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Methodenartikel

Die Pflanze-Infektion-Test: Spray und Wunde-vermittelten Inokulation mit Pflanzen Pathogen Magnaporthe Grisea

12.4K Aufrufe

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DOI:

10.3791/57675

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4. August 2018

* These authors contributed equally

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Hier präsentieren wir ein Protokoll zur Pflanze Virulenz mit dem Werk Erreger testen Magnaporthe Grisea. Dieser Bericht wird dazu beitragen, das große Screening von Pathotypen von Pilzen Isolaten und dienen als ein ausgezeichneter Ausgangspunkt für das Verständnis der resistenten Mechanismen der Pflanzen während der molekularen Züchtung.

Zusammenfassung

Pflanzen besitzen ein leistungsstarkes System zur Selbstverteidigung gegen potenzielle Bedrohungen durch pathogene Pilze. Für landwirtschaftlich wichtigen Pflanzen jedoch aktuelle Maßnahmen gegen solche Erreger zu konservativ erwiesen und somit nicht ausreichend wirksam, und sie können möglicherweise aufwerfen Umweltrisiken. Daher ist es äußerst notwendig, um Host-Resistenzfaktoren bei controlling Pflanzenkrankheiten natürlich durch die Identifizierung von resistenten Keimplasma, die Isolierung und Charakterisierung von Genen und der molekularen Züchtung identifizieren der resistenten Sorten. In dieser Hinsicht gibt es brauchen, um eine präzise, schnelle und großflächige Impfung Methode zum Züchten und entwickeln Pflanze-Resistenz-Gene zu etablieren. Der Reis pilzliche Erreger Magnaporthe Grisea Ursachen schwere Krankheitssymptome zu sprengen und Verluste ergeben. Vor kurzem, hat M. Grisea als Modellorganismus zur Erforschung der Mechanismen der Pflanze-Pilz Pathogen Interaktionen entstanden. Daher berichten wir über die Entwicklung einer Pflanze Virulenz Testmethode, die spezifisch für M. Grisea. Diese Methode bietet für Spray Inokulation mit conidial Federung und verletzte Inokulation mit Myzel Würfel oder Wassertropfen conidial Aufhängung. Der entscheidende Schritt der Verwundung Inokulation Methode für freistehende Reis Blätter soll Wunden auf Pflanzenblättern, die vermeidet Störungen verursacht durch Host eindringwiderstand. Dieses Spray/Verwundung Protokoll trägt zur schnellen, genauen und groß angelegte Vorführung des Pathotypen M. Grisea -Isolate. Diese integrierte und systematische Anlage Infektion Methode wird als ein ausgezeichneter Ausgangspunkt für die Gewinnung einer breiten Perspektive Fragen in Pflanzenpathologie dienen.

Einleitung

Reis-Explosion, verursacht durch M. Grisea, ist eine der schwersten Krankheiten für Reis Sorten weltweit,1,2. Der Prozess, durch den M. Grisea Wirtspflanzen infiziert, umfasst eine Konidien Produktion und Oberfläche Anlage, eine Konidien Keimung und Appressorium Bildung, eine Formation von penetrationspflocks und infektiöse Ascokarpen Differenzierung und Ausbreitung einer Krankheit 3. alle diese Stadien sind häufig in viele andere Pflanze pathogene Pilze, und in der Tat eine Blockade von jeder einzelnen Phase verhindert die Infektion von Wirtspflanzen. Aufgrund seiner ....

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Protokoll

1. Spray Inokulation mit einer Suspension von M. Grisea Konidien

  1. Pilzartige Kultur für M.grisea
    1. Bereiten Sie die Haferflocken Tomate Agar (OTA) Kulturmedium für pilzstämmen.
    2. Gewicht von 30-50 g Haferflocken, fügen Sie diese auf 800 mL destilliertem/deionisiertes Wasser (DdH2O) und Kochen Sie die Mischung für 30 min in den elektrischen Topf.
    3. Filtern Sie die gekochten Haferflocken Saft in das Becherglas mit einem Stück Gaze.
    4. Das Filtrat in den Becher 150 mL Tomatensaft und 20 g Agar-Agar hinzufügen und fügen Sie DdH2O bis zu 1.000 mL.

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Ergebnisse

Der gesamte Workflow für die Technik ist in Abbildung 1dargestellt. Die Pflanze-Infektion-Assays wurden an 14 Tage alten anfällig Reis Sämlinge durchgeführt (O. Sativa cv CO-39) oder anfällig für 7 Tage alten Gerste verlässt (H. Vulgare cv Golden Promise)7,8,9. Um eine Infektion auf die Reis-Blätter zu testen, wurden eine conidial Suspension (1,0 x .......

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Diskussion

Pflanze-Krankheit-Resistenz-Gene spielen eine wesentliche Rolle bei der Verhinderung von Infektionen durch Krankheitserreger, einschließlich pilzerreger1,12. Reis-Explosion wurde als Modell zu verstehen, die Art des Erregers Bevölkerungsstrukturen und Werk Widerstand Gene4identifizieren eingesetzt. Daher ist es notwendig zu prüfen, die Krankheit Widerstand Genotyp und avirulenz Genotypen der wichtigsten Sorten der landwirtschaftlichen Pfla.......

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Offenlegungen

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Danksagungen

Diese Arbeit wurde durch das spezielle wissenschaftliche Forschungsprojekt Universität Peking Landwirtschaft (YQ201603) und das wissenschaftliche Projekt der Peking-Studienkommission (KM201610020005) unterstützt.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
FilterpapierMarke GE Healthcare (Schweden)    
50-ml-RöhrchenCORNING(Amercia)430290
ZentrifugeEppendorf(Amercia)5804R
KulturschaleThermofisher(Amercia)150326
0,5-5 mL PipetteEppendorf 
100-1000uL PipetteEppendorf4920000083
VakuumpumpeLeyboldD25B
PräpariernadelFST26000-35
InkubatorMEMMERTPYX313
ImpfringGreiner Bio One731175
103113874920000105

Referenzen

  1. Li, W. T., et al. A natural allele of a transcription factor in rice confers broad-spectrum blast resistance. Cell. 170 (1), 114-126 (2017).
  2. Chi, M. H., Park, S. Y., Kim, S., Lee, Y. H. A novel pathogenicity gene is re....

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Nachdrucke und Genehmigungen

Tags

SprühinokulationKonidien-SuspensionMyzelplugabgetrennte ReisblätterPathotyp-ScreeningReisbräuneInteraktion zwischen Pflanzen und Pathogenen