In-vitro- Differenzierung von Granulozyten-Makrophagen-Kolonie-stimulierende Faktor (GM-CSF) Maus-Herstellung von T-Helferzellen (THGM)

Yi Lu; Xin-Yuan Fu; Yongliang Zhang

doi:10.3791/58087

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Methodenartikel

In-vitro- Differenzierung von Granulozyten-Makrophagen-Kolonie-stimulierende Faktor (GM-CSF) Maus-Herstellung von T-Helferzellen (T_HGM)

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DOI:

10.3791/58087

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10. September 2018

Yi Lu¹^,²^,³ , Xin-Yuan Fu³ , Yongliang Zhang¹^,²

¹Department of Microbiology and Immunology, Yong Loo Lin School of Medicine, National University of Singapore, ²Immunology Programme, Life Sciences Institute, National University of Singapore, ³Cancer Science Institute of Singapore, Yong Loo Lin School of Medicine, National University of Singapore

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Hier präsentieren wir ein Protokoll zur murine granulocyte-macrophage-colony-stimulating-factor-producing T (T_HGM)-Helferzellen von naiven CD4 + T-Zellen, einschließlich Isolierung von naiven CD4 + T-Zellen, Differenzierung von T_HGM, zu differenzieren und Analyse von differenzierten Zellen T_HGM. Diese Methode kann auf Studien der Verordnung und Funktion von T_HGM Zellen angewendet werden.

Zusammenfassung

Der Granulozyten-Makrophagen-Kolonie-stimulierende Faktor (GM-CSF)-Herstellung von T-Helfer (T_HGM)-Zelle ist eine neu identifizierten T Helfer Zelle Teilmenge, die überwiegend sondert GM-CSF ohne Herstellung von Interferon (IFN) γ oder Interleukin (IL)-17 und wird festgestellt, dass Spielen Sie eine wesentliche Rolle in der autoimmunen Neuroinflammation. Eine Methode zur Isolierung von naiven CD4 + T-Zellen aus einer einzelligen Aussetzung der splenocyten und T_HGM Zellgeneration von naiven CD4 + T-Zellen wäre eine nützliche Technik in der Studie von T zellvermittelte Immunität und Autoimmunerkrankungen. Hier beschreiben wir eine Methode, die Maus naive CD4 + T-Zellen in T_HGM Zellen gefördert durch IL-7 unterscheidet. Das Ergebnis der Unterscheidung wurde durch die Analyse der Zytokine Ausdruck mit verschiedenen Techniken, einschließlich intrazelluläre Zytokin Färbung kombiniert mit Durchflusszytometrie, eine quantitative Real-Time Polymerase-Kettenreaktion (PCR), beurteilt und Enzym-linked Immunosorbentprobe Assays (ELISA). Mit dem T-_H-GM Differenzierung Protokoll wie beschrieben hier, etwa 55 % der Zellen ausgedrückt GM-CSF mit einem minimalen Ausdruck IFNα oder IL-17. Der vorherrschende Ausdruck von GM-CSF von T_HGM Zellen wurde durch die Analyse des Ausdrucks von GM-CSF, IFNα und IL-17 mRNA und Protein Ebene bestätigt. So können mit dieser Methode, naive CD4 + T-Zellen, T zu unterscheiden_HGM Zellen in Vitro, die werden in der Studie von T_HGM Zellbiologie.

Einleitung

CD4 + T-Helferzellen (T_H) sind wesentliche Bestandteile des Immunsystems, da entscheidende Rollen in der Wirt Verteidigung gegen mikrobielle Krankheitserreger, in der Krebs-Überwachung, und Autoimmunität¹^,²^,³. Bei der T-Zell-Rezeptor (TCR) Aktivierung naive CD4 + T-Zellen differenzieren sich in T_H1, T_H2, T_H 17 oder regulatorischen T (Treg) Zellen unter dem Einfluss von verschiedenen Zytokin Milieus²^,⁴^, ⁵. vor kurzem eine neue Untergruppe vo....