Hier präsentieren wir ein Protokoll, um Blutproben von der Ratte subclavia Vene zu sammeln.
Ein Abonnement von JoVE ist erforderlich, um diesen Inhalt anzuzeigen. Melden Sie sich an oder beginnen Sie noch heute mit einer kostenlosen Testphase.
Methodenartikel
Vene subclavia Punktion als eine Alternative Methode zur Probe Blutentnahme bei Ratten
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Blutentnahme mit genügend Blutvolumen ist unerlässlich im Tierversuch. Blutentnahme aus der Vene Schweif von Ratten ist beliebt und weniger Stress im Vergleich zu anderen aggressiveren Methoden wie Retro-Orbital Plexus Kollektion probieren. Allerdings ist dieses Blut Erfassungsmethode manchmal durch eine unbefriedigende Erfolgsquote begrenzt. Hier stellen wir eine Methode für die Blutentnahme durch die Vene subclavia Punktion. Die subclavia Vene befindet sich direkt unter das Schlüsselbein und diese Ader ist groß genug, um das Volumen der Blutentnahme zu erfüllen. Unsere Ergebnisse zeigen, dass diese Methode sicher und anwendbar für Sammlung Blutabnahme mit der benötigten Blutvolumen. Blutentnahme durch die Vene subclavia Punktion könnte als eine alternative Blut Erfassungsmethode bei fehlgeschlagenen Schweif Vene Blut Stichproben bei Ratten dienen.
Einleitung
Blutentnahme ist in Tierversuchen unerlässlich. Die Ziel-Adern für die Blutentnahme gehören die Retro-Orbital-Plexus, die Halsschlagader der Stammvenen, Tail Blutgefäße und die Halsschlagader1,2,3,4. Manchmal könnte Blut der abdominalen Aorta, Vena Cava oder sogar das Herz5,6,7entnommen werden. Bei solchen Gelegenheiten die Tiere geopfert werden müssen und nicht für nachfolgende Beobachtung verwendet werden; so, mit diesen Methoden sind weniger in der täglichen experimentelle Arbeit. Blutentnahme aus der Vene Schweif von Ratten ist beliebt und weniger Stress im Vergleich zu den oben genannten Methoden8.
Blutentnahme aus der Vene Schweif ist jedoch manchmal durch eine unbefriedigende Erfolgsquote begrenzt. Gelegentlich ist es auch schwierig, genügend Blutvolumen von dieser Methode zu erhalten. Die subclavia Vene ist groß genug und befindet sich direkt unter dem Schlüsselbein-Knochen, läßt Vene subclavia Punktion sich eine alternative Methode für das um Blut zu probieren, wenn routinemäßige Blut Erhebungsmethoden nicht erfolgreich sind. Hier stellen wir eine Methode der Blutentnahme mittels Vene subclavia Punktion bei Ratten.
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Protokoll
Diese Studie wurde von der zentralen Ethikkommission South University für Animal Research aus dem zweiten Xiangya Krankenhaus (Changsha, China) genehmigt. Das Manuskript wurde nach Ankunft vorbereitet (Animal Research: Berichterstattung von In Vivo Experimente) Leitlinien-9.
1. Material und Tier Vorbereitung
- Benötigte Materialien vorbereiten: Klebeband, Epilieren Agent, 75 % Ethanol, Blutsammelröhrchen, 2,5 mL Spritze mit Nadel (24 G, 0,6 x 25 mm), Haar Rasierer, elektronische Waage und Messgerät (siehe Tabelle der Materialien) verbunden.
- Verwenden Sie 20 Sprague-Dawley (SD) Ratten, im Alter von 8 bis 10 Wochen und einem Gewicht von 153-200 g (siehe Tabelle der Materialien). Pflegen Sie gemäß dem Leitfaden für die Pflege und Verwendung von Labortieren10Ratten.
- Haus Ratten unter Standardbedingungen mit freiem Zugang zu Nahrungsmitteln und Trinkwasser. Halten sie in 530 cm2 Käfige mit Holz-Rasur-Bettwäsche (2 Ratten pro Käfig). Halten Sie Tiere in einer temperaturgesteuerten Raumtemperatur bei etwa 25 ° C.
- Induzieren Vollnarkose (Natrium-Pentobarbital 40 mg/kg) bei allen Tieren durch intraperitoneale Injektion vor der Vene subclavia Punktion.
- Legen Sie die Ratte in Rückenlage. Befestigen Sie den hinteren Gliedmaßen in einer bequemen Position und befestigen Sie der oberen Extremität parallel zur Körperachse direkt neben dem Stamm.
Hinweis: Keine mechanische Lüftung benötigt für dieses Verfahren (Abbildung 1). - Reinigen Sie beide Seiten des Raumes Infraclavicular Fell entfernen (mit Haar Rasierer und Epilieren Agent, siehe Tabelle of Materials) und sichtbaren Schmutz. Wischen Sie den Hals und thorakalen Haut mit 75 % Ethanol. Halten Sie den Bereich für die Punktion, sauber und trocken mit Gaze.
2. Blut Inkasso
Hinweis: Beide Seiten der subclavia Ader eignen sich für Punktion und hier wählen wir die Rechte Seite für Punktion. Die Lage und Richtung des rechten Schlüsselbeins werden durch die Betreiber linken Daumen (Abbildung 2) identifiziert. Suprasternal Gruben sind sanft mit dem Zeigefinger berührt, als die Suprasternal Gruben geht in die Richtung der Nadel (Abbildung 2).
- Spülen einer sterilen 2,5 mL Spritze mit Heparin-Lösung (10 IU/mL).
- Suchen Sie die Punktionsstelle 0,5 mm kaudalen zur äußeren Umgebung: 1/3 des rechten Schlüsselbeins (Abbildung 3). Verschieben Sie die Spritze sanft in die Haut an der Einstichstelle. Sobald die Nadel die Haut Infraclavicular tritt, gelten Sie Unterdruck mit Rechten des Betreibers (Abbildung 4).
Hinweis: Die durchschnittliche und maximale Blutvolumen sind 1,0 mL 1,4 mL bzw.. Die Richtung der Nadel sollte befindet sich in Richtung der Suprasternal Gruben und fast parallel zum Schlüsselbein nur hintere darauf. In der Regel kann der subclavia Vene erreicht werden, durch die Nadel ca. 2 mm in diese Richtung. Sobald die Nadel die Vene gelangt, wird Blut die Spritze Unterdruck.- Unterdruck bis genügend Volumen des Bluts gezeichnet wird (Abbildung 5).
- Wenn die Blutentnahme subclavia Vene nicht erfolgreich ist, ziehen Sie die Nadel heraus zum subkutanen Bereich und passen Sie die Richtung der Nadel leicht innen auf dem Brustbein.
- Wenn drei Versuche fehlschlagen, vermeiden die subclavia Vene von der gleichen Seite und verwenden der kontralateralen Seite für die Blutabnahme.
- Entfernen Sie nach der Blutentnahme die Punktionsnadel, und üben Sie Druck auf die Punktionsstelle für 1-2 Minuten, um Blutungen zu stoppen.
Hinweis: Der Druck muss sehr sanft zu ersticken zu verhindern.
3. Blut Probe Verarbeitung
- Übertragen Sie die Blutprobe in ein Antikoagulans-beschichtetem Vakuumröhre (mit EDTA) und Zentrifuge für 10 min bei 1600 X g Plasma zu sammeln.
- Aspirieren des Überstands in ein sauberes Röhrchen und Store bei-80 ° C (Abbildung 6).
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Ergebnisse
Insgesamt 20 SD-Ratten (männliche n = 10, weibliche n = 10) wurden hier verwendet. Blut Collectionwas durchgeführt, indem qualifizierte Betreiber, die mehr als 20 Blut Kostproben aus der subclavia Vene an Ratten durchgeführt haben und die Anfänger-Betreiber, die keine Vene subclavia Punktion haben Erfahrung in Ratten oder andere Tiere. Vor Operationen beobachtete Anfänger mindestens 3 Verfahren durch qualifiziertes Personal durchgeführt.
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Diskussion
Hier stellen wir eine alternative Methode für die Extraktion von Blut aus der Vene subclavia und wir zeigen, dass diese Methode möglich, sichere und anwendbar für die Blutentnahme bei Ratten. Diese Methode wird von der subclavia Vene Punktion im Herzschrittmacher Blei Implantation für Patienten11abgeleitet. Die subclavia Vene liegt nur posterior und kaudalen, das Schlüsselbein und ist eine Fortsetzung der axillären Ader. Er verläuft von der äußeren Grenze der ersten Rippe auf den medialen Rand des...
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Offenlegungen
Diese Arbeit wurde durch den Zuschuss aus dem National Natural Science Foundation von China Nr. 81670269, Nr. 81500355 und Nr. 81500226 unterstützt.
Danksagungen
Keiner erklärt.
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Ratten | Hunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd (Changsha, Provinz Hunan, China) | ||
| Statische Software | SPSS Statistics 17 | ||
| Epiliermittel | Frankreich Yi Sha Cosmetics Co., Ltd (Guangzhou, Provinz Guangdong, China) | ||
| 2,5 ml Spritze | Shandong Weigao Group Medical Polymer Co., Ltd (Weihai, Provinz Shandong, China) | ||
| Haarrasierer | Shanghai FLYCO Electric Co., Ltd (Shanghai, China) | ||
| Klebeband | 3M Deutschland GmbH (EdisonstraBe 6,59157 Kamen, Deutschland) | ||
| Pentobarbital-Natrium | Merck | ||
| 75% Ethanol | Abteilung für Pharmazie, Das zweite Xiangya Krankenhaus der Central South University | ||
| Blutentnahmetube | Hubei Jinxing Technologie & Development Co., Ltd (Wuhan Hubei Province, China) (2ml) | ||
| elektronische Waage | Dongguan Shengheng Electronics Co., Ltd (Dongguan, Guangdng Province, China) | ||
| Canvas Handschuhe | für Anästhesie | ||
| Hepain | Nanjing Xinbai Pharmaceutical Co., Limited (Nanjing, Provinz Jiangsu, China) (2mL, 12500 IE) | ||
| physikalische Kochsalzlösung | Hunan Kelun Pharmaceutical Co., Ltd (Yueyang, Provinz Hunan, China) (100ml) |
Referenzen
- Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. Blood sample collection in small laboratory animals. Journal of Pharmacology, Pharmacotherapeutics. 1 (2), 87-93 (2010).
- Korfmacher, W., et al. Utility of capillary microsampling for rat pharmacokinetic studies: Comparison of tail-vein bleed to jugular vein cannula sampling. Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 76, 7-14 (2015).
- Feng, J., et al. Catheterization of the carotid artery and jugular vein to perform hemodynamic measures, infusions and blood sampling in a conscious rat model. Journal of Visualized Experiments. (95), (2015).
- Wickremsinhe, E. R., Renninger, M., Paulman, A., Pritt, M., Schultze, A. E. Impact of Repeated Tail Clip and Saphenous Vein Phlebotomy on Rats Used in Toxicology Studies. Toxicologic Pathology. 44 (7), 1013-1020 (2016).
- Takahashi, M., Makino, S., Kikkawa, T., Osumi, N. Preparation of rat serum suitable for mammalian whole embryo culture. Journal of Visualized Experiments. (90), e51969(2014).
- Cochran, B. J., et al. Determining Glucose Metabolism Kinetics Using 18F-FDG Micro-PET/CT. Journal of Visualized Experiments. (123), (2017).
- Beeton, C., Garcia, A., Chandy, K. G. Drawing blood from rats through the saphenous vein and by cardiac puncture. Journal of Visualized Experiments. (7), 266(2007).
- Zou, W., et al. Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System. Journal of Visualized Experiments. (130), (2017).
- Kilkenny, C., Altman, D. G. Improving bioscience research reporting: ARRIVE-ing at a solution. Lab Animal. 44 (4), 377-378 (2010).
- National Institute of Health. Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. , 8th, National Academies Press (US). US (Washington DC). (2011).
- Antonelli, D., Feldman, A., Freedberg, N. A., Turgeman, Y. Axillary vein puncture without contrast venography for pacemaker and defibrillator leads implantation. Pacing and Clinical Electrophysiology. 36 (9), 1107-1110 (2013).
- Luis, A. L., et al. Microscopic magnetic resonance imaging of the thoracic venous system in rats with congenital diaphragmatic hernia. Pediatric Surgery International. 27 (2), 175-180 (2011).
- Tsukamoto, A., Serizawa, K., Sato, R., Yamazaki, J., Inomata, T. Vital signs monitoring during injectable and inhalant anesthesia in mice. Experimental Animals. 64 (1), 57-64 (2015).
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Nachdrucke und Genehmigungen
