Herstellung von Zunge extrazellulären Matrix und Rekonstitution der Zunge Squamous Zelle Krebsgeschwür In-vitro-

Zusammenfassung

Hier wird eine Methode für die Vorbereitung der Zunge extrazellulären Matrix (TEM) mit effizienten Decellularization angezeigt. Die TEM kann als funktionelle Gerüste für den Wiederaufbau eines Zunge Squamous Zelle Krebsgeschwür (TSCC) Modells unter statischen oder gerührt Kulturbedingungen verwendet werden.

Zusammenfassung

Um eine effektive und realistische Modell für Zunge Plattenepithelkarzinom Karzinom (TSCC) in Vitrozu konstruieren, die Methoden zu produzieren decellularized Zunge extrazelluläre Matrix (TEM) entstanden funktionelle Gerüste für TSCC Bau bietet. TEM bietet eine in-vitro- Nische für Zellwachstum und Differenzierung Zellmigration. Die Mikrostrukturen der native extrazelluläre Matrix (ECM) und biochemische Kompositionen aufbewahrt in der decellularized Matrix bieten gewebespezifischen Nischen für die Verankerung von Zellen. Die Herstellung von TEM kann durch Deoxyribonuclease (DNase) Verdauung begleitet mit einer schweren organischen oder anorganischen Vorbehandlung realisiert werden. Dieses Protokoll ist einfach zu bedienen und sorgt für hohe Effizienz für die Decellularization. Die TEM zeigte günstige Cytocompatibility für TSCC Zellen unter statischen oder gerührt Kulturbedingungen, ermöglicht den Bau des Modells TSCC. Ein self-made-Bioreaktor wurde auch für die anhaltende gerührt Bedingung für die Zellkultur verwendet. Rekonstruierte TSCC mit TEM zeigte die Merkmale und Eigenschaften ähnlich klinische TSCC Histopathologie, was darauf hindeutet das Potenzial in der TSCC Forschung.

Einleitung

Die Zunge hat verschiedene wichtige Funktionen wie Schlucken, Artikulation und Verkostung. Die Beeinträchtigung der Funktion der Zunge hat so großen Einfluss auf Patienten Lebensqualität¹. Die häufigsten malignen Erkrankungen in der Mundhöhle ist Zunge Squamous Zelle Krebsgeschwür (TSCC), die in der Regel tritt bei Menschen, die Alkohol trinken oder Rauchen Tabak².

In den letzten Jahren wurden in der Grundlagenforschung auf TSCC wenig Fortschritte erzielt. Der Mangel an effizienter in-vitro- Forschung Modelle bleibt eines der größten Probleme sein. So entpuppt sich die extrazelluläre ....

Protokoll

Alle tierische Arbeit war gemäss Tierschutzgesetz, institutionellen Richtlinien durchgeführt und durch institutionelle Animal Care and Use Committee, Sun Yat-Sen-Universität genehmigt.

1. Vorbereitung der TEM

1. Ausführen von Mäusen durch zervikale Dislokation und entfernen Sie die Zungen mit sterile chirurgische Scheren und Pinzetten.
2. Tauchen Sie die Zungen in 75 % Ethanol für 3 min, dann setzen jede Zunge in 1,5 mL Eppendorf (EP)-Röhrchen mit 1 mL 10 mM steril Phosphat gepufferte Lösung (PBS).
   Hinweis: Die Konzentration der PBS in den folgenden Schritten ist identisch mit der Konzentration in diesem Schritt.
3. ....

Ergebnisse

Dieses Protokoll für die Vorbereitung der TEM entpuppt sich als effizient und angemessen. Die TEM zeigte perfekte Decellularization im Vergleich mit Muttersprache Gewebe. Hämatoxylin-Eosin (HE) Färbung (Abbildung 1A-B) bestätigte die Wirksamkeit von Decellularization. Die HE-Färbung Ergebnisse ergab völlige Verschwinden der nuklearen Färbung in TEM (Abbildung 1B). Darüber hinaus zeigten DNA Inhal.......

Diskussion

Ein gut etabliertes Protokoll für decellularized ECM-Herstellung sollten die native ECM Zusammensetzung beim Entfernen von zellulären Bestandteilen in Geweben behalten fast komplett²¹. Trotz aktuell gemeldete Decellularization Protokolle erfordern Perfusion durch das Gefäßsystem, zellulare Werkstoffe durch konvektiven Transport entfernen, mechanische Agitation hier, wurde bekannt als eine traditionelle einfache und preiswerte Methode^{22 , 23}

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
C57-BL/6J Mäuse	Sun Yat-sen University Laboratory Animal Center
Ethanol	Guangzhou Chemische Reagenzienfabrik	HB15-GR-2.5L
Natriumchlorid	Sangon Biotech	A501218
Kaliumchlorid	Sangon Biotech	A100395
Dibasisches Natriumphosphat	Guangzhou Chemische Reagenzienfabrik	BE14-GR-500G
Kaliumphosphat monobasisch	Sangon Biotech	A501211
1,5 mL EP-Röhrchen	Axygen	MCT-150-A
Ultratiefkühlschrank	Thermo Fisher Scientific
3,5 cm Zellkulturschale	Thermo Fisher Scientific	153066
6 cm Zellkulturschale	Greiner	628160
Triton X-100	Sigma-Aldrich	V900502
Calciumchlorid	Sigma-Aldrich	746495
Magnesiumchlorid	Sigma-Aldrich	449164
DNase	Sigma-Aldrich	D5025
Magnesiumsulfat	Sangon Biotech	A601988
Glukose	Sigma-Aldrich	158968
Natriumbicarbonat	Sigma-Aldrich	S5761
Ampicillin	Sigma-Aldrich	A9393
Kanamycin	Sigma-Aldrich	PHR1487
Chirurgisches Nahtmaterial	Shanghai Jinhuan
250 mL Weithalsflasche	SHUNIU	1407
Magnetrührer	AS ONE	1-4602-32
CO2 Inkubator	SHEL LAB	SCO5A
10 mL Spritze	Hunan Pingan
50 mL Zentrifugenröhrchen	Greiner	227270
Cal27-Zelle	Chinesische Akademie der Wissenschaften, Shanghai Zellbank		Zungenplattenepithelkarzinom-Zelllinie
U2OS-Zelle	Chinesische Akademie der Wissenschaften, Shanghai Zellbank		Humane Osteosarkom-Zelllinie
DMEM/F12	Sigma-Aldrich	D0547
Natriumpyruvat	Sigma-Aldrich	P5280
Hepes freie Säure	BBI
FBS	Hyclone	SH30084.03
4 ° C Kühlschrank	Haier
Wasserreiniger	ELGA
Hämozytometer	BLAU	717805

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