Infektiöse Lungenentzündung gehört zu den häufigsten Infektionen beim Menschen. Eine geeignete in-Vivo -Modell ist von entscheidender Bedeutung für das Verständnis der Pathogenese der Krankheit und Prüfung der Wirksamkeit neuer Therapeutika. Mit diesem Modell murine oropharyngealen Aspiration Pneumonie kann man die Pathogenese und neue Therapien gegen diese tödliche Infektionen untersuchen.
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Methodenartikel
Murine oropharyngealen Aspiration Modell der Ventilator-assoziierten und nosokomiale Bakterielle Pneumonie
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Murine Infektionsmodelle sind entscheidend für das Verständnis der Pathogenese der Krankheit und Prüfung der Wirksamkeit neuer Therapeutika entwickelt, um die verursachenden Erreger zu bekämpfen. Infektiöse Lungenentzündung zählt zu den häufigsten Infektionen von Patienten in der Klinik vorgestellt und somit garantiert eine geeignete in-Vivo -Modell. Typische Pneumonie-Modelle verwenden intranasale Impfung, die übermäßige Organismen außerhalb der Lunge verursacht Ziel Komplikationen und Symptome wie Sinusitis, Gastritis, Enteritis, physisches Trauma oder Mikropartikel beschlagen Aerosol imitieren Einlagen die Ausbreitung ist eher typisch für virale, tuberkulösen oder pilzartige Pneumonie. Diese Modelle entsprechen nicht exakt die Pathogenese der bakteriellen Lungenentzündung typischen Gemeinschaft oder Gesundheitswesen erworben. Im Gegensatz dazu imitiert dieses Mausmodell der oropharyngealen Aspirationspneumonie die Tröpfchen-Route im Gesundheitswesen-erworbener Pneumonie. Impfen 50 µL der Bakterien verursacht Aussetzung in den Mund-Rachenraum narkotisierten Mäuse reflexive Aspiration, die zu einer Lungenentzündung führt. Mit diesem Modell kann man die Pathogenese von Lungenentzündung-verursachenden Erreger und neue Therapien zur Bekämpfung dieser Krankheiten untersuchen.
Einleitung
Infektion der unteren Atemwege ist die tödlichste Infektionskrankheit der Welt und die häufigste Todesursache in Entwicklungsländern1. Diese Infektionen entfallen weltweit mehr als 3,2 Millionen Todesfälle1. Darüber hinaus nosokomiale Pneumonie gehört zu den häufigsten und tödlichen Formen der Gesundheitswesen erworbenen Infektionen und wird durch die meisten Antibiotika-resistente Erreger2,3verursacht. Der typische Weg des Erwerbs von für beide ambulant erworbenen bakteriellen Pneumonie und nosokomialer Pneumonie ist das Bestreben der oropharyngealen Inhalt in d....
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Protokoll
Alle Verfahren, bei denen Tiere müssen von der Forscher institutionelle Animal Care und Nutzung Committee (IACUC) genehmigt werden.
1. Vorbereitung der bakterielle Inokulum
- Bakterienkolonien zu isolieren.
- Streifen ein Bakterienstamm (z. B. A. Baumannii "HUMC1") auf geeigneten sterilen Agar Medium (z. B.Tryptic Soy Agar), wobei Sie darauf achten, isolierte Kolonien zu generieren.
- Inkubieren Sie zu angemessenen Bedingungen (z. B.über Nacht bei 37 ° C).
- Wachsen Sie über Nacht Kultur.
- Wählen Sie einen Vertreter, isolierten Kolonie von der Agarplatte ....
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Ergebnisse
Durch sorgfältig Folgendes Protokoll, können leicht reproduzierbare und robuste Daten abgerufen werden. Es ist wichtig, sich strikt an die individuelle Inokulum Vorbereitung Protokoll für Experimente zu einem miteinander verglichen werden. Es ist auch wichtig, richtig Mäuse während des Verfahrens der Infektion zu behandeln. Achten Sie darauf, um Mäuse in einer Narkose Kammer frei von Isofluran zu platzieren. Mäuse werden Panik, wenn sie in eine Kammer platziert werden, die mit Isofluran v.......
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Diskussion
Um sicher zu sein, sind die Mäuse nicht Miniatur Menschen. Ergebnisse aus Mausmodellen müssen im Zusammenhang betrachtet und anschließend auf Übertragbarkeit auf den Menschen, basierend auf Unterschiede und Gemeinsamkeiten zwischen den beiden Arten6interpretiert werden. Es ist auch wichtig, die entsprechenden Maus-Stamm als wählen sicher sind einige Infektionen anfälliger als andere; das gleiche gilt für die Erreger-Stamm von Wahl16.
Es ist wicht.......
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Offenlegungen
Die Autoren erklären, dass sie keine finanziellen Interessenkonflikte.
Danksagungen
Diese Arbeit wurde durch das National Institute of Allergy and Infectious Diseases in der National Institutes of Health [Grant Zahlen R01 AI117211, R01 AI130060 R21 AI127954 und R42 AI106375 BS] und US Food and Drug Administration [Vertrag unterstützt. HHSF223201710199C, BML].
....Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Agar | BD | 214530 | Kombinieren Sie es mit TSB, um TSA-Perlen herzustellen |
| , Borosilikatglas | Kimble | 135003 | Sterilisieren Sie durch Backen oder Autoklavieren vor jedem Gebrauch |
| Becherglas, 250 mL | Pyrex | 1003 | Wird während der präzisen Aliquotierung von konzentrierten bakteriellen Inokula verwendet |
| Zentrifuge | Sorvall | ST 40R | Kann 4.000 Mal verwenden; g bei 4°; C-Kammer |
| für die Anästhesie | Kent Scientific Corporation | VetFlo-0720 | Bietet Platz für bis zu 5 Mäuse |
| Kryomold, Zwischengröße | Sakura Tissue-Tek | 4566 | Einweg-Vinylprobenformen, 15-fach; 15&mal; 5 mm |
| Zahnseide | Oral-B | 37000469537 | Binden Sie an einen stabilen Pfosten ca. 6" über der Tischhöhe |
| Pinzette | VWR | 82027-440 | Wird verwendet, um die Zunge sanft aus dem Mund einer Maus zu ziehen |
| Homogenisator für Lungengewebe | Omni International | TM125-115 | Autoklav vor dem ersten Gebrauch; spülen Sie zwischen den Proben |
| Isofluran für die Anästhesie | Abbott | 10015516 | Alternative Medikamente können verwendet werden; Ändern Sie das Verfahren entsprechend |
| iSTAT Patrone | Abbott | 03P79-25 | Verschiedene Kartuschen sind erhältlich, um Ihren Bedürfnissen gerecht zu werden |
| Ketamin, 100 mg/mL | Western Medical Supply | 4165 | Verdünnen Sie 1:10 in PBS auf 1 mg/mL und kombinieren Sie es mit Xylazin bei 1 mg/mL |
| Salbe für die Augen | Akorn | Tränen erneuert | Vermeiden Sie es, das Auge mit der Spitze des Spenders zu berühren |
| Optimale Schnitttemperatur (O.C.T.) Compound | Fisher Scientific | 23-730-571 | Wird zum Einfrieren von Lungenproben bei -80 & Grad verwendet; C zur Vorbereitung auf die Pathologie |
| Petrischale | VWR | 25384-302 | Polystyrol, Einweg, sterilisiert, 100-fach; 15 mm |
| phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS) | Corning | 21-031-CM | Dulbecco's PBS ohne Calcium und Magnesium |
| Pipettenspitzen, 200-μ L | VWR | 10017-044 | Autoklav vor Gebrauch |
| Pipetter, 200-μ L | Gilson | Pipetman P200 | Gebrauch autoklavieren und kalibrieren |
| Spreader, Bakterienzelle | Bel-Art | F377360006 | Vor jedem Gebrauch durch Backen oder Autoklavieren sterilisieren |
| Rührstab, magnetisch, 7,9 mm Durchmesser & 38,1 mm Länge | VWR | 58948-150 | Wird zum Rühren von konzentrierten bakteriellen Inokula während des Aliquotierens |
| verwendet Rührplatte, magnetisch | Corning | PC-620D | Wird zum Rühren von konzentrierten bakteriellen Inokula während der Aliquotierung |
| Tryptische Sojabrühe (TSB) | BD | 211822 | Kombinieren Sie es mit Agar, um TSA-Fläschchen herzustellen |
| , konisch, steril, 50 mL | Corning | 431720 | Wird zur Herstellung von bakteriellen Inokula |
| Fläschchen verwendet, konisch, steril, 500 mL | Corning | 431123 | Wird verwendet, um Inokula für die Zubereitung von gefrorenen Inokula |
| zu konzentrieren Fläschchen, kryogen, 2,0 mL | Corning | 430659 | Zur kryogenen Lagerung von konzentrierten bakteriellen Inokula |
| Xylazin, 20 mg/ml | Akorn | AnaSed Injektion | Verdünnen Sie 1:20 in PBS auf 1 mg/ml und kombinieren Sie es mit Ketamin bei 1 mg/ml |
Referenzen
- Media Centre, W. H. O. World Health Organization. Fact Sheet - Top 10 Causes of Death. , Available from: http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs310/en/ (2017).
- Spellberg, B., Talbot, G. H. Recommended Design Features of Future Clinical Trials of Antibacterial Agents for Hospital-Acqu....
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Nachdrucke und Genehmigungen
