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Methodenartikel

Katalytische Spülung der Anlage reaktive Sauerstoff Spezies In Vivo von anionischen Cerium-oxid-Nanopartikel

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DOI:

10.3791/58373

⸱

26. August 2018

 ,  ,  , 
1Department of Botany and Plant Sciences, University of California, 2Department of Microbiology and Plant Pathology, University of California

* These authors contributed equally

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Hier präsentieren wir Ihnen ein Protokoll für die Synthese und Charakterisierung von Cerium-oxid-Nanopartikel (Nanoceria) für ROS (reaktive Sauerstoffspezies) in Vivo, Nanoceria im Pflanzengewebe durch konfokale Mikroskopie und in-Vivo imaging Aufräumvorgang Überwachung des Nanoceria ROS Aufräumvorgang konfokalen Mikroskopie.

Zusammenfassung

Reaktive Sauerstoff-Spezies (ROS)-Ansammlung ist ein Markenzeichen der Pflanze abiotischen Stress-Reaktion. ROS spielen eine Doppelrolle in Pflanzen als Signalmoleküle auf einem niedrigen Niveau und Moleküle auf einem hohen Niveau zu beschädigen. Anhäufung von ROS in gestresste Pflanzen kann Stoffwechselprodukte, Enzyme, Lipide und DNA, was zu einer Reduzierung des Pflanzenwachstums und der Ertrag beschädigen. Die Fähigkeit der Cerium-oxid-Nanopartikel (Nanoceria), katalytisch ROS in Vivo Aufräumen bietet ein einzigartiges Werkzeug zu verstehen und Biotechnologe Pflanzenverträglichkeit abiotischem Stress. Hier präsentieren wir Ihnen ein Protokoll zu synthetisieren und Poly (Acryl) Säure beschichteten Nanoceria (PNC) zu charakterisieren, Schnittstelle die Nanopartikel mit Pflanzen über Blatt-Lamina-Infiltration und Überwachung ihrer Verteilung und ROS Aufräumvorgang in Vivo konfokale mit Mikroskopie. Aktuelle Molekulare Werkzeuge zur Manipulation der ROS-Akkumulation in Pflanzen sind nur die Modell-Arten und mühsamer Wandel Methoden erfordern. Dieses Protokoll für in Vivo ROS Aufräumvorgang hat das Potenzial, zu Wildtyp-Pflanzen mit breiten Blättern und Blattstruktur wie Arabidopsis Thalianaangewendet werden.

Einleitung

Cerium-oxid-Nanopartikel (Nanoceria) sind in lebenden Organismen, von der Grundlagenforschung zur Biotechnologie, aufgrund ihrer unterschiedlichen katalytischen reaktiven Sauerstoffspezies (ROS) Aufräumvorgang Fähigkeit1,2,3verbreitet. Nanoceria haben ROS Aufräumvorgang Fähigkeiten aufgrund einer großen Anzahl von Oberfläche Sauerstoff stellen, die abwechselnd zwei Oxidation Staaten (Ce3 + und CE-4 +) 4,5,6. Die CE-3 + baumelnden Bindungen Aufräumen effektiv ROS während der Gitter-Stämme im Nanobereich die Regeneration dieser defekt Seiten über Redox fördern-Reaktionen7Radfahren. Nanoceria haben auch vor kurzem verwendet, für das Studium und Engineering Anlagenbau Funktion8,9. Pflanzen unter abiotischen Stress erleben Anhäufung von ROS, oxidativen Schäden an Lipiden, Proteinen und DNA-10. In A. Thaliana Pflanzen führt Nanoceria katalytische Aufräumvorgang von ROS in Vivo zu verbesserten pflanzlichen Photosynthese unter hohen Licht, Wärme und Kühlung betont8. Anwendung Nanoceria auch erhöht Shooting Biomasse und Korn-Ertrag von Weizen (Triticum Aestivum)11Boden; Raps (Brassica Napus) Pflanzen mit Nanoceria behandelt haben höhere pflanzlicher Biomasse unter salzstress12.

Nanoceria bieten Bioingenieure und Biologen eine Nanotechnologie-basierte Tool, um abiotischem Stress-Reaktionen zu verstehen und zu verbessern Pflanzenverträglichkeit abiotischem Stress zu Pflanzen. Nanoceria der in Vivo ROS Aufräumvorgang Fähigkeiten sind unabhängig von Pflanzenarten und einfache Lieferung ins Pflanzengewebe hat das Potenzial, breite Anwendung außerhalb von Modellorganismen zu ermöglichen. Im Gegensatz zu anderen Methoden genetisch bedingt Nanoceria erfordern keine Generierung von Pflanzenlinien mit der Überexpression von antioxidativen Enzymen für höhere ROS Aufräumvorgang Fähigkeit13. Blatt-Lamina Infiltration von Nanoceria Pflanzen ist ein praktischer Ansatz für die Labor-basierte Forschung.

Das übergeordnete Ziel dieses Protokolls ist es, (1) die Synthese und Charakterisierung von negativ geladenen Poly (Acryl) Säure Nanoceria (PNC), (2) die Lieferung und Verfolgung von PNC im gesamten Blattzellen und (3) die Kontrolle der PNC-fähigen ROS Aufräumvorgang beschreiben Vivo. In diesem Protokoll sind negativ geladenen Poly (Acryl) Säure Nanoceria (PNC) synthetisiert und charakterisiert durch ihr Absorptionsspektrum, hydrodynamische Durchmesser und Zetapotenzial. Wir beschreiben eine einfache Blatt Lamina Infiltration-Methode um PNC in Pflanze Blatt Gewebe liefern. Für die in-Vivo Bildgebung der Verteilung der Nanopartikel im Mesophyll Zellen wurde ein Fluoreszenzfarbstoff (DiI) zur PNC (DiI-PNC) beschriften und beobachten die Nanopartikel über konfokale Fluoreszenzmikroskopie. Schließlich erklären wir, wie in Vivo PNC ROS Abfangen durch konfokale Mikroskopie zu überwachen.

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Protokoll

1. A. Thaliana Pflanzen

  1. Säen Sie A. Thaliana in 5 x 5 cm Einweg-Töpfe mit einheitserde Mischung gefüllt. 32 dieser Töpfe in ein Kunststoff-Tablett mit Wasser gefüllt genommen (~ 0,5 cm Tiefe) und die Kunststoff-Tablett mit den Pflanzen in einer Pflanze Wachstum Kammer übertragen.
    1. Einstellen des Wachstums Kammer wie folgt: 200 µmol/ms fotosynthetisch aktive Strahlung (PAR), 24 ± 1 ° C Tag und 21 ± 1 ° C Nacht 60 % Luftfeuchtigkeit und 14/10 h Tag/Nacht Licht Regime, beziehungsweise.
  2. Dünne jeden Topf um nur eine einzelne Pflanze nach einer Woche der Keimung zu verlassen. Beachten Sie die Sämlinge mit ähnlicher Größe in jeden Topf zu halten.
  3. Wasser die Töpfe von strömendem Wasser direkt an der Plastikschale einmal alle zwei Tage. Wachsen Sie die Pflanzen, für vier Wochen. A. Thaliana Pflanzen sind für die weitere Verwendung bereit.

(2) Synthese und Charakterisierung von PNC

  1. CER (III) Nitrat 1,08 g wiegen und in 2,5 mL Molekularbiologie Grade Wasser in einem 50 mL konische Röhrchen auflösen.
  2. Poly (Acryl) Säure 4,5 g wiegen und in 5 mL Molekularbiologie Grade Wasser in einem 50 mL konische Röhrchen auflösen.
  3. Mischen Sie diese beiden Lösungen gründlich auf 2.000 u/min für 15 min mit einem digitalen Vortex Mixer.
  4. Übertragen Sie 15 mL Ammonium Hydroxid-Lösung (7,2 M) auf ein 50-mL-Becherglas.
  5. Unter ständigem Rühren bei 500 u/min, die Mischung aus Schritt 2.3 tropfenweise das Ammonium Hydroxid Projektmappe hinzufügen und rühren bei 500 u/min bei Raumtemperatur für 24 Stunden in einer Dampfhaube.
  6. Decken Sie das Becherglas mit einem Stück Papier, um den erheblichen Verlust Lösung während der Nacht Reaktion zu vermeiden.
  7. Übertragen Sie nach 24 h die resultierende Lösung auf eine 50 mL konische Rohr und Zentrifugieren sie bei 3.900 x g für 1 h um mögliche Ablagerungen und große Agglomerate zu entfernen.
  8. Übertragen Sie diese 22,5 mL der überstehenden Lösung in drei 15 mL 10 kDa Filter und füllen Sie den Rest des Filters mit molekularen Grade Wasser zu einer totalen Verdünnung von 45 mL.
  9. Reinigen Sie die überstehende Lösung aus freien Polymeren und anderen Reagenzien mit einer Benchtop-Zentrifuge, indem Sie eine 15 mL 10 kDa Filter und Zentrifuge bei 3.900 x g für 15 min. Überstands hinzufügen wiederholen Sie diesen Schritt mindestens sechsmal.
  10. Messen Sie die Absorption der Eluent in jedem Zyklus mit einem UV-VIS Spektralphotometer von 220-700 nm, keine freie Polymere zu gewährleisten und andere Reagenzien in der endgültigen PNC-Lösung vorhanden sind.
  11. Nehmen Sie die gesammelten PNC-Lösung in 5 mL Spritze und gegen einen 20 nm Pore Größe Spritze Filter filtern. Sammeln Sie die gefilterten PNC-Lösung in einem 50 mL konische Röhrchen.
  12. Nehmen Sie eine verdünnte Lösung für endgültige PNC in Kunststoff Küvette und Messen Sie seine Absorption mit UV-VIS Spektralphotometer von 220-700 nm zu. PNC Extinktion Gipfel ist 271 nm.
  13. Seine Konzentration mit Bier-Lambert Gesetz berechnen: A = εCL. A ist die Extinktion der Peak-Wert für eine gegebene Probe, Mundarten ist die molare Absorptionskoeffizienten von PNC (cm-1 M-1), L ist die optische Weglänge (Küvette Breite, 1 cm in dieser Methode), und C ist die molare Konzentration der gemessenen Nanopartikel.
  14. Messen Sie die hydrodynamischen Durchmesser und Zeta-Potential des synthetisierten PNC mit einem Partikel Größe und Zeta potenzielle Analyzer (Abbildung 1).
  15. Die endgültige PNC-Lösung im Kühlschrank (4 ° C) bis zur weiteren Verwendung zu speichern.
    Hinweis: Siehe Wu Et Al. 8 weitere Protokoll-Informationen über PNC Charakterisierung.

3. Kennzeichnung PNC mit DiI Fluoreszenzfarbstoff

  1. 0,4 mL 5 mm (58 mg/L) PNC mit 3,6 mL der Molekularbiologie Grade Wasser in ein 20 mL-Glasflasche verrühren Sie und bei 500 Umdrehungen pro Minute.
  2. Fügen Sie 24 µL 1, 1'-Dioctadecyl-3,3, 3', 3'-Tetramethylindocarbocyanine Perchlorat Farbstofflösung (DiI, 2,5 mg/mL; verdünnter in DMSO) in 176 µL DMSO (Dimethyl Sulfoxid), die DiI Farbstofflösung zu machen.
  3. Die DiI-Farbstoff tropfenweise die PNC Projektmappe fügen Sie hinzu, rühren bei 1.000 u/min für 1 min bei Raumtemperatur.
  4. Übertragen Sie dieses resultierende Mischung in einen 15 mL 10 kDa Filter und füllen Sie das Rohr an der Spitze mit Molekularbiologie Grade Wasser, damit die gesamte Verdünnung 15 mL.
  5. Reinigen Sie die DiI PNC (DiI-PNC) Lösung von DMSO und jede mögliche freie DiI Farbstoff durch ein Benchtop-Zentrifugation mit 15 mL 10 kDa Filter bei 3.900 x g für 5 min beschriftet.
    1. Wiederholen Sie Schritt 3.5 mindestens fünfmal.
  6. Filtern Sie die endgültigen DiI-PNC-Lösungen durch einen 20 nm Pore Größe Spritze Filter.
  7. Messen Sie die Extinktion des endgültigen DiI-PNC durch UV-VIS-Spektrophotometrie und berechnen Sie die Konzentration nach Bier-Lambert Gesetz (Abbildung 2). Näheres hierzu finden Sie unter Schritt 2.13.
  8. Bewahren Sie es im Kühlschrank bei 4 ° C für die weitere Verwendung.

(4) Infiltration der Pflanze Blätter mit PNC

  1. Fügen Sie 0,1 mL der Infiltration Puffer (100 mM TES, 100 mM MgCl2, pH 7.5, durch HCl eingestellt) in 0,9 mL 0,5 mM PNC oder DiI-PNC-Lösung und Wirbel es. Verwenden Sie eine Lösung aus 10 mM TES Infiltration Puffer als Negativkontrolle.
  2. Übertragen Sie auf eine sterile nadellosen Spritze 1 mL 0,2 mL der PNC oder DiI-PNC Infiltration Lösung. Tippen Sie auf, um mögliche Luftblasen zu entfernen.
  3. Abrufen der Pflanzenschutzmittels aus der Wachstums-Kammer kurz vor Infiltration mit Nanopartikeln möglich Spaltöffnungen Schließung unter Zimmer Lichtverhältnissen zu vermeiden.
  4. Messen Sie vor Infiltration der Chlorophyllgehalt von A. Thaliana Blätter mit ähnlicher Größe mit einem Chlorophyll Meter. Messen Sie jedes Blatt mit drei Wiederholungen (jedes replizieren, bestehend aus mindestens drei Messungen)14. Wählen Sie A. Thaliana mit ähnlichen Chlorophyllgehalt für die Infiltration Experiment verlässt.
  5. Infiltrieren Sie die Blätter langsam mit der vor kurzem hergestellte PNC oder DiI-PNC Lösung durch leichtes drücken die Spitze der nadellosen Spritze gegen die Unterseite der Blatt-Lamina (abaxial Seite) und drücken Sie den Kolben(Abbildung 3).
  6. Vorsichtig wischen Sie die überschüssige Lösung, die auf der Oberfläche des Blattes Lamina (Abbildung 3B) mit einer heiklen Aufgabe Wischer (Abb. 3C) bleibt und beschriften Sie die Pflanze. Verwenden Sie neue heikle Aufgabe Tücher für jede Gruppe von Blättern.
  7. Halten Sie die infiltrierten A. Thaliana auf der Bank für Blatt Anpassung und Inkubation mit PNC oder DiI-PNC für 3 h Pflanzen.
    Hinweis: Infiltrierten A. Thaliana Pflanzen sind dann bereit für den weiteren Einsatz (Abbildung 3D).

5. Vorbereitung des Blattproben für die konfokale Mikroskopie

  1. Roll eine erbsengroße Menge der Beobachtung über einen Radius von 1 cm (Abb. 4A) gel und dann breitete sie bis 1 mm dünn auf einen Glasobjektträger (Abbildung 4B) ist.
  2. Verwenden Sie einen Korken Borer (Durchmesser 0,3 cm) schneiden Sie einen kreisförmigen Querschnitt in der Mitte des Gels Beobachtung auf dem Objektträger (Abb. 4C).
  3. Füllen Sie den Schnitt auch komplett mit Perfluorodecalin (PFD) für tiefer und besser konfokale bildgebenden Auflösung im Blatt Gewebe.
  4. Verwenden Sie einen Korken Borer (Durchmesser 0,2 cm) zum Blattscheiben von angepassten DiI-PNC zu sammeln infiltriert A. Thaliana Pflanzen (Abbildung 4D).
  5. Montieren Sie die Blatt-Scheibe in der PFD gut gefüllt; die infiltrierte (abaxial) Seite des Blattes aufgedeckt.
  6. Setzen Sie ein Quadrat Deckglas auf der Blatt-CD und drücken Sie vorsichtig auf die Folie Deckglas gleichmäßig, mit dem Brunnen der Beobachtung Gel versiegeln und sicherzustellen, dass keine Luftblasen eingeschlossen (Abbildung 4E) bleiben.

6. Bildgebung DiI-PNC in Blatt Geweben durch konfokale Mikroskopie

  1. Verwenden Sie eine 40 X Objektiv in einem invertierten Laserscanning confocal Mikroskop.
  2. Legen Sie zwei bis drei Tropfen DdH2O auf der Oberseite 40 X Objektiv.
  3. Legen Sie die vorbereitete DiI-PNC infiltriert Blatt Probe Folie auf der Oberseite der invertierten 40 X Objektiv Objektiv.
    1. Stellen Sie sicher, das Deckglas Seite aber nicht das Glas schieben Sie Kontakt direkt mit dem DdH2O auf der Linse.
  4. Eine Region of Interest in der Probe unter dem Mikroskop mit Laserlicht oder Hellfeld zu finden.
  5. Starten Sie die Mikroskop-Software und schalten Sie die Argon-Laser (auf 20 % gesetzt).
  6. Festlegen der Lochkamera, eine optische Scheibe weniger als 2 µm und eine Linie Durchschnitt von 4 zu sammeln.
  7. Bild die Probe mit confocal Mikroskop Einstellungen: 514 nm Laseranregung (30 %); Z-Stapel Schnittdicke: 2 µm; PMT1: 550-615 nm (für DiI-PNC-Tomographie); PMT2: 700-800 nm (für die Chloroplasten Bildgebung).
  8. Nehmen Sie repräsentative konfokale Bilder von Blattproben von verschiedenen Individuen, ein Minimum von drei biologische repliziert.

(7) imaging PNC in Vivo ROS Aufräumvorgang konfokalen Mikroskopie

  1. Bereiten Sie 25 µM 2', 7'-Dichlorodihydrofluorescein Diacetat (H2DCFDA, ein Farbstoff zur Angabe einer allgemeinen ROS) und 10 µM Dihydroethidium (DHE, ein Farbstoff zur Anzeige von Superoxid-Anion) Farbstoffe in TES Infiltration Puffer (pH 7,5) in 1,5 mL Mikrozentrifugenröhrchen separat zu bestellen.
  2. Verwenden Sie einen Korken Borer (Durchmesser 0,2 cm), um Blatt zu sammeln Scheiben aus den angepassten PNC infiltriert A. Thaliana Pflanzen.
    1. Verwenden Sie die scharfe Spitze der Zange um drei bis vier Löcher auf den Blattscheiben Farbstoff Ladevorgang zu beschleunigen.
  3. Übertragung der Leaf Scheiben für Mikrozentrifugenröhrchen mit H2DCFDA und DHE separat und inkubieren Sie für 30 min unter Dunkelheit.
  4. Nach der Inkubation gel spülen das Blatt mit DdH2O dreimal discs und montieren es ins Glas gleiten mit Beobachtung (siehe Protokoll Abschnitt 5).
  5. Setzen Sie die Folie auf das konfokale Mikroskop und manuell zu fokussieren Sie, zu einer Region des Mesophyll Blattzellen. Details siehe Protokoll Abschnitt 6.
  6. Setzen die Blattscheiben, die UV-A (405 nm) Laser für 3 min ROS zu generieren und die Signaländerung Intensität ROS in Zeitreihen ("Xyt") pro Blatt Disc aufzeichnen.
  7. Die Blatt-Scheibe mit confocal Mikroskop Einstellungen Bild: 40 X Wasser Ziel; 496 nm Laseranregung; PMT1: 500-600 nm (für DHE und DCFDA Farbstoff-Erkennung); PMT2: 700-800 nm (für Chloroplasten-Erkennung). Verwenden Sie eine Anlage mit nur Infiltration Pufferlösung als der Negativkontrolle infiltriert.

(8) PNC Aufräumvorgang von H2O2in vitro

  1. Die Katze (Katalase) mimetische Aktivität des synthetisierten PNC in Vitro zu führen, indem Sie die Methoden in früheren Publikationen3,8,15
  2. Hinzufügen von 45,4 µL 1 X TES Infiltration-Puffer (10 mM TES, 10 mM MgCl2, pH 7.5, durch HCl eingestellt), PNC (60 nM, 3 µL), und H2O2 (2 µM, 1 µL) in einen Brunnen (weiße Rundboden 96-well-Platte), und mischen Sie es sanft durch pipettieren.
  3. Fügen Sie 10-Acetyl-3,7-Dihydroxyphenoxazine (arbeiten Konzentration 100 µM, 0,5 µL) und Meerrettich-Peroxidase (HRP; arbeiten Konzentration 0,2 U/mL, 0,1 µL) in den Brunnen sanft durch pipettieren mischen und 30 min. 10-Acetyl-3,7-Dihydroxyphenoxazine inkubieren reagiert mit H2O2 und in Resorufin in Anwesenheit von HRP umgewandelt wird.
    1. Wickeln Sie die Platte mit Aluminium-Folie, Licht während der Inkubation zu vermeiden.
    2. Bereiten Sie eine Negativkontrolle mit Reaktion Puffer oder Wasser, um H2O2zu ersetzen.
    3. Mit Ausnahme der Stammlösung bereiten Sie alle anderen Lösungen bei Umgebungstemperatur vor.
  4. Nach der Inkubation mit einem Lesegerät Platte überwachen die Extinktion bei 560 nm, Resorufin zu verwenden, geben Sie die Höhe der H2O2. Zeitregime auf 0, 2, 5, 10, 20 und 30 min festgelegt.

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Ergebnisse

PNC-Synthese und Charakterisierung .
PNC wurden synthetisiert, gereinigt und zeichnet sich im folgenden die Protokoll Abschnitt 2 beschrieben. Abbildung 1 A zeigt die Färbung der Cerium Nitrat, PAA, die Mischung aus Cerium Nitrat und PAA und PNC-Lösungen. Ein Farbwechsel von weiß bis hellgelb ist gesehen, nachdem PNC synthetisiert wird. Nach der Reinigung mit einem 10 kDa-Filter PNC zeichneten sic...

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Diskussion

In diesem Protokoll beschreiben wir PNC Synthese, Charakterisierung, Fluoreszenzfarbstoff Kennzeichnung und konfokale Imaging der Nanopartikel im Mesophyll Pflanzenzellen ihre in Vivo ROS Aufräumvorgang Aktivität aufweisen. PNC werden aus einer Mischung von Cerium Nitrat und Ammonium Hydroxid-PAA Lösung synthetisiert. PNC zeichnen sich durch Absorption Spectrophotomery und die Konzentration über Bier-Lamberts Gesetz ermittelt. Zeta mögliche Messungen bestätigt die negativ geladene Oberfläche des PNC zur Verbesse...

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Offenlegungen

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Danksagungen

Diese Arbeit wurde von der University of California, Riverside und USDA nationalen Institut für Lebensmittelwissenschaften und Landwirtschaft, Luke Projekt 1009710 JPG unterstützt. Dieses Material basiert auf Arbeit, unterstützt von der National Science Foundation unter Grant Nr. 1817363 zu JPG

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
Cer(III)-nitrat-HexahydratSigma-Aldrich238538-100G
Wasser in molekularbiologischer Qualität, CorningVWR45001-044 
Falcon 50 mL konische ZentrifugenröhrchenVWR14-959-49A
Poly (Acrylsäure) 1.800 mWSigma-Aldrich323667-100G
Fisherbrand Digital Vortex MixerFisher Scientific02-215-370
Fisherbrand Digital Vortex Mixer Zubehör, EinsatzhalterFisher Scientific02-215-391
Fisherbrand Digital Vortex Mixer Zubehör: Schaumstoffeinlagen-SetFisher Scientific02-215-395
Ammoniumhydroxid-LösungSigma-Aldrich05002-1L
PYREX Griffin Becher, graduiert, CorningVWR13912-149 
RCT basicIKA3810001
Eppendorf Mikrozentrifuge 5424VWR80094-126
Amicon Ultra-15 ZentrifugalfiltereinheitenMillipore-SigmaUFC901024
Allegra X-30 Serie TischzentrifugeBeckman CoulterB06314
UV-2600 SptecrophotometerShimadzuUV-2600 120V
Whatman Anotop 10 SpritzenfilterSigma-AldrichWHA68091102
BD Einwegspritzen mit Luer-Lok SpitzenFisher Scientific14-829-45
Zetasizer Nano SMalvern PanalyticalZen 1600
1,1′-Dioctadecyl-3,3,3′,3′-TetramethylindocarbocyaninperchloratSigma-Aldrich42364-100MG
Dimethylsulfoxid, ACSVWRBDH1115-1LP
Sunshine Mix #1 LC1Green Island Distributors, Inc5212601.CFL080P
Adaptis 1000ConvironA1000
TES, >99% (TitrationSigma-AldrichT1375-100G
MagnesiumchloridSigma-AldrichM8266-1KG
Air-Tite Vollkunststoff-Norm-Ject-SpritzeFisher Scientific14-817-25
Kimberly-Clark Professional Kimtech Science Kimwipes Delicate TaskWipers Fisher Scientific06-666A
Carolina Observation GelCarolina132700
Corning Objektträger, einseitig mattiert, ein EndeSigma-AldrichCLS294875X25-72EA
Korkbohrer Sets mit GriffenFisher ScientificS50166A
PerfluordecalinSigma-AldrichP9900-25G
Micro Cover Glasses, Square, No. 1VWR48366-045
Leica Laser Scanning Konfokalmikroskop TCS SP5Leica MicrosystemsTCS SP5
2′,7′-DichlorfluorescindiacetatSigma-AldrichD6883-250MG
DihydroethidiumSigma-AldrichD7008-10MG
Fisherbrand Premium Mikrozentrifugenröhrchen: 1,5 mLFisher Scientific05-408-129
Eppendorf Uvette KüvettenSigma-AldrichZ605050-80EA
ChlorophyllmessgerätKonica MinoltaSPAD-502

Referenzen

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