In Vivo Mikrodialyse-Methode, um große extrazellulären Proteine Sammeln von Gehirn interstitielle Flüssigkeit mit hochmolekularen Gewicht Cut-Off-Sonden

Zusammenfassung

In Vivo Mikrodialyse ermöglichte Ansammlung von Molekülen im Gehirn interstitielle Flüssigkeit (ISF) von wach, frei Verhalten Tieren vorhanden. Um relativ große Moleküle in ISF zu analysieren, der aktuelle Artikel konzentriert sich speziell auf der Mikrodialyse-Protokoll mit Sonden mit hohem Molekulargewicht Membranen abgeschnitten.

Zusammenfassung

In Vivo Mikrodialyse ist eine leistungsstarke Technik, ISF von wach, frei Verhalten Tieren basiert auf einem Prinzip der Dialyse zu sammeln. Während Mikrodialyse eine etablierte Methode, die relativ kleine Moleküle wie Aminosäuren oder Neurotransmitter misst ist, wurde es vor kurzem zur Dynamik von größeren Molekülen in ISF mit Sonden mit hohem Molekulargewicht abgeschnitten bewerten Membranen. Bei Verwendung solcher Sonden, muss Mikrodialyse in einem Push-Pull-Modus zu Druck im Inneren der Sonden angesammelt ausgeführt werden. Dieser Artikel enthält detaillierte Protokolle einschließlich stereotaktischen Chirurgie und Mikrodialyse Linien einrichten, um Proteine von ISF zu sammeln. Während Mikrodialyse können Medikamente systemisch oder durch direkte Infusion in ISF verabreicht werden. Umgekehrte Mikrodialyse ist eine Technik, um direkt Verbindungen in ISF einfließen. Aufnahme von Medikamenten in der Mikrodialyse Perfusion Puffer ermöglicht es ihnen, durch die Sonden in ISF diffundieren, während gleichzeitig die ISF zu sammeln. Durch die Messung von Tau-Protein als Beispiel, zeigt der Autor, wie die Ebenen auf anregende neuronaler Aktivität durch umgekehrte Mikrodialyse Picrotoxin verändert werden. Vorteile und Grenzen der Mikrodialyse werden zusammen mit dem erweiterten Programm beschrieben, durch die Kombination von anderen in-Vivo -Methoden.

Einleitung

ISF umfasst 15-20 % der gesamten Hirnvolumen und bietet eine Mikroumgebung für Signaltransduktion, substrattransport und Abfälle Clearance¹von entscheidender Bedeutung. Daher wird die Möglichkeit des Sammelns ISF von lebenden Tieren größere Auswirkungen für verschiedene biologische Prozesse sowie Krankheitsmechanismus bieten. In Vivo Mikrodialyse ist eine der wenigen Methoden, die Probe und extrazelluläre Moleküle von ISF von Wachen, frei beweglichen Tieren zu quantifizieren und dient damit als ein nützliches Werkzeug in der neurowissenschaftlichen Forschung Feld^2,3. Bei dieser....

Protokoll

Alle Tierversuche wurden überprüft und genehmigt durch die institutionelle Animal Care und Use Committee der Graduate School of Medicine an der University of Tokyo.

1. präoperative Verfahren

1. Wischen Sie vor Beginn der Operation alles mit 70 % Ethanol, sterile Bedingungen beizubehalten. Thermischen Unterstützung mit einem Heizkissen wird empfohlen.
2. Betäuben Sie die Mäuse durch intraperitoneale Injektion von Chloral Hydrate (400 mg/kg). Anesthetization durch Ausführen einer Zehe Klemme zu bestätigen. Meloxicam SR auf Induktion und Buprenorphin bei Wiederherstellung Gebot wird für mindestens 24 Stunden empfohlen.
3. ....

Ergebnisse

Um zu stimulieren oder hemmen neuronalen Aktivität in umgekehrter Mikrodialyse^11,12,13, Picrotoxin, GABA-_A -Rezeptor-Antagonisten oder Tetrodotoxin, Na⁺ -Kanal-Blocker verwendet wurden. Es hat sich gezeigt, dass Tau Freigabe durch Erhöhung der neuronalen Aktivität^13,14angeregt wird. Einklang mit diesen frühere Beobac.......

Diskussion

Mikrodialyse mit hohem Molekulargewicht Membranen abgeschnitten hat von einem Push-Pull-Modus betrieben werden, so ist es wichtig, dass die Durchflussmenge genau und konstant sind. Die Ungenauigkeit in der Durchflussmengen kann die Ursache der Luftblase Generation und Inkonsistenz in der probenkonzentration sein. Wenn der Fluss inkonsistent ist, prüfen Sie alle Anschlüsse auf Dichtheit. Wenn das Problem weiterhin besteht, kann es mit neuen Sonden und Schläuche Neustart erforderlich.

Microdilay.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Der Univentor 820 Mikroprobensammler	Univentor	8303002	Kühlfraktionssammler
Spritzenpumpe	KD scientific	KDS-101
Rollenpumpe	Eicom Mikrodialyse	ERP-10
Raturn Stand-Alone-System	BASi	MD-1409	Freibewegliches System
Käfig-Kit für zwei Spezies	BASi	CX-1600
AtmosLM Mikrodialysesonde (Schaftlänge 8 mm, Membranlänge 2 mm)	Eicom Mikrodialyse	PEP-8-02	Die Schaftlänge für eine Sonde, eine Führung, eine Dumy-Sonde und einen stereotaktischen Adapter sollte identisch sein.
Mikrodialyse-Schablone (Schaftlänge 8 mm)	Eicom Mikrodialyse	PEG-8
Mikrodialyse-Dummy-Sonde (Schaftlänge 8 mm)	Eicom Mikrodialyse	PED-8
Knochenschraube	BASi	MD-1310
Super bond C& B-Set	Sunmedical		Zahnzement
Stereotaktisches Instrument für Kleintiere mit digitaler Anzeigekonsole	Kopf	Modell 940	Stereotaktisches Gerät
Adapter für Maus und Neugeborenenratte	Stoelting	51625
Standard-Ohrbügel und Gummispitzen für Maus Stereotaxisches	Stoelting	51648
Albuminlösung aus Rinderserum	Sigma	A7284-50ML	30% BSA-Lösung
FEP-Schlauch (70 cm)	Eicom Mikrodialyse	JF-10-70	Innenvolumen = 0,5 & Mikro; L/cm
Teflonschlauch (50 cm)	Eicom Mikrodialyse	JT-10-50	Innenvolumen = 0,08 & Mikro; L/cm
Byton-Röhrchen	Eicom Mikrodialyse	JB-30
Intramedic Luer-Stab-Adapter 23G	BD	427565	Nadel mit stumpfem Ende
Rollenschlauch	Eicom Mikrodialyse	RT-5S	Innenvolumen = 4 & Mikro; L
Hutmutter	Eicom Mikrodialyse	AC-5
0,25 mL Mikrozentrifugenröhrchen mit Kappe	QSP	503-Q	Röhrchen für Fraktionssammler
Sterotaxischer Adapter (Schaftlänge 8 mm)	Eicom Mikrodialyse	PESG-8
Verbindungsnadel	Eicom Mikrodialyse	RTJ
Maus Tierhalsband	BASi	MD-1365
Hochgeschwindigkeits-Rotations-Mikromotor-Kit	FOREDOM	K.1070	Bohrer
Picrotoxin	Sigma	P1675
Schraubendreher für Knochenschrauben
Skalpell
Wattestäbchen
Chirurgischer Haarschneider