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Methodenartikel

Ein Protokoll der degenerativen Tenocyte von Menschen zu erwerben

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DOI:

10.3791/57634

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9. Juni 2018

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Orthopaedic Surgery, CHA Bundang Medical Center, CHA University School of Medicine, 2Department of Pathology, Kyung Hee University Hospital at Gangdong, Kyung Hee University School of Medicine, 3Department of Physiology, CHA University School of Medicine, 4Department of Rehabilitation, CHA Bundang Medical Center, CHA University School of Medicine

* These authors contributed equally

In diesem Artikel

Zusammenfassung

In-vitro- Verwendung von degenerativen Tenocytes ist wichtig, wenn die Wirksamkeit der neuartigen Behandlung auf sehnenerkrankung untersucht. Jedoch verwenden die meisten Studien nur das Tiermodell oder eine gesunde Tenocyte. Wir schlagen das folgende Protokoll um menschlichen degenerativen Tenocytes während der Operation zu isolieren.

Zusammenfassung

Sehnenerkrankung, eine schmerzhafte Erkrankung, die in Reaktion auf Degeneration der Sehne, entwickelt ist auf dem Vormarsch in der entwickelten Welt aufgrund steigender körperlicher Aktivität und längere Lebenserwartung. Trotz seiner zunehmenden Verbreitung die zugrunde liegende Pathogenese ist noch unklar, und die Behandlung ist in der Regel symptomatisch. Vor kurzem wurden zahlreiche therapeutische Optionen, einschließlich Wachstumsfaktoren, Stammzellen und Gentherapie, untersucht, in der Hoffnung auf Verbesserung der heilenden Potenz der degenerativen Sehne. Die meisten dieser Studien wurden jedoch nur auf Tiermodellen oder gesunde menschliche Tenocytes durchgeführt. Obwohl einige Studien mit pathologischen Tenocytes nach bestem Wissen und gewissen gibt es derzeit kein Protokoll beschreibt, wie menschlichen degenerativen Tenocytes zu erhalten. Das Ziel dieser Studie ist es, ein Standardprotokoll für den Erwerb der menschlichen degenerativen Tenocytes beschreiben. Zunächst war die Sehne Gewebe während der Operation eines Patienten mit seitlichen Epicondylitis geerntet. Dann wurden die Beinstrecker Carpi Radialis Brevis Sehne entsprechend zu strukturellen Veränderungen, die zum Zeitpunkt der Operation beobachtet Biopsie Proben entnommen. Aller dem geernteten sehnen erschien stumpf, grau, brüchig, und ödematös, was sie visuell unterscheidbar von den gesunden machte. Tenocytes wurden kultiviert und für Experimente verwendet. Unterdessen wurden die Hälfte der geernteten Gewebe histologisch untersucht, und es zeigte sich, dass sie die gleichen Hauptmerkmale der sehnenerkrankung (Angiofibroblastic Dysplasie oder Hyperplasie) geteilt. Eine Sekundäranalyse von Immunocytochemistry bestätigt, dass die kultivierten Zellen Tenocytes mit der Mehrheit der Zellen mit positiven Flecken für Mohawk und Tenomodulin Proteine. Die Eigenschaften der degenerativen Natur des Tenocytes wurden dann durch einen Vergleich der Zellen mit dem gesund-Steuerelement mit einer Verbreitung Assay oder qRT-PCR bestimmt. Die degenerativen Tenocyte angezeigt eine höhere Vermehrungsrate und ähnliche Gen Expressionsmuster von sehnenerkrankung, die vorherigen Berichte abgestimmt. Alles in allem könnte dieses neue Protokoll ein nützliches Werkzeug für zukünftige Studien der sehnenerkrankung bieten.

Einleitung

Sehnenerkrankung ist eine chronische, degenerative, Muskel-Skelett-Erkrankung, die in verschiedenen Teilen des Körpers entwickelt. Vor kurzem, ist die Zahl der Fälle von sehnenerkrankung in der entwickelten Welt aufgrund der zunehmenden Teilnahme an Freizeitsport und gestiegene Lebenserwartung1,2stark gestiegen. Die Ursache der sehnenerkrankung gilt als multifaktoriell und diese Ursachen sind Ischämie, Sauerstoff freie Radikale Verletzungen, ein Ungleichgewicht zwischen Vasokonstriktor und gefäßerweiternde innervierungen, internen Mikro-Tränen und Änderungen an Neuro-Verordnung3 ,4,5,6,7,8. Die meisten Behandlungen für sehnenerkrankung nur lindern die Symptome. Darüber hinaus Behandlungen ohne Geweberegeneration erfordern eine lange Zeit für die Rehabilitation und erzielen eine begrenzte Antwort von verletzten sehnen, die eine klinische Herausforderung für Ärzte9aufdrängt.

Die Unfähigkeit der aktuellen Behandlungsmöglichkeiten zusammen mit der mangelnden Fähigkeit der degenerativen Sehne zu heilen hat Blei Forscher, Interesse an der Erforschung alternativer Behandlungsstrategien zu nehmen. Vor kurzem neue Studien berichteten viele vielversprechende Ergebnisse für die Verbesserung der der heilenden Wirkung der sehnenerkrankung Spannglieder mit Wachstumsfaktoren, Stammzellen basierte Therapie und Gen-Therapie10,11,12.

Durch eine Literaturstudie, wir fanden, dass die beteiligten Studien in zwei Kategorien, basierend auf der Analyse von Materialien unterteilt werden können: Tiermodelle wie eine Ratte, eine Maus oder ein Kaninchen; und menschliche Modelle. Im Hinblick auf das Tiermodell, derzeit gibt es zwei beliebte Techniken führen zu generieren: chemische Induktion von Verletzungen oder mechanische Überlastung des Modells. Allerdings war jedes Tiermodell begrenzt, bei der Reproduktion der komplexe menschliche sehnenerkrankung Pathologie13,14.

Die meisten Zeitungen mit humanen Proben wurden histologisch untersucht oder die in-vitro- Experiment basiert auf einer gesunden menschlichen Tenocyte statt einer degenerativen Tenocyte15,16,17,18 , 19 , 20 , 21. nur ein paar Zeitungen berichteten, dass sie einen menschlichen degenerativen Tenocyte verwendet, aber sie nicht im Detail das Protokoll verwendet beschreiben, um die degenerativen Tenocyte aus der menschlichen22,23. In diesem Zusammenhang ist anzumerken, dass erfolgreiche Ergebnisse aus dem Tiermodell oder das gesunde Gewebe/Tenocyte nicht unbedingt voraussagen können, menschliche Wirksamkeit oder wirksame Dosierung weil Sehne Degeneration ein komplizierter Prozess ist und die Pathogenese ist noch nicht vollständig verstanden.

Gemeinsam, ist es notwendig, das standard-Protokoll für den Erhalt der degenerativen Tenocyte aus menschlichem Gewebe ohne Nebenwirkungen für den Spender zu beschreiben. Dieser Artikel beschreibt ein Protokoll darüber, wie die menschlichen degenerativen Tenocyte zu erwerben. Um das Protokoll zu überprüfen, wurden die geernteten Gewebe histologisch untersucht. Dann wurde die kultivierten Zellen als degenerative Tenocyte bestätigt, mit Immunocytochemistry (ICC), eine quantitative Real-Time-Polymerase-Kettenreaktion (qRT-PCR) und eine Rentabilität-Assay.

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Protokoll

Das Protokoll wurde im Einklang mit der Deklaration von Helsinki und das Protokoll von der Institutional Review Board am CHA Bundang Medical Center genehmigt wurde.

1. degenerative Sehne Gewebe Ernte vom Patienten

  1. Laterale Epicondylitis zu diagnostizieren, indem unter eine Anamnese und körperliche Untersuchung Befunde mit: Zärtlichkeit über die Sehnige Ursprung in der Nähe der seitlichen Epicondylus; Schmerzen, hervorgerufen durch widerstanden Erweiterung des Handgelenk.
  2. Verwenden Sie die folgenden Einschlusskriterien: über 18 Jahre alt; eine Geschichte der laterale Epicondylitis für ein Minimum von sechs Monaten; widerspenstigen für nicht-operativen Behandlung; mindestens drei Monate vergangen seit Injektion von Kortikosteroiden, Platelet rich Plasma oder Botulinumtoxin (Botox)
  3. Ausschließen folgender: schwangere Frauen; Patienten mit einer Geschichte der Halswirbelsäule Krankheit, Ellenbogen Arthritis, rheumatologic Krankheit, Operation um Ellenbogen und Nerv Entrapment-Syndrom; Patienten, die sich weigern, Gewebe zu spenden.
  4. OP-Technik
    Hinweis: Siehe Abbildung 1-24.
    1. Legen Sie nach allgemeiner Anästhesie mit Isofluran und endotracheale Intubation den Arm auf den Tisch und wenden Sie eine blutsperre. Dann bewerben Sie Betadine Agent auf den ganzen Arm und drapierung mit einem aseptischen op.
    2. Setzen Sie den seitlichen Ellenbogen durch einen Schnitt von 3 – 5 cm mit Nr. 15 chirurgischen Skalpell Klinge nur Anteromedial an der seitlichen Epicondylus und proximalen auf die Ebene des Gelenks.
    3. Visuell erkennen Sie Beinstrecker Carpi Radialis Longus (ECRL) und Beinstrecker Aponeurose Schnittstelle und machen Sie einen Spaltung Schnitt 2 – 3 mm in der Tiefe zwischen der ECRL und Beinstrecker Aponeurose mit Nr. 15 chirurgischen Skalpellklinge an der identifizierten Schnittstelle.
    4. Extrahieren Sie die ECRL anterior, den pathologischen Beinstrecker Carpi Radialis Longus Brevis (ECRB) Ursprung unten in direkter Sicht bringt.
    5. Identifizieren Sie visuell die pathologische degenerative Gewebe durch seine charakteristische stumpf grau Farbe und in der Regel ödematös und lockeren Gewebe.
    6. Resezieren Sie nach der Identifizierung sorgfältig alle degenerative Gewebe stark mit Nr. 15 chirurgischen Skalpell und Mini-Blades.
    7. Des resezierten Gewebes (ca. 1 cm3) sofort in Phosphat gepufferte Kochsalzlösung (PBS) einbinden und das umliegende Gewebe außer Sehne Gewebe vorsichtig in ca. 10 mL PBS so bald wie möglich zu entfernen.
    8. In Fällen mit knöchernen Überbein an der seitlichen Epicondylus Überbein mit einer Rongeur zu entfernen und mit einer Raspel zu glätten. Machen mehrere Bohrlöcher (Durchmesser 1,6 mm, ca. 6 – 8 Löcher) in den anterolateralen Kondylus Gefäßversorgung zu verbessern. Dies ist optional.
    9. Schließen Sie die Wunde schichtweise mit nicht resorbierbarem Nahtmaterial.
  5. Gesunden tenocyte
    1. Die verbleibenden Sehne der Auto-Muskelfaserriss oder Auto-Patella Sehne während der Rekonstruktion des vorderen Kreuzbandes einzuholen Sie gesunde Tenocytes, und verwenden Sie es als das Steuerelement für die folgenden Experiment25.
      Hinweis: Die Anzahl der in dieser Studie verwendeten Proben waren drei in jeder Gruppe.

2. Histologie

  1. Etwa die Hälfte des geernteten Gewebes in neutral gepufferte 10 % Formalin in einer chemischen Abzugshaube oder ähnlichem aufbewahren.
  2. Einbetten des Gewebes in paraffinblock (4 – 5 mL) und Abschnitt es koronal in 4 – 5 µm Abschnitten.
  3. Führen Sie Abschnitte von Kontrolle und degenerative Sehne mit Hämatoxylin und Eosin Fleck (H & E) und Alcian blau Fleck bei einem pH-Wert von 2,5 zu Flecken. Durchzuführen Sie H & E Färbung in einem automatisierten Fleck-Maschine wie folgt.
    1. Deparaffinize mit Xylol (3-Mal, 5 min, beziehungsweise).
    2. Hydrat von abgestuften Alkohole, Wasser (100 % Alkohol, 4 min. 100 % Alkohol, 3 min; 95 % Alkohol, 2 min, 70 % Alkohol, 1 min; Wasser, 2 min).
    3. In Hämatoxylin 5 min Waschen in Wasser für 2 min gut färben.
    4. Unterscheiden sich in saurem Alkohol von 1 % (1 % HCl in 70 % Alkohol) für 3 s. Waschen gut in Wasser 3 Minuten lang.
    5. Neutralisieren von HCl durch Eintauchen in ein 0,5 % Ammoniak für 10 s, gefolgt von 3 min Wasser waschen.
    6. Für 5 min in Eosion färben.
    7. Austrocknen durch Alkohole (80 % Alkohol, 30 s, 95 % Alkohol, 1 min, 100 % Alkohol 1 min, 100 % Alkohol 2 min).
    8. Klar in Xylol (3-Mal, 2 min, 2 min und 3 min, beziehungsweise).
    9. Mit einer Abdeckung Folie montieren.
  4. Durchführen Sie Immunohistochemitry (IHC) mit dem Bond Polymer verfeinern Detection Kit gemäß den Anweisungen des Herstellers mit geringfügigen Änderungen.
    1. Führen Sie nach 4.wenn mit Xylol ein Antigen Retrieval Verfahren mit Bond Epitop Retrieval Lösung für 30 min bei 100 ° C. Die Anleihe Epitop Retrieval Lösung enthält eine basierte Citrat-Puffer und Tensid (1 L, pH 5,9-6,1).
    2. Endogene Peroxidasen durch das Gewebe mit Wasserstoffperoxid für 5 min Inkubation zu stillen.
    3. Inkubieren Sie die Abschnitte für 15 min bei einer Umgebungstemperatur (21-22 ° C) mit primären Antikörper gegen den vaskulären endothelialen Wachstumsfaktor (VEGF) (1: 200), Tenomodulin (1: 200) oder Mohawk (1: 200).
    4. Durchführen Sie Sekundärantikörper tagging mit einem Biotin-freie Polymeren Meerrettich Peroxidase-Linker Antikörper Konjugat System.
      1. Verwendung sekundäre Kaninchen anti-Maus IgG in 10 % (V/V) tierische Seren in Tris gepufferte saline/0.09% 2-Methyl-4-isothiazolin-3-one Lösung, Maus-Antikörper zu lokalisieren.
      2. Verwenden Sie Anti-Kaninchen Polymer Poly-HRP-IgG (< 25 µg/mL) mit 10 % (V/V) tierische Seren in Tris gepufferte saline/0.09%, Kaninchen-Antikörper zu lokalisieren.
      3. Verwenden Sie 3, 3'-Diaminobenzidine Tetrahydrochloride Hydrat in einer Lösung der Stabilisator, den Komplex über einen braunen Niederschlag zu visualisieren.
      4. Gegenfärbung mit < 0,1 % Hämatoxylin (blau), die Zellkerne zu visualisieren.
  5. Beobachten die Dias befleckt mit H & E, Alcian blaue Flecken und IHC für VEGF, Tenomodulin und Mohawk unter Lichtmikroskop und repräsentative mikroskopische Bilder der einzelnen Folien unter einem Hochleistungs-Feld (400 X) zu erhalten.

(3) Tenocyte Kultur

  1. Gewebe-Vorbereitung
    1. Bereiten Sie die Sehne Probe durch das Entfernen des umliegenden Gewebes mit Mikro-Scheren und Pinzetten gründlich vor.
    2. Mit PBS waschen und in kleine Stücke (etwa 1 mm3 oder weniger) hacken.
    3. Gewebe für 1 h in 30 mL Dulbeccos geändert Eagle Medium (DMEM) ergänzt mit 30 mg/mL Kollagenase II bei 37 ° c zu verdauen
    4. Ein 100 µm-Sieb Zelle durchlaufen Sie Zellen.
    5. Deaktivieren Sie Kollagenase II durch Zugabe von 1 mL der fetalen bovine Serum (FBS).
    6. 196 X g für 5 min zentrifugieren.
  2. Zellkultur
    1. 3 x 105 Zellen in eine 100 mm Schale Saatgut und Kultur mit DMEM mit 10 % FBS und 1 % Antibiotikum antimykotische Lösung bei 37 ° C in einem 5 % CO2 Inkubator für 1 Woche ergänzt.
    2. Alle drei Tage, bis 80 % Zusammenfluss tritt das Kulturmedium zu ändern. Gesunden und degenerative Zellproben bis Durchgang vier Kultur und verwenden für Experiment.

(4) Immunocytochemistry (ICC)

  1. Übertragen Sie 200 µL kultivierte Zelle (2 x 105 Zellen) auf die acht Vertiefungen einer Kammer Folie und wachsen Sie die Zellen zum Zusammenfluss mit der Zugabe von frischen Medien für 1 Tag.
  2. Die Zellen mit PBS waschen und mit 500 µL 4 % Formaldehyd pro Bohrloch befestigen.
  3. Inkubieren Sie die Folien mit 0,5 % Triton x-100 mit PBS-Puffer für 10 min für Permeabilisierung der Membranen.
  4. Block in PBS mit 1 % Rinderserumalbumin und 0,05 % TWEEN-20 für Mohawk und Tenomodulin, beziehungsweise.
  5. Über Nacht in der Dunkelheit mit Maus Anti-Mohawk monoklonale Antikörper (1: 100 Verdünnung) und Ziege-Anti-Tenomodulin-Antikörper (1: 100 Verdünnung) bei 4 ° C inkubieren.
  6. Inkubieren Sie die sekundäre Antikörper (Alexa 555-Anti Ziege (1: 200) für Tenomodulin; Alexa-488-Anti-Maus (1: 200) für Mohawk) im Dunkeln für 1 h bei Raumtemperatur.
  7. Mit 0,5 µL einer Fluoreszenz Eindeckmedium montieren.
  8. Mit einem Fluoreszenzmikroskop (400 X) zu analysieren.

5. Verbreitung Assay

  1. Zelle künstliche mit wasserlöslichen tetrazoliumsalz (WST)-1 zu messen.
    1. Säen Sie gesunde und degenerative Zellen in 96-well-Platten bei einer Dichte von 2 x 103 Zellen pro Bohrloch für 24, 72 und 120 h.
    2. Fügen Sie nach der Inkubation 10 µL 10 % WST-1-Lösung in jede Vertiefung.
    3. Inkubieren Sie die Platten für 3 h bei 37 ° C in 5 % CO2.
    4. Messung der optischen Dichte bei 450 nm mit einer Mikrotestplatte Reader. Nehmen Sie Lesungen mindestens dreimal zu allen Zeitpunkten für jede Probe.
  2. Maßnahme zelluläre DNA-Menge mit der BrdU-Assay.
    1. Samen beide gesund und degenerative Zelle in 96 Platten gut bei einer Dichte von 2 x 103 Zellen pro Bohrloch für 24, 72 und 120 h.
    2. Fügen Sie nach der Inkubation 10 µL 10 % BrdU Lösung in jede Vertiefung.
    3. Inkubieren Sie die Platten für 3 h bei 37 ° C in 5 % CO2.
    4. Fügen Sie 100 µL/Well der Befestigung/Denaturing Lösung (60 – 70 % Ethanol, 0,1-0,5 % Natriumhydroxid) und halten Sie die Platte bei Raumtemperatur für 30 Minuten.
    5. Fügen Sie 100 µL/Well 1 h 1 x Erkennung Antikörperlösung und halten die Platte bei Raumtemperatur vorbereitet.
    6. Entfernen Sie Lösung zu und waschen Sie der Platte dreimal mit 1 x Waschpuffer.
    7. Fügen Sie 100 µL/Well 1 X HRP-konjugierten Sekundärantikörper Lösung vorbereitet und halten Sie die Platte bei Raumtemperatur für 30 Minuten.
    8. Entfernen Sie die Lösung und waschen dreimal mit 1 x Waschpuffer.
    9. Fügen Sie 100 µL 50 % TMB-Substrat.
    10. 30 min bei Raumtemperatur inkubieren.
    11. 100 µL Stopplösung hinzufügen.
    12. Messung der optischen Dichte bei 450 nm mit einer Mikrotestplatte Reader.
      Hinweis: Nehmen Sie Lesungen jederzeit mindestens dreimal Punkte für jede Probe.

6. statistische Analyse

  1. Sammeln und Analysieren von Daten mit SPSS.
  2. Zeigen Sie Daten vom Mittelwert ± Standardfehler von Mittelwert.
  3. Einsatz-Mann Whitney U-Test.
  4. Betrachten Sie Unterschiede statistisch signifikant, wenn der p -Wert kleiner als 0,05 ist (p < 0,05).

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Ergebnisse

Histologische Analysen ergaben, dass das geerntete Gewebe von laterale Epicondylitis die Merkmale einer Tendinopathic Sehne hatte. H & E Abschnitt sehnenerkrankung degenerative Sehne offenbart ein unorganisiert Kollagen-Bündel mit einem Verlust der Polarität und fine gerade, stark verpackt parallel Faser Strukturen. Histologische Zeichen der Degeneration wie höhere zellularität und vergrößerte Kerne ohne die typischen Spindel Form suggestive waren Proben üblich. Darüber hinaus Kollage...

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Diskussion

Eine Reihe von früheren Studien berichteten wie erstelle ich chronische Tendinopathic Tiermodelle mit verschiedenen Verfahren wie Kollagenase oder Kartogenin Injektion, Laufband laufen und weitere26,27. Obwohl zahlreiche Studien vielversprechende therapeutische Effekte basierend auf diesen Tiermodellen zeigten, wäre Experimente mit menschlichen degenerativen Tenocyte entscheidend im Bereich der sehnenerkrankung, um die Wirksamkeit der Behandlung zu reproduzieren....

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Offenlegungen

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Danksagungen

Diese Forschung wurde unterstützt durch einen Zuschuss aus den Korea Health Technology R & D Project durch das Korea Gesundheit Industrie Entwicklung Institut (KHIDI), das vom Ministerium für Gesundheit & Wohlbefinden, Republik Korea finanziert wurde (gewähren Nummer: HI16C1559).

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
SkalpellKisanbioKS-Q0306-15Nr. 15
Mini-KlingeBiber374769
Dulbecco's modifiziertes Eagle's Medium (DMEM)Gibco11995065
PBSGibco14190250
fötales Rinderserum (FBS)Gibco16000044
50 mM Ascorbinsäure-2-phosphatSigma-AldrichA5960
Antibiotisch-Antimykotische LösungGibco15240062
4% FormaldehydBiolösungBP031
Triton X-100 Sigma-AldrichX100-100ml
BSARdtechC0082
TWEEN 20Sigma-AldrichP9416-100ml
MKX (C-5)Santa Cruz Biotechnologiesc-515878
Tenomodulin (N-14)Santa Cruz Biotechnologiesc-49325
Fluoreszenz-EindeckmediumDAKOS3023
DAPI (4',6-Diamidino-2-phenylindole, Dihydrochlorid)Thermo Fisher ScientificD1306
WST-1Dojindo Molecular TechnologiesCK04
BrdU Cell Proliferation Assay KitCell Signaling Technology#6813
TRIzol ReagenzInvitrogen15596018
iScript cDNA Synthesekit Bio-Rad170-8891
TaqMan Genexpression Master MixAngewandte Biosysteme4369016
GAPDHThermo Fisher ScientificHs02786624_g1
COL3A1Thermo Fisher ScientificHs00943809_m1
ACTA2Thermo Fisher ScientificHs00426835_g1
TAC1Thermo Fisher Scientific
TACR1Thermo Fisher ScientificHs00185530_m1
PTGS2Thermo Fisher ScientificHs00153133_m1
ACTBThermo Fisher ScientificHs99999903_m1
Zellsiebe (100 & Mikro; m) Corning352360
100-mm-KulturschaleThermo Fisher Scientific8188207
8-Well-Kammer-ObjektträgerThermo Fisher Scientific154534
96-Well-Mikrotiterplatten aus klarem Polystyrol mit flachem Boden TC-behandelte MikrotiterplattenCorning3596
Nikon Eclipse 50i Mikroskop Nikon
VERSA max Mikroplatten-Lesegerät Molecular Devices
CFX96 Real-Time PCR NachweissystemBio-Rad
Formalinlösung, neutral gepuffert, 10%Sigma-AldrichHT501128
ParaffineLeica Biosystems3801340
EthanolJUNSEI CHEMICAL90303-2185
HämatoxylinDAKOCS70030-2
EosinDAKOCS70130-2
Alcian blueDAKOAR16011-2
ZitronensäureSigma-Aldrich251275
XylolJUNSEI CHEMICAL25165-0430
Endogene PeroxidasenDAKOS200380-2
Kanada BalsamJUNSEI CHEMICAL23255-1210
Mikrotom-KlingeFEATHERA35
DiaglasSUPERIOR1000612
DeckglasMarienfeld-Superior101050
VEGFSanta cruz Biotechnologiesc-7269
SPSS SoftwareIBMVer. 18.0
MehrzweckzentrifugeLABOGENE1248R
Hs00243225_m1

Referenzen

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Schlagwörter

SehnengewebeCollagenase VerdauZellkulturImmunzytochemieH E F rbungProliferationsassayqRT PCRMohawk ProteinTenomodulin Protein
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