Ca2 + Antworten Imaging während der Shigella Infektion von Epithelzellen

Yasmine Smail; Chunhui Sun; Laurent Combettes; Guy Tran Van Nhieu

doi:10.3791/57728

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Methodenartikel

Ca^{2 +} Antworten Imaging während der Shigella Infektion von Epithelzellen

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DOI:

10.3791/57728

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24. Mai 2018

Yasmine Smail¹^,²^,³^,⁴ , Chunhui Sun¹^,²^,³^,⁴ , Laurent Combettes⁵ , Guy Tran Van Nhieu¹^,²^,³^,⁴

¹Equipe Communication Intercellulaire et Infections Microbiennes, Centre de Recherche Interdisciplinaire en Biologie (CIRB), Collège de France, ²Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (Inserm), U1050, ³Centre Nationale de la Recherche Scientifique (CNRS), UMR7241, ⁴MEMOLIFE Laboratory of Excellence and Paris Sciences et Lettres, ⁵Inserm, UMRS1174, Université Paris Sud

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Hier präsentieren wir Ihnen Protokolle, um Kalzium (Ca^{2 +}) Reaktionen hervorgerufen durch HeLa-Zellen infiziert durch Shigellazu visualisieren. Durch die Optimierung der Parameter der bakteriellen Infektion und Bildgebung mit Ca^{2 +} fluoreszierende Sonden, sind atypische globaler und lokaler Ca^{2 +} Signale über einen grossen Bereich der Infektion Kinetik durch Bakterien verursachten gekennzeichnet.

Zusammenfassung

Ca^{2 +} ist eine allgegenwärtige Ion alle bekannten zellulären Prozessen beteiligt. Während globale Ca^{2 +} Antworten Zelle Schicksal beeinträchtigen können, Regeln lokale Variationen in frei Ca^{2 +} cytosolischen Konzentrationen, verbunden zum lösen vom internen Speicher oder einen Zustrom durch Plasmamembran Kanäle, kortikale Zellprozesse. Krankheitserreger, die an oder dringen Host Zellen Trigger eine Reorganisation des Aktin-Zytoskeletts zugrunde liegenden Host Plasmamembran, die wahrscheinlich sowohl auf globaler als auch auf lokalen Ca^{2 +} Signalisierung betrifft. Da diese Ereignisse bei niedrigen Frequenzen in einer Pseudo-stochastische Weise über erweiterte Kinetik auftreten können, wirft die Analyse von Ca^{2 +} Signale durch Krankheitserreger verursacht große technischen Herausforderungen, die angegangen werden müssen.

Hier berichten wir Protokolle zum Nachweis von globalen und lokalen Ca^{2 +} Signale auf eine Shigella Infektion der Epithelzellen. In diesen Protokollen Artefakten verknüpft zu einer längeren Exposition und lichtbedingten verbunden mit der Anregung von Ca^{2 +} fluoreszierende Sonden sind streng kontrollieren die Aufnahmeparameter über definierte Zeiträume während einer Fehlerbehebung Shigella Invasion. Verfahren werden implementiert, um konsequent die Amplitude und Frequenz der globalen cytosolischen Ca^{2 +} Signale analysieren während der ausgedehnten Infektion Kinetik mit der chemischen Sonde Fluo-4.

Einleitung

Ca^{2 +} regelt alle bekannten Zellprozesse, einschließlich Zellskelett Reorganisation, Entzündungsreaktionen und Zelle Tod Wege im Zusammenhang mit Wirt-Pathogen Interaktionen¹^,²^,³. Unter physiologischen Bedingungen basale cytosolische Ca^{2 +} Konzentrationen sind niedrig, in den Hunderten von nM-Bereich, aber können zu einem vorübergehenden Anstieg nach Agonist Stimulation unterzogen werden. Diese Variationen zeigen oft oszillierende Verhalten durch das Wirken von Pumpen und Kanäle im Plasma und endoplasmatische Retikulum Membranen. Das Muster dieser Schwin....