment. Or....
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Nachdrucke und Genehmigungen
