Methodenartikel

In-vitro- Methode zur Kontrolle Konzentrationen Halogenkohlenwasserstoffe in kultivierten alveolären Epithelzellen

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DOI:

10.3791/58554

23. Oktober 2018

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Wir beschreiben eine einfache Protokoll speziell für die präzise und kontrollierte Konzentrationen von Sevofluran oder Isofluran in-vitro- zu erreichen, um unser Verständnis der Mechanismen der epithelialen Lungenversagen zu verbessern und Roman testen Therapien für akute Atemnotsyndrom.

Zusammenfassung

Akute Atemnotsyndrom (ARDS) ist ein Syndrom der diffuse alveoläre Schädigung mit eingeschränkter alveoläre Flüssigkeit Clearance und schwere Entzündungen. Die Verwendung von halogenierten Substanzen wie Sevofluran oder Isofluran, für die Sedierung von Patienten der Intensivstation (ICU) kann verbessern Gasaustausch, alveoläre Ödem reduzieren und dämpfen Entzündungen bei ARDS. Es fehlen jedoch Daten über die Nutzung der inhalierten Mittel zur kontinuierlichen Sedierung auf der Intensivstation zu Lungenschäden vorzubeugen oder zu behandeln. Um die Auswirkungen von halogenierten Agenten auf alveolären Epithelzellen "physiologischen" Bedingungen zu untersuchen, wir beschreiben ein einfaches System für Zellkulturen an der Grenzfläche Luft-Flüssigkeit und setzen sie an halogenierten Agenten bieten präzise kontrollierte "Luft" Brüche und "Medium" Konzentrationen für diese Mittel. Wir entwickelten eine versiegelte luftdichten Kammer in der Platten mit menschlichen alveoläre verewigt Epithelzellen einen präzisen, kontrollierten Bruchteil von Sevofluran oder Isofluran verwenden einen kontinuierlichen Gasstrom durch eine Narkose Maschine-Schaltung zur Verfügung gestellt ausgesetzt sein könnten. Zellen wurden 24 Stunden lang 4 % Sevofluran und Isofluran 1 % ausgesetzt. Gas-Massenspektrometrie wurde durchgeführt, um die Konzentration der halogenierten Wirkstoffe gelöst in das Medium zu bestimmen. Nach dem ersten waren Stunden, die Konzentrationen von Sevofluran und Isofluran mittelfristig 251 mg/L und 25 mg/L, bzw.. Die Kurven der Konzentrationen von Sevofluran und Isofluran aufgelöst in das Medium zeigten ähnliche Kurse im Laufe der Zeit mit einem Plateau erreicht eine Stunde nach der Exposition.

Dieses Protokoll wurde speziell entwickelt, um präzise und kontrollierte Konzentrationen von Sevofluran oder Isofluran in Vitro , unser Verständnis der Mechanismen, die in epithelialen Lungenschädigung bei ARDS zu verbessern und neue Therapien für test erreichen die -Syndrom.

Einleitung

Akute Atemnotsyndrom (ARDS) ist ein klinisches Syndrom gekennzeichnet durch diffuse alveoläre Schädigung, Lungenödem und Linksventrikuläre respiratorische Insuffizienz. Obwohl ARDS mehr als 10 % der Intensivstation (ICU) Kinobesuche und fast 25 % der ICU-Patienten, die eine mechanische Lüftung darstellt, ist es noch ein unter anerkannten Herausforderung für Kliniker, mit einer Krankenhaus-Mortalität von 35-45 %1. Trotz intensiver Forschung ist die Identifizierung eines effektiven ARDS pharmakologische Therapie oder Prävention bisher fehlgeschlagen. Zwei wichtige Funktionen tragen zur Mortalität bei ARDS: alveoläre Flüssigkeit Clearance (AFC) (<....

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Protokoll

(1) Kultur der alveolären Epithelzellen (hAELVi)

  1. Auftauen
    1. 4 mL Anbau Ready-to-Use menschlichen alveoläre epithelialen (HuAEC) Medium in ein Kunststoffrohr 15 mL Pipette und schnell Auftauen das Fläschchen in einem vorgeheizten Wasserbad (37 ° C).
    2. Übertragen Sie die aufgetauten Zellsuspension auf einer 15 mL-kunststofftube mit 4 mL des Mediums vor die Röhre bei 200 X g für 5 min zentrifugieren.
    3. Den überstand abgesaugt und Aufschwemmen der Zelle Pellet mit 5 mL des Mediums Anbau. Übertragen Sie anschließend die Zellen auf einem T25-Kolben.
    4. Pflegen Sie die Zellen unter Standardbedingungen (5 % CO2, 95 % befeuc....

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Ergebnisse

Die Konzentrationen von Sevofluran und Isofluran, die das Medium im Laufe der Zeit aufgelöst, sind in Tabelle 1 und Tabelle 2, ausgewiesen.

Die Kurse der Sevofluran und Isofluran Konzentrationen im Medium waren im Laufe der Zeit ähnlich. Unmittelbar nach die erforderliche Konzentration von halogenierten Agent festgelegt wurde, erhöhte Konzentrationen im Laufe der ersten Stunde. Dann wurde ein Pl.......

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Diskussion

Unser Protokoll beschreibt eine einfache Methode um Zellen auf einen genauen Bruchteil eines halogenierten Anästhetikum wie Sevofluran und Isofluran verfügbar zu machen. Darüber hinaus berichten wir hier – zum ersten Mal – eine strenge Korrelation zwischen der Gas-Anteil und die Konzentration von Sevofluran und Isofluran in das Kulturmedium selbst. Dieser grundlegende Schritt ermöglicht jetzt sicher unsere luftdichten Kammer nutzen, um die Auswirkungen dieser halogenierte Stoffe in einer kultivierten Monoschicht der mens.......

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Offenlegungen

Die Autoren erklären, dass sie keine finanziellen Interessenkonflikte.

Danksagungen

Die Autoren erkennen Regionalrats Auvergne ("Programm Nouveau Chercheur De La Région Auvergne" 2013) und der französischen Agence Nationale De La Recherche und die Richtung Générale de L'Offre de Soins ("Programme de Recherche Translationnelle de Santé" ANR-13-PRTs-0010) für die Stipendien. Die Geldgeber hatten keinen Einfluss im Studiendesign, Durchführung und Analyse oder bei der Erstellung dieses Artikels.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
SevofluranBaxterVon Experimenten mit Sevofluran oder Isofluran während der Schwangerschaft sollte dringend abgeraten werden
IsofluranVirbacVon Experimenten mit Sevofluran oder Isofluran während der Schwangerschaft sollte dringend abgeraten werden
Menschliche AlveolenepithelzellenInScreenexINS-CI-1015
huAEC Medium ( gebrauchsfertig)InScreenexINS-ME-1013-500ml
Kreislauf für AnästhesiemaschineDrägerFabius
GasanalysatorDrageerVamos Plus
AnästhesiegasfilterSedanaMedicalFlurAbsord
Beheizter HumfiererFisher& PaykelMR850
Chamber Curver00012-416-00
Gaschromatographie gekoppelt mit MassendetektionThermo Fisher Scientific, San Jose, CA, USATrace 1310 mit TSQ 8000evo
Quarzglassäule (30 m x 1,4 μ m, 0.25 mm ID)Restek, Lisses, FrankreichRxi-624Sil MS

Referenzen

  1. Bellani, G., Laffey, J. G., et al. Epidemiology, Patterns of Care, and Mortality for Patients With Acute Respiratory Distress Syndrome in Intensive Care Units in 50 Countries. JAMA:T Journal of the American Medical Association. 315 (8), 788-800 (2016).
  2. Thompson, B. T., Chambers, R. C., Liu, K. D.

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Schlagwörter

Luft Fl ssigkeits Grenzfl cheSevofluran ExpositionIsofluran ExpositionGasmassenspektrometrieNarkoseger te Kreislaufhermetische PolypropylenkammerGasflusssteuerungKonzentrationsplateau

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