Co Ausdruck von mehreren Chimären fluoreszierende Fusionsproteinen in effizienter Weise in Pflanzen

Xiaomin Peng; Guitao Zhong; Hao Wang

doi:10.3791/57354

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Methodenartikel

Co Ausdruck von mehreren Chimären fluoreszierende Fusionsproteinen in effizienter Weise in Pflanzen

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DOI:

10.3791/57354

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1. Juli 2018

Xiaomin Peng^*¹ , Guitao Zhong^*¹ , Hao Wang¹

¹College of Life Sciences, South China Agricultural University

^* These authors contributed equally

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Wir entwickelten eine neuartige Methode zur Co mehrere Chimären fluoreszierende Fusionsproteine in Anlagen zur Überwindung der Schwierigkeiten von konventionellen Methoden zum Ausdruck zu bringen. Es nutzt die Vorteile der Verwendung einer einzigen Ausdruck Plasmid, das enthält mehrere funktionell unabhängig Protein mit dem Ausdruck Kassetten um Co Proteinexpression zu erreichen.

Zusammenfassung

Informationen über die raumzeitlichen subzellulären Localization(s) eines Proteins ist entscheidend für seine physiologischen Funktionen in den Zellen zu verstehen. Fluoreszierende Proteine und Generierung von fluoreszierenden Fusionsproteine wurden Wild als ein wirksames Instrument zur Protein-Lokalisierung und Dynamik in den Zellen direkt sichtbar zu machen. Es ist besonders nützlich, um sie mit bekannten Organelle Marker nach Co Ausdruck mit dem Protein des Interesses zu vergleichen. Dennoch klassische Ansätzen für Co Proteinexpression in Pflanzen gewöhnlich mehrere unabhängige Ausdruck Plasmide, und daher haben Nachteile, die geringe Co-Expression Effizienz, Ausdruck-Ebene Variation und höchste Zeit enthalten Ausgaben in genetische Kreuzung und screening. In dieser Studie beschreiben wir eine robuste und neuartige Methode zur Co Ausdruck mehrere Chimären fluoreszierende Proteine in Pflanzen. Es überwindet die Grenzen der herkömmlichen Methoden mithilfe einer einzigen Expressionsvektor, die aus mehreren semi-unabhängige mit dem Ausdruck ihrer Kassetten besteht. Jedes Protein Expressionskassette enthält eine eigene funktionsfähiges Protein-Expression-Elemente, und daher kann flexibel eingestellt werden um diverse Ausdruck Nachfrage gerecht zu werden. Auch, es ist einfach und bequem die Montage durchführen und Manipulation von DNA-Fragmenten in das expressionsplasmid durch den Einsatz einer optimierten einstufigen Reaktion ohne weitere Verdauung und Ligation Schritte. Darüber hinaus ist es kompatibel mit aktuellen fluoreszierenden Proteins abgeleitet Bio-Imaging-Technologien und Anwendungen, z. B. Bund und BiFC. Als eine Validierung der Methode haben wir dieses neue System Co Express eindringmittel verschmolzen vacuolar Sortier-Rezeptor und sekretorischen Träger Membranproteine beschäftigt. Die Ergebnisse zeigen, dass ihre Perspektive subzelluläre Lokalisierungen die gleichen wie in früheren Studien durch transiente Expression und genetische Transformation in Pflanzen sind.

Einleitung

Chimären fluoreszierende Fusionsproteine gelten als nützliche Werkzeuge zur intrazellulären Dynamik und subzelluläre Lokalisation zu studieren und noch besser zu verstehen, ihre physiologischen Funktionen und funktionierende Mechanismen¹^,²^, ³ ^, ⁴. es ist besonders vorteilhaft für Co Express bekannten Organelle Reporter Proteine mit dem Protein in Frage besser zu veranschaulichen, die räumlich-zeitliche Logik, Verteilung und Funktion(en) innerhalb des Endomembrane Systems in Zellen⁴ ^, ⁵