Gleichzeitige Untersuchung der Rekrutierung von Monocyte Subpopulationen unter Strömung In Vitro

Patricia Ropraz; Beat A. Imhof; Thomas Matthes; Bernhard Wehrle-Haller; Adama Sidibé

doi:10.3791/58509

Methodenartikel

Gleichzeitige Untersuchung der Rekrutierung von Monocyte Subpopulationen unter Strömung In Vitro

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DOI:

10.3791/58509

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26. November 2018

Patricia Ropraz¹ , Beat A. Imhof² , Thomas Matthes¹ , Bernhard Wehrle-Haller³ , Adama Sidibé³

¹Hematology service, Centre Médical Universitaire (CMU), Medical faculty, University of Geneva, ²Department of Pathology and Immunology, Centre Médical Universitaire (CMU), Medical faculty, University of Geneva, ³Department of Cell Physiology and Metabolism, Centre Médical Universitaire (CMU), Medical faculty, University of Geneva

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Hier präsentieren wir Ihnen eine integrierte Protokoll, die Monocyte Subpopulation Handel unter in-vitro-Fluss durch Verwendung von spezifischen Oberflächenmarker und konfokale Fluoreszenzmikroskopie misst. Dieses Protokoll kann sequentielle Rekrutierung Schritte sowie zu erkunden, andere Leukozyten-Subtypen mit anderen spezifischen Oberflächenmarker Profil verwendet werden.

Zusammenfassung

Die Rekrutierung von Monozyten aus dem Blut zu gezielten peripheren Geweben ist entscheidend für den Entzündungsprozess bei Gewebeverletzungen, Tumorentstehung und Autoimmunerkrankungen. Dies wird durch einen Prozess der Aufnahme von freien Informationsfluss auf der luminalen Oberfläche des aktivierten Endothelzellen, gefolgt von ihrer Haftung und Transendothelial Migration (Seelenwanderung) in das darunter liegende Gewebe der betroffenen erleichtert. Allerdings sind die Mechanismen, die die bevorzugte und Kontext-abhängige Einstellung von Monocyte Subpopulationen unterstützen noch nicht vollständig verstanden. Daher haben wir eine Methode entwickelt, die ermöglicht die Einstellung von verschiedenen Monocyte Subpopulationen gleichzeitig visualisiert und unter Strom gemessen werden. Diese Methode, basierend auf Time-Lapse confocal Imaging ermöglicht die eindeutige Unterscheidung zwischen Anhänger und transmigrated Monozyten. Hier beschreiben wir, wie diese Methode verwendet werden kann, um gleichzeitig die Rekrutierung Kaskade von Pro-angiogenen und nicht-angiogenen Monozyten in-vitro-Studie. Darüber hinaus kann diese Methode erweitert werden, um die verschiedenen Schritte der Rekrutierung von bis zu drei Monocyte Populationen zu studieren.

Einleitung

Monozyten bilden eine phagocytic Komponente der angeborenen Immunität, die wichtig für die Bekämpfung von Krankheitserregern, Bereinigen von beschädigtem Gewebe, Angiogenese und der Pathophysiologie von vielen Krankheiten, einschließlich Krebs¹^,²^,³. Monozyten sind Knochenmark gewonnenen Zellen bestehend aus heterogener Subpopulationen, die im Blut zirkulieren, aber können an den Ort der Entzündung im peripheren Gewebe durch spezifische molekulare Mechanismen rekrutiert werden. Die Rekrutierung Kaskaden von Monozyten, wie bei Leukozyten impliziert in der Regel verschiedene Sc....