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Methodenartikel

Retroductal Nanopartikel Injektion an der murinen mandibulären Drüse

10K Aufrufe

DOI:

10.3791/57521

3. Mai 2018

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Lokalen Drug-Delivery, die submandibulären Drüsen ist Interesse an Verständnis Speicheldrüse Biologie und für die Entwicklung neuer Therapeutika. Wir präsentieren Ihnen eine aktualisierte und detaillierte Retroductal Injektion Protokoll, entworfen, um Lieferung Genauigkeit und experimentelle Reproduzierbarkeit zu verbessern. Die enthaltenen Anwendung ist die Lieferung von Polymeren Nanopartikel.

Zusammenfassung

Zwei gemeinsame Ziele der Speicheldrüse Therapeutika sind Vorbeugung und Heilung von Gewebe Dysfunktion nach entweder autoimmune oder Strahlung Verletzung. Durch die Bereitstellung von bioaktiver Verbindungen, die lokal auf die Speicheldrüsen, können mehr Gewebe Konzentrationen sicher im Vergleich zu systemischen Verabreichung erreicht werden. Darüber hinaus können Effekte aus extra glanduläre Anhäufung von Material aus Zielgewebe drastisch reduziert werden. In diesem Zusammenhang ist Retroductal Injektion eine weit verbreitete Methode für die Untersuchung von Speicheldrüse Biologie und Pathophysiologie. Retroductal Gabe von Wachstumsfaktoren, Primärzellen, adenovirale Vektoren und niedermolekulare Medikamente hat sich gezeigt, zur Unterstützung der Drüse Funktion in der Umgebung der Verletzung. Wir haben zuvor gezeigt, die Wirksamkeit einer Retroductally eingespritzt Nanopartikel-SiRNA Strategie zur Drüse Funktion nach Bestrahlung aufrecht zu erhalten. Hier ist eine sehr effektive und reproduzierbare Methode Nanomaterialien an der murinen mandibulären Drüse durch Wharton Leitung Verwaltung detailliert (Abbildung 1). Wir beschreiben den Zugriff auf die Mundhöhle und die notwendigen Schritte zur cannulate Wharton gelegt werden, mit weiteren Beobachtungen dienen als Qualitätskontrollen während des Verfahrens zu skizzieren.

Einleitung

Speicheldrüse Dysfunktion hat viele Ursachen, einschließlich Sjögren Syndrom, eine Autoimmun vermittelte Verlust von sekretorischen Funktionsgewebe und Strahlung induzierte endodontischen (RIH), eine gemeinsame Sequella von Kopf und Nacken Krebs Strahlentherapie1. Speichel Funktionsverlust aufgrund entweder Bedingung prädisponiert zu mündlichen und systemische Infektion, Karies, Verdauungs- und schlucken Dysfunktion, Sprachstörungen und schweren Depressionen1,2,3Personen. Infolgedessen leidet der Lebensqualität erheblich, mit Interventionen zur Linderu....

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Protokoll

Alle in-Vivo -Verfahren unten beschriebenen stimmten die Universität vom Tier Ressourcen an der University of Rochester, Rochester, NY.

1. Vorbereitung

  1. Schneiden Sie 32G intrakraniellen Katheter Schlauch mit Draht 3 cm des Schlauches eine abgeschrägte Ende, ca. 45° zur Längsachse zu bilden. Bestätigen Sie, dass der Draht mindestens 1 cm länger als die Röhre.
  2. Laden Sie 50 µL PSMA Nanopartikel Lösung (Abbildung 1), oder einem anderen Injektionsmaterial in eine Hamilton-Spritze. Verringerung der Wahrscheinlichkeit von Barotrauma beim Einspritzen, befestigen Sie den Katheter Schlauch mi....

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Ergebnisse

Retroductal Injektion einsetzbar, NPs auf der murinen SMG (Abbildung 1) zu verwalten. Hier liefern wir 50 µg PSMA NPs mit Texas Red Fluorophore beschriftet.

Die richtige Platzierung der Maus ermöglicht einfachen Zugang und Visualisierung von dem Boden der Mundhöhle (Abbildung 2A-B). Die submandibulären Papillen sind als zwei fleischigen Ausbuchtungen un.......

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Diskussion

Retroductal Injektion ist entscheidend für lokalisierte Drug-Delivery, die Speicheldrüse. Diese Technik findet Anwendung in screening-Therapeutika für Bedingungen einschließlich der Sjögren-Syndrom und RIH9,10,28. Direkte Medikamentenabgabe in der SMG durch Retroductal Injektion bietet einen entscheidenden Vorteil gegenüber systemischen Verabreichung in seinem Potential, Ziel-Effekte, darunter Immunaktivierung1.......

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Offenlegungen

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Danksagungen

Forschung berichtet in dieser Publikation wurde durch das nationale Institut des Dental und Craniofacial Forschung (NIDCR) und das National Cancer Institute (NCI) der National Institutes of Health Award Anzahl R56 DE025098, UG3 DE027695 und F30 CA206296 unterstützt. Der Inhalt ist ausschließlich in der Verantwortung der Autoren und nicht unbedingt die offizielle Meinung der National Institutes of Health. Diese Arbeit wurde auch von der NSF-DMR-1206219 und der IADR-Innovation in Oral Care Award (2016) unterstützt.

Wir möchten Jayne Gavrity Danke für ihre Unterstützung bei der Durchführung von IVIS Experimenten. Wir möchten Danke Karen Bentle....

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
Pilocarpin HydrochloridSigma AldrichP6503Pilocarpin
Student Vannas FederschereFine Science Tools91500-9Federschere für Tracheostomie
Sterile KochsalzlösungMedlineRDI30296HKochsalzlösung
Dumont #7 PinzetteFine Science Tools11274-20Gebogene Pinzette
Dumont #5 PinzetteFine Science Tools11251-10Gerade Pinzette
mit StandardmusterFine Science Tools11000-12Stumpfe Pinzette
Feine Schere - WolframkarbidFine Science Tools14568-09Sezierschere
Mikrohämatokrit Heparinisierte KapillarrohreFisher Scientific22362566Kapillarrohre
Gleitmittel AugensalbeAktualisierenN/AAktualisieren Lacri-Lube
Ziege polyklonales Anti-Nkcc1Santa Cruz BiotechSC-21545Nkcc1 Antikörper
DAPI (4',6-Diamidino-2-phenylindole, Dihydrochlorid)Thermo Fisher ScientificD1306DAPI
GraphPad Prism GraphPadver6.0Statistische Software
Applikator mit WattespitzeMedlineMDS202000Applikator für Augensalbe
0,5cc Insulinspritze, 29G x 1/2"BD7629Spritze für die intraperitoneale Injektion

Referenzen

  1. Miranda-Rius, J., Brunet-Llobet, L., Lahor-Soler, E., Farre, M. Salivary Secretory Disorders, Inducing Drugs, and Clinical Management. International Journal Of Medical Sciences. 12 (10), 811-824 (2015).
  2. Acauan, M. D., Figueiredo, M. A. Z., Cherubini, K., Gomes, A. P. N., Salum, F. G.

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Nachdrucke und Genehmigungen

Tags

Retroduktale InjektionKan lierung des Wharton GangsNanopartikel bertragungMausmodellSpeicheldr sentherapieDuktuspunktionIn vivo BildgebungFluoreszenzbildgebungDurchflusszytometrie