Hier präsentiert sich ein Protokoll zum Eingang des bakteriellen abgeleitete Verbindungen nach Darmbarriere Verletzung zu imitieren. Eine niedrige subletale Dosis von Lipopolysaccharid injiziert wurde systemisch in Mäuse, die 24 h nach der Injektion beobachtet wurden. Der Ausdruck von Pro-inflammatorischen Zytokinen wurde zu verschiedenen Zeitpunkten in Milz, Leber und Darm bestimmt.
Ein Abonnement von JoVE ist erforderlich, um diesen Inhalt anzuzeigen. Melden Sie sich an oder beginnen Sie noch heute mit einer kostenlosen Testphase.
Methodenartikel
Injektionen von Lipopolysaccharid in Mäuse, Eingang des mikrobiellen gewonnenen Erzeugnisse nach Darmbarriere Verletzung zu imitieren
In diesem Artikel
Erratum-Hinweis
Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Die intestinale epitheliale Barriere trennt den Host von der Mikrobiota, die normalerweise toleriert oder ignoriert wird. Der Verstoß gegen diese Barriere führt im Eingangsbereich der Bakterien oder Bakterien gewonnenen Erzeugnisse in die Host-Zugriff auf die Host-Zirkulation und inneren Organe führt zu einer unkontrollierten Entzündung wie bei Patienten mit chronisch entzündlichen Darmerkrankungen (IBD) beobachtet, die zeichnen sich durch eine erhöhte intestinale epitheliale Durchlässigkeit.
Um den Eingang des bakteriellen abgeleitete Verbindungen in die Host-zu imitieren, ein endotoxämie Modell in welcher Lipopolysaccharid (LPS), eine Komponente der äußeren Zellwand von gramnegativen Bakterien übernommen wurde, wurden in Mäuse injiziert. In dieser Studie eine subletale Dosis von LPS intraperitoneal injiziert wurde und die Mäuse wurden anschließend für 8 h über eine Krankheit Punktzahl überwacht. Darüber hinaus der Ausdruck, den Ebenen von inflammatorischen Zytokinen Il6, Il1b, und Tnfa qPCR zu unterschiedlichen Zeitpunkten in der Milz, Leber und Darm analysiert wurden Posten LPS Injektion. Dieses Modell könnte für die Studien, die Untersuchung der Immunantwort nach der Invasion von Mikroorganismen oder Bakterien stammenden Produkte verursacht durch eine Barriere Verletzung von Körperoberfläche nützlich sein.
Einleitung
Der menschliche Darm ist mit ein großes Konsortium von Mikroorganismen besiedelt, die die Mikrobiota bildet, die eine für beide Seiten vorteilhafte Beziehung mit dem Host während der Evolution entwickelt hat. In dieser Beziehung stellt der Host eine sichere Nische für die Mikrobiota, während die Mikrobiota liefert Vitamine, Nährstoffe Verdauung und Schutz vor Krankheitserregern, Host, wo die Mikrobiota1befindet. Wenn diese vorteilhafte Beziehung zwischen dem Host und dem Mikrobiota gestört ist, können Krankheiten entstehen, wie chronisch entzündliche Darmerkrankungen (IBD). IBD ist eine multifaktorielle chronisch-entzündliche Erkrankung des Dar....
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Protokoll
Mäuse wurden gezüchtet und gehalten unter spezifischen Pathogen-freies (SPF) in der Tierstation Abteilung Biomedizin, Universität Basel (Basel, Schweiz). Alle Maus-Experimente wurden in Übereinstimmung mit den Eidgenössischen und kantonalen Vorschriften (tierische Protokollnummer 2816 [Kanton Basel-Stadt]) durchgeführt.
1. Vorbereitung des LPS-Lösung
- Öffnen Sie den Bestand an LPS von Escherichia coli 0111:B4 unter sterilen Bedingungen gereinigt und rekonstruieren Sie es in Wasser, um die Konzentration von 5 mg/mL.
- Verdünnen Sie die LPS-Aktie mit sterilen Phosphat gepufferte Kochsalzlösung (PBS) zur Arbeit Konzen....
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Ergebnisse
Um die Folgen für den Host nach dem Eintritt von Bakterien oder bakterielle abgeleitete Produkte zu imitieren, die nach Darmbarriere Verletzung auftritt, LPS in C57Bl/6 Mäusen in subletalen Dosen (2 µg/g Körpergewicht) injiziert wurde. Jeder Mausklick wurde überwacht und erzielte für das Auftreten von endotoxämie mit Parametern im Notenblatt, das enthält, das Erscheinungsbild der Mäuse, die Aktivität der Tiere, den Zustand der Augen, die Atemfrequenz und die Qualität (Tabelle 1
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Diskussion
Dieses Protokoll imitiert immunologische Prozesse, die nach der Invasion durch mikrobielle gewonnenen Erzeugnissen auftreten. Wichtige Schritte im Rahmen des Protokolls sind die Auswahl der mauslinie, den Hygienestatus der Mäuse, die Dosis von LPS, die Überwachung der Tiere für das Auftreten von endotoxämie und der Zeitpunkt der Beendigung des Experiments. Am wichtigsten ist, ist der genetische Hintergrund der Maus Belastung zu berücksichtigen. Verschiedene Mausstämme haben unterschiedliche Anfälligkeit für LPS. Beispiel.......
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Offenlegungen
Die Autoren haben nichts preisgeben.
Danksagungen
JHN wird durch den Schweizerischen Nationalfonds (SNF 310030_146290) unterstützt.
....Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| DreamTaq Green PCR Master Mix (2x) | Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA | K1081 | |
| cDNA-Reverse-Transkriptionskit mit hoher Kapazität, | Applied Biosystems, Foster City, CA, USA | 4368813 | |
| RNase-freies DNase-Set, | Qiagen, Hilden, Deutschland | 79254 | |
| LPS Escherichia coli O111:B4 | Invivogen, San Diego, CA, USA. | tlrl-eblps | |
| Omnican 50 Einweg-Insulinspritze | B. Braun Melsungen, Melsungen, Deutschland | 9151125 | |
| Bioanalyzer 2100 | Agilent Technologie, Santa Clara, USA | nicht zutreffend | |
| Zentrifuge 5430 | Eppendorf, Hamburg, Deutschland | nicht zutreffend | |
| Zentrifuge Mikro 220R | Hettich, Kirchlengern, Deutschland | nicht zutreffend | |
| Präparierwerkzeuge | Aesculap, Tuttlingen, Deutschland | nicht zutreffend | |
| Fast-Prep-24 5G Probenvorbereitungssystem | M.P. Biomedicals, Santa Ana, CA, USA | nicht zutreffend | |
| NanoDrop ND-1000 | NanoDrop Products, Wilmington, DE, USA | nicht zutreffend | |
| TRI Reagenz | Zymo Research, Irvine, CA, USA | R2050-1 |
Referenzen
- Backhed, F., Ley, R. E., Sonnenburg, J. L., Peterson, D. A., Gordon, J. I. Host-bacterial mutualism in the human intestine. Science. 307, 1915-1920 (2005).
- Abreu, M. T., et al. Mutations in NOD2 are associated with fibrostenosing disease in patients with Crohn's dise....
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Nachdrucke und Genehmigungen
Erratum
Formal Correction: Erratum: Injections of Lipopolysaccharide into Mice to Mimic Entrance of Microbial-derived Products After Intestinal Barrier Breach
Posted by JoVE Editors on 8/04/2018. Citeable Link.
An erratum was issued for: Injections of Lipopolysaccharide into Mice to Mimic Entrance of Microbial-derived Products After Intestinal Barrier Breach
One of the authors' names was corrected from:
Katarina Raduolovic
to:
Katarina Radulovic
